Monoclonal Antibodies Binding To Avian Influenza Virus Subtype H5 Haemagglutinin And Uses Thereof

The text shown here has been derived from the original document's published images via a process of ´optical character recognition (OCR). Due to variations in image quality, and the imperfect nature of OCR process, this text may not be 100% accurate. To view the original published images, please refer to the PDF.


(12) 按 照
(19) i 界
囤阮

利

釣所公

的匡阮

戶枝組 鍥
局

(43) 匡 阮 公 布 日

(10)

阮公 布弓

2008 年 12 月 2 4 日 (24.12.2008)

PCT

W O 2008/154813 A l
LIMITED) [CN/CN], 中 固海 南 省 海 口市 金 盎 工 仙 匡 金 牛 路 6 弓, Hainan 570216 (CN)
(72) 友 明 人 及 (75) 友 明 人 申清 人 (伏 吋 吳 囤 ) : 陳 毅 歆 (CHEN, Yixin) [CN/CN], 中 固 福 建 省 廈 口市 思 明 匡 思 明 南 路 422 步 文 新 (LUO, Wenxin) 弓, Fu ian 361005 (CN) [CN/CN], 中 固 福 建 省 廈 口市 思 明 南 路 422 弓, Fu ian 361005 (CN) 張 罕 (ZHANG, Jun) [CN/CN], 中 固 福 建 省 廈 口市 思 明 匡 思 明 南 路 422 弓, Fu ian 361005 (CN) 夏 于 邵 (XIA, Ningshao) [CN/CN], 中 固 福 建 省 廈 口市 思 明 南 路 422 弓, Fu ian 36 1005 (CN) 管 秩 (GUAN, Yi) [CN/CN], 中 固 福 建 省 廈 口市 思 明 南 路 422 弓, Fujian 361005 (CN) 陳 濟 霖 (CHEN, Honglin) [CN/CN], 中 固 福 建 省 廈 口市 思 明 南 路 422

(5i
C07K 16/18 (2006 01) C07K 16/46 (2006 01) C12N5/12 (2006 01) C12N 15/13 (2006 01) C12N 15/63 (2006 01) GOlN 33/53 (2006 01) GOlN 33/569 (2006 01)
(21) 回 阮 申清 骨 (22) 回 阮 申清 日 (25) 申清 晤 言 (26) 公 布 晤 言 (30) 伉 先 杖 200710111167 5
2007 年 月 15 日 (15 0 6 2007)

A61K 39/395 (2006 01) C07 7/06 (2006 01) C07 7/ (2006 01) 3 / 0 (2006 01) 3 7 0 (2006 01) 31/16 (2006 01) C07K 14/11 (2006 01)
PCT/CN2008/001153

2008 年 6 月 16 日 (16 0 6 2008)
中艾 中艾

弓, Fu ian 361005 (CN)
(74) 代 理 人 中 回 回 阮 貿 易 促 迸 委 員 合 寺 利 商 棕 事 各 所 (CCPIT PATENT AND TRADEMARK LAW OFFICE), 中 固 北 京 市 草 成 口外 大 街 2 弓方 虛 新 世 界 仁 場 8 尾 , Bei ing 100037 (CN)

CN

(71) 申清 人 ( 吋 除 吳 囤 外 的 所 有 指 足 ) : 廈 鬥 大 羊 (XIAMEN UNIVERSITY) [CN/CN], 中 固 福 建 省 廈 I 市 思 明 匡 思 明 南 路 422 弓, Fujian 361005 (CN) 莽 生 堂 有 限 公 司 (YANG SHENG TANG COMPANY

(81) 指 定 因 ( 除 另 有 指 明 , 要 求 每 神 可提 供 的 回 家 保 打 ) : AE, AG, AL, AM, AO, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BH, BR, BW, BY, BZ, CA, CH, CN, CO, CR, CU,
[几 穿 頁 ]

(54) Title: MONOCLONAL ANTIBODIES BINDING T O AVIAN INFLUENZA VIRUS SUBTYPE H 5 HAEMAGGLU TININ AND USES THEREOF

(54

i

.

(57) Abstract: The present invention provides monoclonal antibodies that speci cally bind to the hemagglutinin (HA) of avian influenza virus subtype H5, as well as monoclonal antibodies capable of blocking at least 50% of the HA binding activity of these monoclonal antibodies Such monoclonal antibodies are useful in the detection, diagnosis, prevention and treatment of avian influenza virus, especially avian influenza virus subtype H 5 The present invention also provides hybπ doma cell lines, isolated nucleic acid molecules, and short peptides related to the monoclonal antibodies provided herein, and pharmaceutical compositions, medical diagnostic apparatuses and kits containing the monoclonal antibodies provided herein (57)

本 友 明提 供 了 可 特 弄 性 結 合

H5

亞 型 禽 流 感 病 毒血 凝 素 ( HA ) 蛋

及 白 羊 克 隆抗 休 , 可 阻 晰 至 少 5 0 的羊 克 隆 抗 休 勻 H5 亞 型 禽 流 感 病 毒血 凝 素 ( HA ) 蛋 白鈷 合 活 性 羊 克 隆 抗 休 . 羊 克 隆 抗 休 可 用 孩
于採 測 珍 晰 預 防 和 治 打 禽 流 感 病 毒 特 別 是 H5 正型 禽 流 感 病 毒 .

本 友 明 也提 供 了相 芙 的 柴 交 瘤 細 胞 株

分 萬 的核 酸 分 子 和

肢以

及 其 含 核 羊 克 隆抗 休 的 釣 物 組 合 物 和 匡 釣 珍 晰

各 和試 荊 盒 。

CZ, DE, DK, DM, DO, DZ, EC, EE, EG, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, GT, HN, HR, HU, ID, IL, IN, IS, JP, KE, KG, KM, KN, KP, KR, KZ, LA, LC, LK, LR, LS, LT, LU, LY, MA, MD, ME, MG, MK, MN, MW, MX, MY, MZ, NA, NG, NI, NO, NZ, OM, PG, PH, PL, PT, RO, RS, RU, SC, SD, SE, SG, SK, SL, SM, SV, SY, TJ, TM, TN, TR, TT, TZ, UA, UG, US, UZ, VC, VN, ZA, ZM, ZW
(84) 指 定 回 ( 除 另 有 指 明 , 要 求 每 神 可 提 供 的 地 匹 保 打 ) : ARIPO (BW, GH, GM, KE, LS, MW, MZ, NA,

SD, SL, SZ, TZ, UG, ZM, ZW), 歐 立 (AM, AZ, BY, KG, KZ, MD, RU, TJ, TM), 歐 圳 (AT, BE, BG, CH, CY, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, FR, GB, GR, HR, HU, IE, IS, IT, LT, LU, LV, MC, MT, NL, NO, PL, PT, RO, SE, SI, SK, TR), OAPI (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GQ, GW, ML, MR, NE, SN, TD, TG)
本 回阮 公 布:

—

包 括 囤 仟栓 索 扳告 包 括 以 屯 子形 式分升 布 的坑 明 卡 序 列 表鄙 分 仁 要 求 可 囤 仟 局 茨得

拮合

出立型 禽 流 感病 毒 血 凝 素 蛋 白的羊克 隆抗休及其座用

友 明領 域
000
(
H

本 友 明 涉 及 可特 弄 性 鈷 合

亞 型 禽 流 感 病 毒血 凝 素

) 蛋 白之羊 克 隆 抗 休 , 其 保 守 性 交 弄 休 或 活 性 片 段 , 其 多 及 或

肢 或 多 肢 矣 似 物 的相 夫 蝙 碼 序 列 ,或 戶 生 所 迷 羊 克 隆 抗 休 的 匆 胞

株 , 座 用 咳 抗 休 或 片 段 用 于 珍 析 、 預 防 占治 行 的 方 法 和 用 途 。 及
背 景技木

年在 香 港 爆 友 了人感 染
H N1

N

研 禽 流 感 病 毒 , 究 昱 示咳

禽 流 感 病 毒具有 的
(a

奈基 因 片 段 全部 未 源 于 歐亞 禽 矣 , 且保 井

留 了結 合

) 唾 液 酸 受 休 的 能 力 , 示 出 了禽 流 感 病 毒 的典 型 昱

特征

o ov ch
,

M

.

e

.
年
N

oJ
年的 H
病
N

.

在 屠 宰 了香 港 所 有 的 家 禽 后 ,19

禽 流 感 病 毒仞底 被 根

除

。

然而

9

goos e /

a ngdong /

/6
7

HN

毒的主要未源毒株 ) 在 中 團 京 南 部 持 瑛 流 行 ( a u he
6

. N. a.
Sc

e
K

1

.,
oJ

K oJ
20

07

ebs

e

. ,.
N

e

而且
a n,
0

年的 H

病毒

很 快 就 被 不 同 的基 因 型 所 取 代
了山

. e
HN

a

. ,

o c 帖 J ca

9

)8

,核 基 因 型 病 毒吋 于 嗚具 有 高
病 毒再 次 通 迂屠 宰 家

致 死 率 ,而 吋 于 鴨卸是 非 致 死 性 。 迭 些

禽 而 根 除 ,直 到

0

年 才 出 現 了 新 基 因 型 的 替 代 病 毒株 。 在
保 有 相 似 的抗 原
(

年到

00

年之 間 , 些 木 同 基 因 型 的 病 毒株 的 迷
卻 出 現 了 明 昱 的抗 原 漂 移
SC
2

但 性 , 是到 了 0 0 年

ua n
)

ea

,

,
o

P oc

Ma

J

ca

,
00

0(

a

ez

.e .

1

.

K

o

.

8( )

9

00

年 晚期 的

HN

基 因 型 的昱 著 特 魚 就 是 它 吋 于 鴨和其 他 水 禽 具

有 很 高 的 致 死 率 , 迷 在 自 然 界 是 十分 罕 見 的 而
亡 事 件 友生 在

年 ,占 吋

e

n/ o h

上 一次 大 量 水 禽 死 N ) 手致 ca /

大量 燕 鴨 的 死 亡 。

在 00 年
染 (Pe

s

J. e

.

月 前期 , 港 的 一戶 家 庭 再 次 爆友 了 H N1 病 毒感 香

a

. La ce

00

90

6

咳

戶 女 几 在 坊 同 福 建 吋 死 于 不 明 原 因 的呼 吸 道 感 染

父 辛 和 几 子在 回
孩 病 毒株 抗 原
20 0

到 香 港 后 即 友 生 了 急 性 呼 吸道 疾 病 。 最 終 父 辛 去 世 , 子 八 病 中 恢 几

夏 。 父 辛 和 几 子都 被 硝 珍 力 感 染 了 H N 流 感 病 毒
病 毒株 十 分相 似

性 和 分 子 水 平 上 占那 些 抗 原 漂 移 后 吋 于 鳩 和 鴨 均 力 高 致 死 病 毒 的

, P uan , . a . o 肋 J dc a 扔 e

10
0
包 年亞 洲 囚 家 出 現 了前 所 未有 的 大規模 禽 流 感 大 流 行 , 括

中 固 、 日本 、 蚌 固 、泰 郵 、, 南 、 印度 尼 西 亞 、 束 埔 寨 和老 捉 出 現 越

的

N

巴基 斯 坦 出 現 的 H N

和 台 沿 省 出現 的 H N

。

迷 些 大規

模 的 禽 流 感 病 毒 流 行 手 致 了 家 禽 的 大量 被 手 , 其 是 嗚 。 截 至 到 目 尤

前 ,迷 些 友 生 大規 模 流 行 的 因 家 大 多 出 現 的 人 感 染 禽 流 感 病 毒 病
例 , 且手 致 了 不 少 患 者 死 亡 。 迷 些 井
N

病 毒 首 先在

00

年

月 香 港 的候 冉 水 禽 中友現 , 吋 死 亡 的 白禽 、友巷 禽 和加 拿 大鵝 中 占

都有檢 測 出

N

病毒。

以 迷 些 死 冉 中 分 禹 得 到 的 病 毒 分析 后 友 現

和香 港 之 前 的 病 毒相 比 , 原 性 友 生 了很 大 的 漂 移 交 弄 , 且茨得 抗 井 a ez, . e . 了可 以 手致 感 染 的 鴨 大量 死 亡 的 能 力 ( u
a

. ,

叮

J

20 0
N

0

。

速 一事 件 不 同 子 常之
00 0 0 冬 季 未香 港

外 在 于迷 些 高 致 病 型

流 感 病 毒分 萬 自

迂冬 的候 冉 。 占 吋 就 有 人預 測 迷 些 候 冉 在 夏 季 回弋 后 將 合 大 面 私 侍
播病毒 (
,. 20 0 a ez . e a . K u J , 奕 硝 突 如此 , 青海 湖 爆 友 了 大規模 的候 冉 感 染 事 在

()
N

病 毒 ,井 且如今 歐 洲 、 非 洲 的 H N

病 毒搪 研 究 全 部 未 自 于 伙 亞 洲

弋 去 的候 冉 所 帝 。
00

年 的 吋候 再 亞 洲 流 行 的

N

病 毒在 遺 侍 水 平 上 勻

00

年在 香 港 出 現 井 且 力 主要侍 播 病 毒 的基 因
遺佳 水 平 上均 占 /
源 于 歐亞 禽 矣 未 源 的

型 十分相 近 , 是 迷 些 但

病 毒都 已 婪 友 生 了抗 原 漂 移 。 此 吋在 亞 洲 流 行 的 病 毒八 抗 原 性 上領

e na /

0 /0

(

N ) 十 分相 似 , 且具 有 未 井

余基 因 片 段 。 在 越 南 和泰 囚 均 出現 了此 基 因
流 感 病 毒具 有 可 以 成 功侍 染 給 哺 乳 功 物 的 港

型 的 病 毒感 染 人事 件 。

迷 些 流行 的
因型
N1

N

具 戶 力 ,因 力 速 些 病 毒持 瑛 迸 化 , 有 重 組 的傾 向 , 生 了各神 不 同 基
病毒, N 病毒
H

的 抗 原 漂 移 井 且 已 銓 具 有 了吋 于 水 禽
He a

高致 病 性 的能 力 。

搪 世界 工生 組 匆
感 病毒
ao

o

d
H

h
av

g a n za

on

統升 ,

目 前 正 洲 、非 洲 、歐洲 以 及 北 美 洲 都 有 友現 禽 矣 感 染 高 致 病 性 禽 流

gan za
ev e n

on
00

.
0仍

N

an

n

ue za T
月

e

ne

O

.

。自

年至

0

年

日 ,奕 醃 室 珍

析 硝 征 的 出 現 人感 染 H N 亞 型 禽 流 感 病 毒 的 固 家 患 共 有

分 介,
其 例,
O

布 在 京 亞 、 京 南 亞 、 中 京 、 非 洲 和 歐洲
中
on
0

感 染 人敬 共 有
H

位感 染者 死 [ e d Hu a n a e

gan za
O

o

.

uua

v e Nu b e
N

v an

uenza

/

epo

ed

o

.

00

。

井 且 流 行趁 勢 未凡停 止 ,引起 了整 介 世界 的 芙 注 。
N

結 合 最近 几 年

病 毒 的侍 播 、 在 禽 矣 中 爆 友 、 侍 播 至 各 神 病 毒 以 及 可 能 的在 哺 乳 功 物 同 住 播 性

哺 乳 功 物 中 、 人感 染
Th a n a o
69

H,

gn u e c h ,
0

.
N

e

a

. .
e

Be
a

Z

ec
J

As

00
00

Ungchusak

.
3

NE

Med
一

()
(H en

0) 未看 ,

.e T.

病 毒在 人 同 大規模 爆 友仗 仗 是 吋 同 何 題

.

NE

J

Me

20 0

)2

oh

e

a

.

NE

Me d

,
蛋 白研 制
N

0

最 防 止 流 感 的 第 一道 防 域 是 中和 性 抗 休 , 有 保 妒 作 用 的是 抗
的 抗 休 ,因 此 可 以 針 吋
流 感 疫 苗 ,但是

基因

容 具 有 高 交 弄 性 , 易 因 抗 原 性 漂 移 而 手致 疫 首 元 效 , 使 得 疫 苗 需 迷

要 不 析 "升 圾 " , 能赴 上 病 毒 丈 弄 的 步 伐 。 力 克 服 流 感 疫 甘 的 抗 才
原 交 弄現 象 ,
H

每年 均 要根搪 上 一年 的 流 行 病 毒株 的 交 弄 監 測 情
干

況 , 用 新 的疫 苗 株 用 佈 下 一年度 流 行 季 市 的疫 酋 , 迂 季 迭 通

搓神

新 疫 苗 未 硝 保 吋現 有 的 流 行 病 毒 株 保 持 有 效 保 妒 性 。 侍 統 流 感 疫 首
的 大 量 生 戶 使 用 嗚胚 培 芥 法 或 細 胞 培 莽 法 ,主要 有 全 病 毒 夭 活 疫
首 、 裂 解 苗 或 亞 羊 位 苗 等 。 迷 些 佳 統 流 感 疫 苗 仍 然 占搪 占 前 的 主要
市 切 ,但 它 伯 的兔 疫 原 性 、 安全 性 、 毒 副 作 用 一直 元 法 令 人放
而且
N

病 毒吋鳩 胚 的 高 毒 性 , 原 本 生 戶 能 力 有 限的 疫 首 几 商 使

在 暴友全球 流 感 大 流 行 吋 吏加 滿 足 不 了 市 功 的 正 常 需 求 。 而 各科 形
式 的 減 毒 流 感 疫 首 則 因 力 安 全 性 和 毒 副 作 用 等 同 題 大 大 限制 了 其

推 戶座 用 ( o
00

ooT
0

.

e
。

a

. 什e ,

心 加 Mo e c uJa

仰

ed c

刀

e,

2

隨看 科 技 不 析 友展 ,利 用 新 共 分 子生 物

芋 技 木研 究 新 型 流 感 疫 苗 已戌 力 占 前 流 感 疫 首 的研 究 起 勢 , 核 酸 如

疫 苗 、 基 因 工程 疫 苗 、 抗 原 表位 疫 甘 等 。
目 前 鉅 迂 未 期使 用 楠 定 有 效 的 丙 神 的 流 感 病 毒 治 行 釣 物 主要
禹 子通 道 抑 制 刑 金 剛 坑 腰

力 丙 介矣 型

M

a

a

ad e) 和金 剛 乙腰
a
0

a d n ) , 銓 銑 肢 酵抑 制 刑 奧 司 他 丰 ( s e 神 . Ka cc e . 扎 那 米 丰 (za na v on
(
an

v

和
)

.

1

0 0 。 丙 者 以 抑 制 病 毒 萬 子通 道 蛋 白 前

而 友捍 抗 病 毒 效 果

后 者 能 迭 梓 性 地抑 制 病 毒 表 面 神 婪 氨 酸 晦 的 活 性 , 止 子 代 痛 毒 顆 阻

粒 在 宿 主 匆 胞 的 夏 制 和釋 放 , 效 地預 防 感 冒和緩 解 症 狀 , 目 前 有 使

但 比 較 有 效 的 抗 流 感 病 毒 鈣 物 , 目前 已 不 晰友 現 新 的

N

病毒交

弄 株 吋其 有 抗 鈣 性 。 迷 些 鈣 物 如果 在 友 病 的 最 初 2 天 內 服 用 , 合 將

縮 短 病 程 甚 至拯 救 病 人 的 生 命 。 呈 然 禹 子通 道抑 制 刑 吋 于 流 感 病 毒

的 一些 亞 型 十 分 有 用
0

(

n

.

e

a

.

NE

Me

.

0

50

,但 是 它 邦 有 很 尹 重 的 副 作 用 , 且 病 毒 正在 很 快 井

, h a sh e a .丁 血 e A s 20 0 ( ) ,而 且迷 些 耐 鈣 株 的侍 播 性 和 致 病 性 井 沒 有 咸 弱 。 . 世界各地 都 戶 泛 出 現 了吋 于 禹 子通 道抑 制 刑 的 耐 鈣 株 (B gh , .
的 迸 化 出 了耐 鈣 株
e
a

.

Za

ce

20 0

5

因此 在

00

006

流感 季 美 囚

反吋 采 用 萬 子 通 道 抑 制 刑 作 力 流 感 的 治 行 或 預 防 用

, 占 姓 埃 采 用 其作 力 治 座 行 手段 , 是座 占耿 合 用 鈣 , 低 用 釣 量 的 同 吋 降低 副 作 用 ,同 吋 但 降
鈣 。 但是荃 于 禹 子通 道 抑 制 刑 的井 多 仇 魚

避 兔 出 現 耐 鈣 株 的 危 隆 (Ts od
00

a,
20

.e
0

a

. 砌兄 ,
耐鈣 病

)
e

20

年 亦 有 扳道奧 司 他 丰
Ma

N

毒株 的 出 現

.e .
Me .

.

de Jo g

. .

e

a

.

EJ

20 0

感 染迂

N 病 毒 而 得 到 恢 夏 的 病 人扔 有 在 休 外 奕 醃 能 中 和 病

毒 的 抗 休 , 示 抗 休 可作 力 治 行 方 法 之 一 ( e Jo n g , . e a 提 .

. ,

0 ) 。 在 帖 床 上 ,多 克 隆及 羊 克 隆 抗 柚 Me ,, 0 0 休 可有 效 地 用 于預 防 甲肝 、 乙肝 、 狂 犬 、 呼 吸道 合 胞 病 毒

感染

a ye

. L. d

a

Aes

.,

20 0

)

在

年 西 班 牙 流 感 期 岡 亦 用 人恢 夏 期血 清 治 行 , 流 行 期 的 死 亡 率 下 降 使
了0

Luke T. e a
病 人和

.

.

Ze

Me

00

,

609

我囚

N 感 染 痛 人 的成 功 治 打 髮 銓 , 友 現 利 用 病 人 恢 也

八 夏 性 血 清 能 移 很好 的抑 制 病 毒在 休 內 的 夏 制 , 而 使 生 命 垂危 的 患
H 者 恢 夏 健 康 。 在 小 鼠 功 物模 型 中 , N

特 弄 的人 源 化 鼠 羊 抗 、全人
N

源 羊 抗 和F a b

片 段 已被 征 明 能 有 效 地預 防 和 治 行

Lu , J

.

e
Me d

1.

Aes

es.

00

on
a nson
B,J

ce

20 0

92

.

P. .

ea a

.
A eS

RL S

e

.

Re s ,, 0

,

1

。

高致 病 性 禽 流感 病 毒
h

N

在 受休 結 合位 魚 的

持 缺 抗原 突 交 即抗原 漂 奕 (
將成力
N 治打

ge n c d
N

)

, 速 些 抗休 的戶褚 吋

抗 病 毒 治 行 能 力 提 出 了挑 找 。 因 此 具有 戶 禧 中和 能 力 的羊 抗 的 茨得

的希 望 , 用 高底 量 的抗 利

戶 褚 中和性 羊 抗 治 行

理 想 的 治 行 效 果 , 是 一神全新 的抗 病 毒 治 行 方 式 。 迷

分 此 外 , 子 流 行 病 芋 研 究 表 明 ,目 前鴨群 神 大 約 有
感 染 井 元 任 何 症 狀 , 群 中也有 迷 鳩
0

0

的陌性

的 流 行 且元 症 狀 帝毒 。 迷 些

吋 受 感 染 的 功 物 又 能 侈 不 析 使 人 受 到 新 的 感 染 , 人 吳 的健 康 枸 成 巨
大 的咸 肋 。 有 夫 舌 家 一致 叭 力要控 制 好 H 型 高 致 病 性 禽 流 感 病 毒

早 在 整 介 京 亞 、 京 南 正 以 及 歐洲 各 囚 的 流 行 , 期珍 析 是 先 決 奈 件 ,

吋 然 后 才 能 做 到 早 隔 萬 、 早 赴 理 , 人做 到 早 治 行 。 .
[ 00
需吋

采 用 侍 統 的 病 毒分 禹 及血 清 珍 析 方 法 珍 析 禽 流 感 病 毒

天 ,且 目前 夫部 分人及 功物 疾 控 系 統 奕 驗 室缺 乏三圾 生

故 物 安全 奕 銓 室 , 京 南 亞 各 因 及 地 匹 吋

暴友 的珍 析 明 昱 滯 后 。
特

常 兀 的 情 況 是 大 量 鳩 只 死 亡 和 朴 手行 功 完 成 后 仍 未 有 奕 驗 室 的 硝

珍扳 告 , 控 制 病 毒 的暴友 帝未很 大 不 便 。 另 外 ,因 少 敖 禽 矣 拾

如 別 是水禽 , 家 鴨

存 在 看 元 症 狀 帝毒 情 況 , 疫 系 統 又元 有 效 的 栓

栓 測 手段 , 神 情 況 的持 瑛 友展 ,引 起 了咳 病 毒 在 多 介 團 家 地 匹 反 迷
夏 暴友 ,迂 延 不 晰 的局 面 。

[0
oo e

,由于 型禽流感病毒 ( 其中 ua gdong/ / 力 代 表株 局 高 致 病 性 病 毒 , 目前 常 用 的 吋
同吋

功 物 模 型 均 有 致 死 性 , 采 用 基 因 工程 方 法 表 迷 的血 凝 素 蛋 白 而

又 不 能 完 整取 得 抗 原 性 , 界 上 多 介 著 名 奕 銓 室 先后 姜 試 制 各針 吋 沿
亥 病 毒 系 的羊 克 隆 抗 休 均 未 萊 成 功 。 目 前吋咳 病 毒 抗 原 性 分析 不 得
不 采用 特 弄 性 及反座 性 均 明昱 迷 不 到 珍 斬 試 刑 要求 的 由

ch cken/ Penn y

van

a

0/

N

和

/ ch cke

Pe

y van a

HN

) 制 各 的羊 克 隆 抗 休 。

[ 0 0 荃 于 上 迷 情 形 ,目前 迫 切 期 望 能 有 一神 方 便 、快 捷 、 奕

八 吋 的珍 斬 方 法 和手段 , 而 及 吋把 第 一代 跨 神族 侍 染 的 病 人 隔 禹 治
行

,防止 病 毒 向人侍 人友展 , 病 毒 未這 座 人矣 之 前就 打 析 其 佑 播 在
[ 0 00
中 囚 團 札 有 笑抗禽 流感 病 毒

桂 ,伙 而 八根 本 上 消 除咳 病 毒吋人矣 的 大 流 感 咸 肋 。
亞 型 栓 測 研 究 已有 文
扶扳 道 。 拐 州 大 芋 畜 牧 菩 匡 孚 院 秦 受 建 等

秦 受 建 ,邵 虹 霞 , 琨 哉

等 , 中回玩防吾 度 孕拔 , 0

,

期 ) 研 制 了抗 禽 流 感 病 毒
小 吋 內 迅 速 栓 測 出相 座 的 禽 流 感 病

和

g

亞 型 血 凝 素 特 弄 性羊 克 隆 抗 休 , 用 迷 些 羊 克 隆抗 休 迸 行 同 座

接 兔 疫 焚 光 試捨被 征 明 能 在

毒 。 北 京 出 入境 栓醃 栓 疫 局 利 用 焚 光 T P

快 速栓 測 高 致 病 力 禽
00

栓 流感 病 毒 H 亞 型 , 測 吋 同縮 短 力
通 迂 帖 床 盼征 。 郭 元 吉 在

小 吋, 于

年

月

0日

"人禽 流 感 研 究 現 狀 " 一文 中 綜 迷 了
( 郭元吉 ,
0

亞 型 毒株 抗 休 栓 測 需 用 微 量 中 和 奕 醃 或 特 弄 性 高 的 E
中羊 其掩和 惟方 另妾 爭染 志 , 0 0

期 ) , 有 芙 利 用 EL 但
N

栓測

亞 型 的研 究 性 文 扶 郝 未 凡 相 芙 扳 道 。

[ 0 00 ] 團 外 有 笑 利 用 EL

栓測

抗 休 的研 究 已有 扳 道 。

o e 等 扳 道 了座 用 重 組 血 凝 素 蛋 白作 力 抗 原 包 被 , 用 同接 EL 利

栓測
T

N 抗 休 , EL 其

的 炙 敏度 力 0
J
H

, 弄度 力 特
()

oe

.e

.

CJ

M yC Ob oJ
H

但 咳 文 猷 井 非 針吋
h a e 等( h a
采 用 竟 爭 EL
力
型 禽 流感 所有

亞 型 血凝 素

基 因 特 弄 的羊 克 隆 抗 休 。
()
S
2

M hou 等 ( hou B. e

.

1

.
1

a

s

.e L.

.

dv a

法栓 測 禽 流 感 病 毒 抗 核
BL

蛋 白抗 休 , 栓 測 吋 象 均 但

亞 型 的 NP 蛋 白抗 休 ,不 能 硝 定 亞 型 。

Lu 扳 道 了基 于 羊 克 隆 抗 休 的 o

栓測禽 流感 病 毒 (

,咳

方 法 直接 栓 測

抗 原 , 特 弄 性 在 于 不 合 占其 它 禽 美 病 毒友 生 交 其

叉反座 ( u
等 建 立 了基 于
亞型 力

.

d v a A s.

00

(

昱然

aa

亞 型 表 面 糖 蛋 白特 弄 的羊 克 隆 抗 休 的 E

,其 但

羊 克 隆 抗 休 力 表 面 糖 蛋 白特 弄 的羊 克 隆 抗 休 ,井 非 P 基 因 特 弄 的羊 克 隆抗 休 ( a a 亞 型 血凝 素 o do
o

eno a

ne

a

.

a

s

.

00

4

(

pp )

0

.

[ 0 1 0 遺 憾 的是 , 有 禽 流 感 病 毒克 疫 芋 珍 析 手段 使 用 的羊 克 現 隆 抗 休 大部 分針 吋 的是核 蛋 白( NP 蛋 白 , 而 其 栓 測 的是 型 ( 也 因

竹 甲型 ) 流 感 病 毒 ,但 奕 仟

型 流感 病毒 包括 H

H

共1 介
亞型

亞 型 , 中相 占 大 的 亞 型 均 元 致 病 性 或 有 低 致 病 性 ,只 有 其
能 滿 足 帖床栓 測 的 需要 。

禽 流 感 病 毒 力 危 害 最 大 的 高 致 病 性 禽 流 感 病 毒 。 因 而 現 有 技 木迅 不

[0 1

本友 明 的根 本 目 的在 于 克 服現 有 禽 流 感 病 毒克 疫 栓 測 、
H

治 行 和預 防技 木 的缺 陷 , 采 用 的羊 克 隆 抗 休 針 吋 H 亞 型 的 所

蛋

白,在 小 鼠 模 型 中 能 有 效 地 治 行 多 科
可 用 于 特 弄 的栓 測 具有 高 致 病 性 的

N

病 毒 交 弄 株 的感 染 ,亦

亞 型 禽 流 感 病 毒 ,以 及 用 于

N 1 病 毒 疫 首 及 其 它 治 打 性 鈣 物 的研 制 。

友明 內容
[001
(

本 友 明提 供 了 可 特 弄 性 拮 合

亞 型 禽 流 感 病 毒血 凝 素
0

) 蛋 白之 羊 克 隆 抗 休 , 可 阻 晰 至 少 及

的羊 克 隆抗 休 占

正 型 禽 流 感 病 毒血 凝 素

) 蛋 白結 合 活 性 之羊 克 隆 抗 休 . 友 明 本

也提 供 了相 芙 的 柴 交 瘤 鈾 胞 株 ,分 禹 的核 酸 分 子和短 肢 , 及 其 含 以
核 羊 克 隆抗 休 的 鈣 物 組 合 物 和 匡 鈣 珍 析 玫各 和試 刑 盒 。 本友 明也提

供 了 利 用 咳 羊 克 隆抗 休探 測 , 晰 , 防 , 治 打 禽 流 感 病 毒 , 別 珍 和 特 預

是

亞 型 禽 流 感 病 毒 的方 法

.

附 困玩 明
困 1 是嵌 合 抗 休 的表 迷戾 粒 囚 。
固

昱示

g血

b 篩迭

肢 犀 篩 迭 物 活 性 的栓 測 結 果 。

困

昱 示噬茵 休 肢 占

特弄 鈷 合 的 EL

栓測 。
B

噬 茵 休 肢 占 多 神 羊 抗 的反 座 結 果
多 科 羊 抗 的反 座 桔 果 。

噬茵休 肢 占
Bc Bc

困
HB c

昱示
HB c D

.

及
g

D
固

融 合 蛋 白占時杆 抗 休

H

P

的反座 性 。
) 奕 驗 的結

昱 示 合 成 汰 占禽 流 感 病 毒 的 竟 爭 E L 昱示

栓測 鈷 果 。

困

合 戌 肢 阻 析 血凝 抑制

果。

具休 奕 施 方 式
00 0

本友 明 申清 中 涉 及 的有 笑 木倍 的 定 叉如 下
]

00

本 友 明 中 的 "血 凝 素 " 一祠 指 禽 流 感 病 毒 的 包 膜 糖 蛋
H ,

白。 血 凝 素 蛋 白介 手 流 感 病 毒針 吋宿 主 細 胞 的吸 附 和 迸入 。 禽 流 感
病 毒 的血 凝 素 蛋 白有 1 介 血 清 芋 亞 型

, 別 吋座 于 分

仟

介 病 毒 亞 型 ,即
[0 2

H

H1

本 友 明 中 的 " 抗 休 " 一祠 指 任 意 一神克 疫 球 蛋 白 ,包

括 能 結 合 特 弄 性 抗 原 的羊 抗 、 多 抗 、叉 特 弄 性 或 多 特 弄 性 抗 休 。 一
介 完 整 的 抗 休 包 含 丙 余 重 健 和 丙 余 枉 鏈 。每余 重 撻 含 有 一介 可 交 匹

和 第 一 、 第 二 、 第 三等 三介 但 定 匡
介 恆 定 匹 。 抗休 呈 "

每余 控 鏈 包 含 一介 可 交 匡 和 一

型 , " " 型蚌 枸 的 頭 部 含有 丙 余 重 桂 的 第

二和 第 三 恆 定 匡 其 通 迂二硫 鍵 結 合 形 戌 。 " 型 結 枸 的每余臂 含 有 其 中 一余 重 健 的 第 一恆 定 匹 和可 交 匹 , 一余 枉 健 的 可 交 匹 和 和
恆 定 匹 。 枉 撻 和 重 鏈 的可 交 匡 決 定 抗 原 的 鈷 合

每 余鏈 的 可 交 匡 均

含 有 三介 高 交 匹 , 互 朴 決 定 匹 ( 私
L
a ba

) 枉鏈 L ) 的
包含
O

包含 L

、

L
nee

重健

)

的
on

、

其由
O

等 人命 名 ,凡
F

e q ue nc e

P

oen
卷

uno o g c a
N H Pu b

h Ed
d

1

1)

ca

on

Be h e d

。其中

,介 三

由枸 架 匹 ( F

同 隔升 。

枸架 匹比

D

匡 更 保 守 井 形 成 一介 架 子狀 鈷 枸 支撐 超 交 匹 。 重 鏈 和

但 控 桂 的 恆 定 匡 占抗 原 鈷 合 元 芙 , 具 有 多 神放 座 功 能 。 抗 休 依搪 重

健 恆 定 匹 的氨 基 酸序 列 可 以 分 成 几 矣 ,主要 是
g

g
g

g

gE

和
g

, 中有 些 矣 返 迸 一步 分成 亞 矣 , 如 其
或g

、g

g

g
[00

等。

本友 明 中 的

"抗 休 " 一祠 ,除特 指 完 整 的兔 疫 球 蛋 白
F ab )

也 外 , 指 克 疫 球 蛋 白的 片 段 ( 如 至 少 是允 疫 球 蛋 白分 子 的 一介 克 疫
活 性 四段

,如

Fab 、 比 b

Fv

片 段 、 車健 抗 休 分子 或

由含 有 一介 或 多 介

匹 的克 疫 球蛋 白分 子 的任 意 片 段 形 成 的 多 特

本 弄 性 抗 休 。 另 外 , 友 明 涉 及 的抗 休 也可 以 是 由一介 特 定 的人克 疫
球 蛋 白中 的 一介 或 多 介
的枸 架 匹 形 成 的抗 休 。
00
匹 鈷 合 一介 或 多 介 不 同 的人允 疫 球蛋 白
片 段 是 指 含 有 一余 枉 鏈 的 可 交 匹 和

抗 休 相 夫 的 "Fab"

恆 定 匹 和 一奈 重 撻 的 可 交 匹 和 桓 定 匹 銓 二硫 鍵 結 合 起 未 的 抗 休 分

子 的 一部 分 。
[ [00 [00 ]
Fab

"

片 段 是 指 包 含 了部 分校 鏈 匹 的 Fab 片 段 。

F (ab )

指 的是 肋 b

的 二聚 休 。

抗 休 的 "Fc" 指 的是 第 一重 鏈 的 第 二 、第 三 恆 定 匹 占第

二重 鏈 的 第 二 、第 三 恆 定 匹 婪 二硫 鍵 結 合 成 的抗 休 的 一部 分 。 抗 休
但 的 F c 段 有 多 神 不 同 的 功 能 , 不 參 占抗 原 的 鈷 合 。
[00 ] 抗 休 的 "Fv" 段 指 的是 能 結 合 完 整 的抗 原 結 合 位 魚 的 抗

休 的 最 小 片 段 。 一介 F v 片 段 包 括 一奈 控 鏈 的可 交 匡 結 合 到 一奈 重

撻 的可 交 匹 。
00

本友 明 中 的

"羊 撻 抗 休 "

或 " cFv" 指 的是 由枉 鏈 可 奕

匡 占 重 桂 可 交 匡 直 接 相 連 或 通 迂 一介 肢 鏈 連 接 而 成 的 工 程 抗 休
Ho u s o

[00 0
s cFv

本友 明 中 的 本友 明 中 付

"羊 桂 抗 休 F v Fc" "抗 原 決 定 簇 "

或 " cFv F c " 也 包 括

連 接 抗 休 的 F c 段 形 咸 的 工程 抗 休 。
00

或 私 表位

指 的是抗 原

分 子 中 占抗 休 結 合 的那 部 分氨基 酸 或 原 子基 因 。 本 友 明 中 的 "羊 抗 " 一祠 指 的是 未 自 一群 高 度 同 源 的 [00

也 抗 休 分 子 中 的 一介 抗 休 或 抗 休 的 一介 片 析 , 即 除促 在 少 數 情 況 下
可 能 出 現 的 自 然 突 吏 外 , 群 完 全 相 同 的 抗 休 分 子 。 羊 抗 吋抗 原 上 一
的羊 一表位 具 有 高 特 弄 性 。 羊 抗 勻 多 抗 不 同
多 抗 是 包 含 了祺 別 抗

原 上 的 不 同 表位 的抗 休 分 子 。 呈 然 侍 統 的羊 抗 是 由 柴 交 瘤 細 胞 分 必

但 本 的 , 本 友 明 涉 及 的羊 抗 井 不 仗 限 于 此 制 各 方 法 。 如 , 友 明 涉 及
的羊 抗 可采用
2

oh

e

等 首 次 扳 道 的 染 交 瘤 技 木 萊 得 ( Na u
DN

e

49

,也 可 采 用 重 姐

技 木 茨 得 ( 如參 兀

U

.P .

00

本 友 明 中 的 "嵌 合 抗 休 " 一祠 指 的是抗 休 控 撻 或 和 重
自 某 一特 定 物 神 或 屆 某 一特 定 抗 休 矣 或 亞 矣

桂 的 一部 分 是 源

的序

列 相 同 或 同 源 的 抗 休 ,而 抗 休 控 撻 或 / 和 重 鏈 的 另 一部 分是 源 自 另

一物神 或 局 于 另 一抗 休 吳 或 亞 矣 的序 列 相 同 或 同 源 的 抗 休 。 不 管 怎 祥 ,迷 神 抗 休 片 段 仍 保 留 了 吋 目 杯 抗 原 的 結 合 活 性 ( U.P . 1 o ab ye a . o on e a . P oc Na . cad .
c

.

U
[00

8

816

1

.

本 申清 札

"人 源 化 抗 休 " 一祠 指 的是人 源 克 疫 球 蛋 白
D

( 受休抗休

的全 部 或 部 分

匡 被 一非 人 源 抗 休 ( 供 休 抗 休

的

匹 替 抉 后 得 到 抗 休 或 抗 休 片 段 , 中 的供 休 抗 休 可 以 是有 預 期 其

人 特 弄 性 、 辛 和 性 和反座 性 的 小 鼠 、 大 鼠 或 兔 抗 休 。 另 外 , 源 克 疫
球 蛋 白的枸 架 匹 ( F
的氨基 酸序 列 也可被 相 座 的 非 人 源 抗 休 的氨
匹 或 枸 架 匹序 列 。 迷 些 人

基 酸 序 列 所 替 抉 。 而 且 , 源 化 抗 休 的 氨 基 酸 殘基 也 可 以 既 非 未 源 人

也 于 受 休 抗 休 , 非 未 源 于供 休 抗 休 的

工修 飾 的 目 的是 迸 一步 完 善或 仇 化 抗 休 性 能 。 患 之 , 源 化 抗 休 是 人
指 含 有 至 少 一介 、通 常是 丙 介 几 乎 完 整 的 可 交 匡 , 中吋店 的 所 有 其 或 几乎所有 的
F
D

匹 是 未 自 非 人 源 抗 休 , 中 的 全部 或 几 乎 全 部 的 其

匹 是 未 自 人 源 抗 休 。 理 想 的人 源 化 抗 休 至 少 含 有 克 疫 球 蛋 白的

Fc 匡 的 一部 分 ,通 常是人 源 兔 疫 球蛋 白的 Fc 匹 。 更 多 祥 匆 內 容清
參岡
a

Jo e e
Na

.
3

Na

ue
1
an d

c h a nn e
P

. .

e
0 0)

es a

Bo

ak

u . p. u o . To day

uc
2

.

.

[0

] 本 申清 涉 及 的 "被 分 禹 " 一祠 , 的是 天 然 狀 志 下 銓 人 指

工 手段 茨得 的 。 如果 自 然 界 中 出 現 某 一神 "被 分 禹 " 的 物 辰 或 成 分 ,
那 么 可 能 是 其 所 赴 的 天 然 杯 境 友 生 了 改交 或 八 天 然 杯 境 下 禹 分 出

咳 物 底 , 二者 情 況 均 有 友 生 。 比 如 , 一活 休 功 物 休 內 天 然 存 在 或 某
的 某 神 未被 分 禹 的 多 聚 核 苦 酸 或 多 肢 , 八 迷 神 天 然 狀 志 下 分 萬 出 而

未 的 高 鈍 度 的相 同 的 多 聚 核 苦 酸 或 多 肢 即 私 之 力 被 分 禹 。 迷 里 的

也 "被 分 萬 " 不 排 除混 有 人工或 合 成 的 物 底 , 不 排 除存 在 不 影 咱物
辰 活 性 的其 它 不 鈍 物底 。

[ 00

本友 明 中

可 "栽 休 " 一祠 指 的是 , 將 蝙 碼 某 蛋 白的 多 聚

核 苦 酸 插 入其 中井使 蛋 白茨得 表 迷 的一神核 酸 逗 栽 工具 。 栽 休 可通

迂 特 化 、持 手或 特 染 宿 主 細 胞 , 其 拐 帝 的遺 侍 物 辰 元件 在 宿 主 匆 使
胞 內 表 迷 得 以 表 迷 。 萃例 未祝 , 休 包 括 底 粒 噬 菌 粒 柯斯 底 栽 ) 、細 茵 人工 染 色 休 ( B ) 粒 人 工 染 色 休 如酵 母人 工 染 色 休 (
或 P 未 源 的人 工 染 色 休 (

)

噬茵 休 如 入 噬茵 休 或

噬茵休

及 功 物 病 毒 等 。 用 作 栽 休 的 功 物 病 毒神 矣 有 逆 特 汞 晦病 毒 ( 包 括 慢
病毒 、 腺 病 毒 、 腺相 芙 病 毒 、 疤 疹 病 毒 (

如羊 鈍 疤 疹 病 毒 ) 、 痘 如
) 。一

病 毒 、杆 狀 病 毒 、 乳 共 瘤 . 毒 、 乳 央 多 瘤 空 泡 病 毒 ( 病

包 神 栽 休 可 能 含 有 多 神控 制 表 迭 的元件 , 括 店 功 子序 列 、特 汞起 始

序 列 、 增 強 子序 列 、 迭 梓 元件 及扳 告基 因 。 另 外 , 休 返 可含 有 夏 栽

如 制 起 始 位 魚 。 栽 休 近 有 可 能 包 括 有 林 助 其 迸入 細 胞 的 成 分 , 病 毒
顆 粒 、 脂 友 休 或 蛋 白外 亮 ,但 不 仗 仗 只 有 迷 些 物辰 。
[00

本 友 明 中 "宿 主 細 胞 " 一祠 指 的是 手入栽 休 的 鈾 胞 ,

包 括 如下井 多 細 胞 矣 型

, 大肋杆 茵 或 枯 草 茵 等 原 核 細 胞 , 酵 母 如 如
果蛇 細胞 或
N 匆胞 ,

如 匆 胞 或 曲霉 茵 等 具 茵 匆 胞 ,
者 如仟 堆 原 細 胞 ,
匆胞 ,
00
2

g 等 昆 土 匆 胞 ,或

細胞 ,

B 細 胞 , e La 匆胞 ,

細 胞 或 人 匆胞 的功 物 匆 胞 。

" 中 和抗 休 " 一祠 指 的是 能 清 除或 昱 著 降低 目杆 病 毒抗
]

原 鈷 合 毒 力 的抗 休 或 抗休 片 段 。
[00

"序 列 相 同 百 分 比 " 一祠 指 的是候 迭 序 列 中 的核 酸 或 氨 "序 列 相 似

基 酸 分 別 占吋虛 的核 酸 或 多 肢 序 列 中核 酸 或 氨 基 酸 相 同 性 的 百 分
比 。 速 里 涉 及 到 的 占核 酸序 列 或 者 多 肢 序 列 有 笑 的 木若

百 分 比 " 定 叉 力 候 迭 核 酸序 列 或 氨基 酸 殘基 序 列 分 別 占 目 的核 酸序
列 或 氨基 酸序 列 的相 似 百 分 比 。 吋 于 某 一介 序 列 , 它 和 目 的序 列 將

迸 行 比 吋 , 要 吋 可跳 迂 突 交 缺 口 , 迭 到 最 大 的基 因 相 似 百 分 比 , 必 以
而 不 去 考 慮 相 似 序 列 的任 意 保 守 性 突 交 。 本 領 域 的 多 科 比 吋 方 法 可

如 用 于 硝 定 核 酸 或 氨 基 酸 序 列 的相 似 性 , 可 用 的 汁 算 札 軟 件 包 括
BL

T

BL

T

L

N

L

N

或 eg

gn

N

T

等。 熟

包 悉 本 領 域 技 木 的 工作 人 員 懂 得 給 比 吋沒 定 合 這 的 測 量 參 敖 , 括 力

使 用 最 大 可 比 性 的 一些 逗 算 法 則 迭 到 而 全 未序 列 的 比 較 。
指 "特 弄 性 結 合 " 一祠 指 的是 , 丙 分 子 同 的 非 隨札 結 合 反座 , 抗 休 和戶 生 稜 抗 休 的 抗 原 同 的反座 。 此 赴 , 合 第 一神 抗 如 結
[00 0

原 的 抗 休 吋 第 二科 抗 原 的 結 合 辛 和 力 是栓 測 不 到 或 很 弱 。在 某 些 奕

一 施 方 式 中 , 介 某 抗 原 特 弄 性 抗 休 是指 以 辛 和 力
1
0

、0

8

M

g

0

1

指 解 萬 率 占結 合 率 的 比 值
員

o

kon

如 " 等 ) 鈷 合 核 抗原 , 中 加 其 , 可 以 采 用 本領 域 技 木人 其
D
二

(

熟 悉 的方 法 迸行測 定 。

00 [ 00

抗休

本友 明 所 迷 羊 抗 能 侈 特 弄 性 結 合
H

H

正型 禽 流 感 病 毒 。

本 友 明 的 一介 方 面 涉 及 能 特 弄 性 皓 合

亞 型 禽 流 感 病 毒血 凝 素 蛋

白的羊 抗 及 其 相 座 的 抗 原 結 合 片 段 。
0
本友 明 所 迷 抗
H H

羊 抗 是 由 小 鼠 柴 交 瘤 匆胞 株
D

D

和

所 分 泌 的 。 迷 些 羊 抗 的名 私 以 其 相 座 的 染 交 瘤 匆 胞 株 迸 行

命 名 。 也就 是 ,迷 些 抗

羊 抗 分 別 由 染 交 瘤 匆胞 株

和
D

戶 生 , 分別 命 名 力 井

和

。

羊抗

和

2

能 特 弄 性 鈷 合 H 亞 型 禽 流 感 痛 毒血 凝 素 蛋 白。 小 鼠 染 交

瘤 匆胞株

和

.

已在 中 囚 典 型 培 莽 物 保 藏 中
.

uha n Un ve s
00
T

y

uhan , h na
柴 交 瘤 匆胞 株
00

迸 行保 藏 , 藏 考 分 別 是 保
00
T

T

染 交瘤 細 胞 株
2 00 0

, 藏吋同 休
年
月

年
。小

月
2 00

日) ,

柴交

瘤 匆胞 株

, 藏吋同 保
T

日)

鼠 染 交瘤 細 胞

株1
結合 H

近有

00 2

保藏 吋 同 2 0 0 年

月2

日

[ 00

本友 明 涉 及 羊 抗 近 包 括 能 阻 析 羊 抗
或
>

或

亞 型 禽 流 感 病 毒血 凝 素 蛋 白的羊 抗 。 迷 些 羊 抗 鈷 合 的血 凝
所 唳 別 的表 位 相 同 。 迷
D或

素 上 的表 位 可 以 勻 羊 抗

些 羊 抗 所 祺 別 的表位 也可 以 和羊 抗

所 祺 別 的表

位 在 空 間 上有 重 垂 。 迷 祥 的羊 抗 可 以 降低 羊 抗

或
0

占

亞 型 禽 流 感 病 毒血 凝 素 蛋 白的 結 合 力 至 少
0

或仇 迭 至少

,或 更伉 迭 至 少

.

, 至少 0 或 ,或 更 伏 迭 至 少 ,或 吏

仇 迭 至少
。

, 史伉 迭 至 少 或

0

, 更仇 迭 或

, 最仇 迭 或

00
Ma

nua
1
H

La n e

La b o a o y 可 以 采 用 常 規 方 法 如 n bod e od p ng a bo La b o a o y Bd H a o a d a v d ) 中描 迷 的 方 法 , 定 某 一未知 羊 抗 降低 某 一 已知 羊 抗 測

結合

止凝 素 蛋 白的 能 力 。 例 如 , 把 抗 原 預 包 被 在微 孔板 上 , 先

羊 抗 共 同 加 入 上 迷 預 包 被 后 的微 孔 板 中 孵 育 , 潦 后 測 定 不 同 稀 祥 洗

度 的待 測 抗 休 下 已知 抗 休 鈷 合 到 板 上 的敖 量 。待 測 抗 休 竟 爭 已知 抗
休 結 合 抗 原 的 能 力 越 強 ,已知 抗 休 結 合 抗 原 的 能 力 就 越 弱 。 通 常 ,
抗 原 是預 包 被 在

孔微 孔 板 上 ,井 利 用 放 射 杯 杞 法 或 酵 杆 祀 法 測
oh

定 未 杯 祀 羊 抗 阻 晰 已杆 祀羊 抗 的 能 力 。
00 6

可以 采用

e

等

Na u

e

2

4

) 中扳 道
)

的 柴 交瘤 制 各 方 法 未 制 各羊 抗 。首 先 將 克 疫 原 必 要 吋候 添 加 佐 荊

兔 疫 注 射 小 鼠 或 其 它 合 這 的 宿 主 功 物 。 兔 疫 原 或 佐 刑 的 注射 方 式 通

常 力 皮 下 多 魚 注射 或 腹 腔 注射 。 克 疫 原 預 先 璃 取 到 某 些 已知蛋 白,

如血 清 白蛋 白或 大豆姨 酵抑 制 荊 上 , 能 舍 有 助 于增 強 抗 原 在 宿 主 可
內 的克 疫 原 性 。 佐 刑 可 以 利 用 福 氏佐 刑 或
MP L

TD 等 。 功物 受 兔 疫

休 后 , 內 舍 有 分 泌 特 弄 性 結 合 兔 疫 原 的 抗 休 的淋 巴 細 胞 戶 生 。另 外 ,
淋 巴 細 胞 也可 以 利 用 休 外 兔 疫 茨得 。 收 集 目 的淋 巴 匆胞 勻 骨蔽 瘤 匆

胞 井 用 合 這 的 融 合 刑 , P E , 行 融 合 以 茨得 柴 交 瘤 細 胞 如 迸
M o noc

od
一

g
0

ona

bod e s

P

c a de

cP
0 ]

e

,

.

nc

p e s an d P

ac

ce

pp .

,

上 迷 制 各 的 染 交瘤 細 胞 可 以 接 神 到 合 這 的培 莽 液 中 生
P T

未 , 芥 液 中 最好 含 有 口 或 多 神 能 侈 抑 制 未 融 合 的 、母休 骨蔽 瘤 培 科

吋 匆 胞 生 長 的 物 席 。例 如 , 缺 乏 次 黃 喋 吟 冉 噪 吟磷 酸 持 移 酵 (

,

PT

在 的母休 骨 隨瘤 細 胞 , 培 莽 液 中 添 加 次 黃 喋 吟 、 氨 基 喋

吟和胸 腺 喀 史 ( H
生未。

T

培 莽基

等 物底 將 可 以 抑 制 H P T 缺 陷 匆胞 的

0

伉 迭 的 骨髓 瘤 匆胞 座 咳 具 有 融 合 率 託 抗 休 分 泌 能 力 稔

, 蔽 瘤 細 胞 首 迭 鼠 源 骨蔽 瘤 , 骨 ue e an d M 鼠 沖瘤 衍 生 株 THE a k n 如M P .U 0O 和P s an e go a bu on e n e g u u e o e c on e can Type 匆胞株 (
吋 定 , H T 培 芥 液敏 感 等 能 力 。 其
o c kv
源

e

dU

.

)

。 另 外 也有 研 究 扳 道 利 用 人 骨蔽 瘤 和人 鼠 弄

30 骨 隨 瘤 鈾 胞 株 制 各 人 羊 抗 ( o z b o ,J . un . , n b od y P o d u c on (1 ) B odeu e a . , o noc o a

e c hniques an d
Ne

pp

ca

on s pp

.

a

ce

e kke

nc .

ok

9

[ 00

染 交 瘤 鈾 胞 生 未 的 培 芥 液 用 于 栓 測 針 吋特 井 抗 原 的 羊

抗 的 戶 生 。 測 定 染 交 瘤 匆胞 戶 生 的 羊 抗 的 結 合 特 弄 性 有 克 疫 沉 涎 或 ) 、 耿兔 疫 吸 附 試 銓 ( E 如 酵 休 外 結 合 試 銓 , 放射 兔 疫 拭 盼(
例 如 , 用 Mu 利
c a c ha

n等

na

.

B o c he

.

0

20

0) 描

d 分析 法 可 用 未 測 定 羊 抗 的 辛 和 力 。
( od n g
一

0 0 0 占 染 交 瘤 戶 生 的抗 休 的特 弄 性 、辛 和 力 和反座 性 硝 定 之
后
P

,目 的 匆 胞 株 可 以 通 迂

o noc on a

n bod e s

nc

p es a d P
P

ac

e

pp

0

,

c a de

cP

e

)

所 描 迷 的 杆 准 的 有 限稀 梓 法 迸 行 亞 克 隆 化 。 合 迫 的 培 莽 液 可 以 是
D EM

或

0

等 。 另 外 , 交瘤 細 胞 返 可 以 腹 水 瘤 的形 式 在 功 染

物休 內 生 未 。 [ 0 0 ] 利 用 侍 統 的克 疫 球蛋 白鈍 化 方 法 , 蛋 白 掠 脂 糖 凝 股 、 如

可 控 基 磷 友石 居 析 、凝 肢 屯 泳 、透 析 或 辛 和居 析 等 , 以 將 亞 克 隆 匆
胞 分 淤 的羊 抗 八 匆 胞 培 莽 液 、 腹 水 或 血 清 中分 禹 出 未 。
[00

本友 明 所 迷 羊 抗 迂 可 以 是通 迂基 因 工程 重 組 技 木茨得 。

利 用 特 弄 性 結 合 羊 抗 重 健 和 枉 鏈 基 因 的核 酸 引 物 迸 行 P

可 扛增 ,
分子 。
Co

以 八 染 交 瘤 匆胞 中 分 再 得 到 編 碼 羊 抗 重 鏈 和 枉 撻 基 因 的 N

所得

N

分 子插 入表 迷 栽 休 札 然 后 持 染 宿 主 細 胞 , B 如

匆

胞 、猿 猴
[00

匆胞 、或 其 它 不 戶 生 克 疫 球 蛋 白的 骨隨瘤 鈾 胞 。

特 染 后 的 宿 主 匆胞 在 特 定 奈 件 下 培 芥 井 表 迭 目 杆 抗 休 。
本友 明 的 抗 休 吋

血 凝 素 蛋 白結 合 具 有 高 特 弄 性 和 高

辛 和 力 。 迷 些 抗 休 吋其 它亞 型 的血 凝 素 蛋 白可 能 舍有 弱 的 交 叉反座

性 , 迭 地 , 些 抗 休 吋其 它 亞 型 的血 凝 素 蛋 白完 全 沒有 交叉反座 仇 迷

本 性 。 一方 面 , 友 明 的抗 休 鈷 合 5 止凝 素 的
伉 迭地 ,

D

值小于
X

x

0 5M

值小于
值小于

X

伉 迭地 ,
[00

,

M
。

更伉 迭 地 ,

D

值小于

M,最

本 友 明 的 羊 扣可 以 是 包 含 丙 余 重 撻 和 丙 奈 枉 槌 的 侍 統

的 " " 型 結 枸 狀 的 抗 休 。 另 外 , 迷 抗 休 也可 以 是保 持 了吋血 凝 所 素 蛋 白辛 和 力 的侍 統 的 " " 型 皓 枸 狀 的 抗 休 上 的 Fab 片 段 、Fab

叭a b ) , Fv 、或 其 它 矣 型 的部 分 片 段 , 皓 合 止凝 素 蛋 白的 辛 和 力 、 其
可 以 高 于 或 低 于侍 統 的 " " 型 鈷 枸 狀 的 抗 休 。 [00 本 友 明 的 抗 休 片 段 可 以 利 用 水 解 完 整 的 抗 休 分 子茨得
參兀
0
Mo

oo

e

a

. .

.

B o c he
a

.

B o phy

.

e

hod
o

a dB

ennan e

.

c e nce 2

另 外 , 些 抗 休 片 段 也 可 以 直接 由 重 組 宿 主 匆 胞 戶 生 「 v e e d 迷 e d on u uno L pn ee
a

.
e

uo
e

. .

.

o day
Co

2

0

0

. 比 如 ,肋b
))

片 段可

以 直接 八 E

細 胞 中茨得 或 化 孕 璃 耿 形 成 F a b ) 2 片 段

(a

a

.

B o /Techno o gy
N

0

再如 ,

片 F a b ) , 段 可 以 用 亮 氨 酸拉鏈

連 接 茨 得 。 另 外 ,F v

Fa b

或 F ab

片 , 段 也 可 以 直 接 八 重 組 宿 主 細 胞 培 芥 液 中 直接 分 萬 得

到 。 本 領 域 的普 通 技 木人 員 完 全 知 曉 制 各 抗 休 片 段 的 其 它 技 木 。

00 6 [00

抗 休 核 酸序 列

本友 明 涉 及 特 弄 性 鈷 合

血 凝 素 蛋 白的抗 休 或 抗 休 片

段 的 編 碼 核 酸 分 子 。 編 碼 抗 休 的核 酸 分 子 可 以 八 染 交 瘤 細 胞 中 分 禹
得 到 。 本 領 域 的普 通 技 木人 買 完 全 知 曉 利 用 常規 技 木 可 以 測 定 迷 些

分 子 的核 酸 序 列 。 本 友 明 涉 及 的 抗 休 核 酸 分 子 也 可 以 利 用 侍 統 的 基

本 因 工程 重 組 技 木或 化 孚 合 成 方 法 茨得 。 一方 面 , 友 明 涉 及 的 抗 休
核 酸 分 子 的序 列 包 含 了抗
H

抗 休 的 重 鏈 可 奕 匹 或 抗 休 分 子 的部 分

本 核 酸序 列 。 另 一方 面 , 友 明 涉 及 的 抗 休 核 酸 分 子 的序 列 也 包 括 抗 本 抗 休 的 控 桂 可 交 匹 或 抗 休 分 子 的部 分核 酸序 列 。 另 一方 面 , 友
明 涉 及 的 抗 休 核 酸 分 子 的序 列 近 包 括 重 鏈 或 控 鏈 可 交 匡 的
列 。 互朴 決 定 匹
co p

序
)

e en a

y de

e

na

e g on ,
T

是

占抗 原 表位 結 合 的部 位 , 研 究 中 的 本
(h

序 列通迂

/

UE T

p

/

g

.C

ne

.

/ e x e / v qu e

迸 行 硝 定 。 但是 不 同 的

划 分方 法得 到 的
00

序 列 稍有 不 同 。

本友 明 的 一方 面 涉 及 蝙 碼 羊 抗

和

重鏈 重挺可交

和 控 鏈 可 交 匹 序 列 的核 酸 分 子 。 羊 抗
匹 序 列 的核 酸 分 子分 別 吋座 于 E

和
N

、

E E

D

N

E

N

E

N

4

E

N

和

N

9

羊抗
E
D

和
N

枉 健 可 交 匹 序 列 的核 酸 分 子分 別 吋座 于
N

E
D

和

E

N

。

本 友 明返 涉 及 包 含 了 羊

抗
矣似休 。
[00

和

重 健 和控 鏈 可 奕 匹 序 列 的核 酸 分 子 交 弄 休 或

另 一方 面 ,本 友 明 迂 涉 及 各 神 分 禹 的 核 酸 分 子 的 吏 弄
E

其 休 , 序 列 占如 下 核 酸 序 列 相 同
E

D
D

N
g或
E
D

E
E

N N

3
1
E

N

5

E

D

N

E

N

具 休 地 , 酸 交 弄 休 的序 列 勻 如 下 核 酸序 列 核
N

N
E

、
N

E

D

N

E

N

E

D

N

E

N

7

E

N

g或

E

N

1 的相 同 性 至 少 迷
、更 仇 迭 至 少 迷

、伉 迭 至 少 迷

、更 伉 迭 至 少 迷 0
、 最伉 迭 至 少 迭

更伉 迭 至 少 迷 0

00 0 [ 00
序列力 E

本 友 明 返 提 供 能 特 弄 性 鈷 合 H 亞 型 禽 流 感 病 毒 的抗 休 本 友 明 更 迸 一步 近 涉 及 編 碼 抗 休 重 健 可 交 匹 氨 基 酸
E

片 段 的 編 碼 序 列 的核 酸 分 子 。

]

DN

1和 E
E

的 所 吋座 被 分 萬 的核 酸 分 子 。 本 友 明返 涉 及 編 碼 抗 休 枉 撻 可 交 匹 氨

基 酸序 列 力
N

E

N

N

2

和

E

28

0 的 所 吋座 的核 酸 分 子 。
本友 明 涉 及含有 所 迷核 酸 分子 的 重 組 表 迭 栽 休 , 涉 也

[00

及 持 化 了迷 些 分 子 的 宿 主 匆 胞 。 而 且 , 友 明近 涉 及 利 用 包 含 了 所 本
迷 核 酸 分 子 的 宿 主 匆胞 在 特 定 奈 件 下 培 芥 井 分 萬 得 到 友 明 所 迷 抗

休 的方 法 。 00 抗 休 多 肢序 列

[0

] 羊抗

D

和

重 鏈 和 枉 桂 可 交 匹 氨基 酸 序 列

可 以 伙 吋座 的 核 酸 序 列 中 推 手 得 到 。 羊 抗 E N 可 交 匹 氨基 酸 序 列 分 別 是 E
E

和
N
E

重桂
N

N

E

N

和

E

N
E

0

羊抗
E

和 和

枉 撻 可 交 匹 氨基 酸 序 列 分 別 是
E

N
H

DN

N

。

一方 面 ,本友 明提 供 的抗
E

羊 抗 包 含 的重健 可
E

交 匹 氨 基 酸序 列 力
E

N N

2

E E

DN

N

DN

E

和

N

0

本 另 一方 面 , 友
E

明提 供 的 抗
E

羊 抗 包 含 的 控 健 可 交 匡 氨基 酸 序 列 力

DN

DN

和
DN

E

N

[00
序列占
E

本 另 一方 面 , 友 明提 供 的 抗 休 的 重 鏈 可 交 匹 的 氨 基 酸
2
E

N

2

E

DN

6

E

DN

E

DN

或

E

N
0

0 的序 列 相 似 性 至 少 迷

,迭 仇
0

是至少
[0
序列占
E

, 迭 是至 少 仇

, 迭是 仇

, 仇 迭是至少 再

最 好 的是 至 少
另 一方 面 , 友 明提 供 的 抗 休 的 枉 撻 可 交 匹 的氨 基 酸 本
E

N

N

8或

E

N
0

的序 列 相 似 性

,仇 迭 是 至 少 , 迭 是至 少 仇 再 仇 迭 是 至 少 0 ,最 好 的是 至 少 5
至少 迷 0
[ 00
羊抗
Nos

, 迭是 仇

羊抗
重桂 的
。

和 和
控健 的

的重鏈 和枉健 可 交 匹 的

的 氨基 酸 序 列 硝 定 如 下

的氨 基 酸 序 列 分 別 力
、D2

E

D

羊抗
No

和

D

的氨基 酸 序 列 分
E

別力 E

羊抗
No

重健 的
。

.

和

的氨基 酸 序 列 分 別 力

羊抗
D No
D

枉桂 的

和
D
D

的氨基 酸 序 列
D

分別 力
羊抗
Nos

E

重健 的
。

、D

和

的氨基 酸序 列 分別 力
、D

E

羊抗
No

控健 的

和

的氨基 酸 序

列 分別 力

E

0
羊 抗 重鏈 或 片 段 , 其
的 一介 或 多 介
D

[ 00
含 有 如下 E 未

本 另 一方 面 , 友 明提 供 了抗 未自 E
的 一介 或 多 介
Ns
。 在 一奕 施 方 式 中

) 未自 E

的 一介 或 多 介

, 抗
的

心 羊抗 重槌或 片 段
D。

含 有 三 介 氨基 酸 序 列 力
式 中 ,抗
N

E

在 另 一奕 施 方
E

羊 抗 重 鏈 或 片 段 含有 三介 氨基 酸序 列 力
的
。在又

D

三 介 氨基 酸 序 列 力
00

E

「

奕 施方 式 中, H 抗

羊 抗 重鏈 或 片 段含有
含 有 的 氨基

Ns

2

的

另 一方 面 , H 羊 抗 的 重 鏈 或 片 段 的 抗

酸 序 列 可 能 是在

E

N

和

上 出 現 一介

或 多 介 氨基 酸 的 突 交 或 增 添 或 缺 失 。 仇 迭 的 是 , 交 或 添 加 或 缺 失 突

的 氨基 酸 不 超 迂

介 氨基 酸 。 更 伉 迭 的是 , 交 或 添 加 或 缺 失 的 氨 突

基 酸 不超迪
不超迂

介 氨基 酸 。 最 伉 迭 的 是 , 交 或 添 加 或 缺 失 的氨基 酸 突

介 氨基 酸 。

[00 0
D

本 另 一方 面 , 友 明提 供 了抗
未自
Ns
E

羊 抗 控撻 或 片 段含有 如
D

N

16
。在

的一介 或 多 介
D

未
E

自
Ns

E

的 一介 或 多 介

或(

未自
的

0 的 一介 或 多 介

一奕 施 方 式 中 , 抗
N

羊抗 枉健或
。

片 段 含 有 三 介 其 氨基 酸 序 列 力

E

在另一
E

奕 施方 式 中, 抗
N

羊 抗 枉 鏈 或 片 段 含 有 三 介 其 氨基 酸 序 列 力
D。

2

的

在 又一奕 施 方 式 中 , 抗

羊 抗 控 健 或 片 段含
含 有 的氨基

Ns 2 0的 有 三 介 其 氨基 酸 序 列 力 絀 00 另 一方 面 , H 羊 抗 的控 鏈 或 片 段 的 抗

酸 序 列 可 能 是在

E

N

和

J 出 現 一介

或 多 介 氨基 酸 的 突 交 、 增 添 或 缺 失 。 仇 迭 的是 ,突 交 、 添 加 或 缺 失

的氨基 酸 不 超 迂

介 氨基 酸 。 更 仇 迭 的是 , 交 、 添 加 或 缺 失 的 氨 突

基 酸 不超 迂
不超迂

介 氨 基 酸 。 最 伉 迭 的 是 , 史 、添 加 或 缺 失 的 氨 基 酸 突
D

介 氨基 酸 。
的 可 交 匹 的氨基 酸友 生 突 交 、添 加 或 缺
亞 型 禽 流感 病 毒的能 力 。

[ 0 2 上述 抗 休 或

失之后 的 交 弄 休 仍 然 保 留 特 弄 性 結 合
[ 00

本友 明也 包 含 迷梓 的抗 原 結 合 片 段 的 交 弄 休 。
本 友 明 的 羊 抗 交 弄 休 可 以 通 迂 佳 統 的基 因 工程 方 法 萊
N

得 。 領 域 的技 木人 員 完 全知 曉 利 用 核 酸 突 交 改造 本
另外

分子 的 方 法 。

,蝙 硝 重 鏈 和 枉 鏈 交 弄 休 的核 酸 分 子也 可 以 通 迪 化 芋 合 成 茨
00
嵌 合 抗休 、人 源 化 抗休合 融 合蛋 白

得。

[0 抗
D

另 一方 面 , 友 明 也提 供 了嵌 合 抗 休 ,它 是 由 鼠 源 羊 本

或

或 其 交 弄 休 的 重鏈 和 或 枉 鏈 完 整 的或 部 分

本 的 可 交 匹 結 合 人 源 羊 抗 恆 定 四組 成 的 。 而 且 , 友 明 也 包 括 了人 源
化 抗休 , 們 是 由 鼠 源 羊抗 它
介或 多 介
D

或

或 其 交 弄休 的 的一

嫁 接 到 人 源 抗 休 的框 架 上 組 戌 的 。
另 一方 面 , 友 明迅 提 供 了璃 耿 了 某 神 分 子 的 完 全 或 部 本

[00

分含 有 本 友 明 所 迷 羊 抗 的 一神 融 合 蛋 白。
[00 ] 嵌 合 抗 休 、八源 化 抗 休 和 融 合 蛋 白都 可 以 利 用 侍 統 的基
因 工程 技 木茨 得 。 如 , 碼 羊 抗 的 D N 可 以 通 迂 突 史 的 方 法 把人 源 編

造成
(1 8

(o

son,

e

a

.,

P

oc

Na

.

cad

.

c

.

,或 通 迂把 整 介 或 部 分克 疫 球 蛋 白編 碼 序 列 占非 兔 疫 球 蛋
[ 00 0 09 9
中 和抗 休
另 一方 面 , 友 明提 供 了 能 侈 中和 H 亞 型 禽 流 感 病 毒 本

白編 碼 序 列 迸 行共什 藉 耿 而 萊 得 嵌 合 或 人 源 化 抗 休 或 融 合 蛋 白。

之 病 毒 活 性 的抗
和
至少

抗 休 。 在 一奕 施 方 式 札 迷 神 中 和 抗 休 能 侈 中
0

亞 型 禽 流 感 病 毒之 病 毒 活 性 的 至 少

, 仇 迭 至少 0 , 仇 迭 至 少 或 或 ,最仇 迭 至少 州, 伉 迭 至少
,

, 至少 0 , 仇 迭 或 或 , 伉 迭 至 少 0 ,史 或

[0 00

本 領 域 普 通 技 木 人 員 完 全 知 曉 利 用 侍 統 的技 木 方 法 可
亞 型 禽 流 感 病 毒 的 病 毒 活 性 。 如本友 明 的 奕 施

以 測 定 抗 休 中和

例 1 中 所 描 迷 的 中和 試 詮 的 方 法 即 可用 于 測 定 本 友 明 中 的 某 一介 特

定

羊 抗 的 中和 活 性 。

短肢 本友 明近 提 供 了一神模 拙 羊 克 隆 抗 休 砍 別 表 位 的短 肢 .
本 友 明提 供 了
酸 的短 肢 ( E
N

介 占羊 克 隆 抗 休 8
0

結 合 特 弄 的含

介 氨基

.

[01 0 1

栓測 方 法
本 友 明 近 提 供 了 一神 利 用 本 友 明 所 迷 羊 克 隆 抗 休 栓 測 本 方 面 , 友 明提 供 了栓 測
亞 型 禽 流 感 病 毒 的方 法 ,

[0 0 [0 0
片

型 禽 流 感 病 毒 杆 本 中 的抗 原 和 / 或 抗 休 的 方 法 。

包 括 以 下 几 介 步睬

將 本 友 明 的 某 一株 羊 克 隆 抗 休 或 其 某 介

段 占上 迷 梓 品 中 的 病 毒 結 合 而 戍 抗 休 病 毒 或 抗 休 片 段 病 毒 夏 合
) 栓 測 咳 祥 品夏 合 物 以 硝 定 梓 品 中是 否 有 病 毒 。

物

00
支持 物 上

本 另 一方 面 , 友 明提 供 了一神栓 測 梓 品 中 H
) 在 上迷 支持 物 中加 入可 能 含 有

正型 禽 流

感 病 毒 的 方 法 ,包 括 以 下 几 介 步 睬

) 將 第 一抗 休 吸 附 到 固 相
亞 型 禽 流感 病
亞 型 禽 流感 病 毒

毒 的 可疑 待 測 梓 品

(

\ 在 上 迷 支持 物 中加 入 帝有 林 杞 物 的 第

二抗 休

v ) 栓 測 咳 杯 祀物 的存 在 伙 而 判 定

是否 存在 。 [ 0 0 本友 明 的 另 一介 方 面 ,提 供 了一神栓 測 祥 品 中 正型 ) 將 抗 休 吸附 到 某 一 禽 流 感 病 毒 的栓 測 方 法 ,包 括 以 下 几 步 ) 在 咳 固 相 支持 物 中加 入預 混合 固 相 支持 物 血凝 素 杯 杞
物 的可 能 含有
亞 型 禽 流 感 病 毒 的梓 品

栓 測是否 存在
、 晦克 疫 栓

血凝 素 杯 杞 物 。
[ 010 ] 栓 測 方 法 可 以 使 用 時耿 克 疫 吸 附 ( EL
法 、竟 爭 法 及矣 似 栓 測 方 法 。 利 用 竟 爭 法 或 夫
方 法 可 以 用 于栓 測 目杯 抗 原 或 抗 休 。

測 、 化 芋 友 光兔 疫 栓 測 、敖射 允 疫 栓 測 、 焚 光兔 疫 栓 測 、兔 疫 色 培

上 法 方 式 , 迷栓 測

[0 0

竟 爭 法 是 比 較 祥 品 中 抗 原 和 一神 已 知 量 的 杯 杞 抗 原 竟

爭 結 合 本 友 明 所 迷 羊 克 隆抗 休 的敖 量 芙 系 。 升展基 于 竟 手 法 的克 疫
芋 栓 測 是 將 含 有 未 知 敖 量 的 目 杆 抗 原 的 祥 品加 入 到 事 先 用 已 知 的

物 理 或 化 芋 方 法 把 本 友 明 所 迷 羊 抗 包 被 到 固 相 支持 物 上 而 得 以 迸

行 的 。 同 吋加 入預 先 定 量 的杯 祀 后 的 目 杯 抗 原 迸 行反座 。 孵 有 后 ,

栓 沖 洗 固 相 支持 物 , 測 結 合 到 咳 支持 物 上 的 杯 祀 物 的 活 性 。

, 品 中 的 目杯 抗 原 被 夫在 包 被 羊 抗 和杯 祀 祥 羊 抗 之 同 , 后 再 加 入杯 祀 物 比 如 晦 的 底 物 , 迪 底 物 顏 色 的 交 化 然 通 栓 測 井 判 定 抗 原 的存 在 。 升展基 于 夫 法 的克 疫 學 栓 測 , 如 , 先 例
[01

在夫

法

把 含 有 一科 未 知 教 量 目杆 抗 原 的祥 品加 入到 用 物 理 或 化 學 方 法 預
先 包 被 了 本 友 明 中 所 迷 車 克 隆 抗 休 的 固 相 支 持 物 上 迸 行 反座 。 然

加 后 , 入本 友 明 所 迷 的 杆 祀 羊 抗 迸 行反 座 。 孵 育 后 , 洗 咳 支 持 物 , 沖
再 吋 結 合 到 咳 支持 物 上 的 杆 祀 物 的 活 性 迸 行栓 測 。 杆 祀 物 可 以 是放
射 性 同位 素 如

殃 、 晦 、 酵 的底 物 、友 光 物辰 如弄 普 米 諾 和 叩丈
P

酯 、 焚 光 物 底 如 焚 光 素 和 歹 丹 明 、生 物 素 和有 色 物 底 如乳 肢 顆 粒 和

肢 休金 等 。 祀 用 的 酵可 以 是 迂 氧 化 物 轍 如辣 根 迂 氧 化 物 晦 杆

)

喊性磷 酸 酵 、 半乳 糖 苦酵 和 葡 萄 糖 氧 化 酵 。 吋 于迷 些 反座 中合 這 基 苯 井 喀毗 咯琳 磺 酸 ) 、 專米 的底 物 有 , 連 氮 基 八 ( 諾 迂 氧 化 氧 、祁 苯 二肢 迂 氧 化 氧 針 吋 迂 氧 化 物 晦 ) 、 吋硝 基 苯
磷 酸 盎 、 甲基 磷 酸 傘 型 嗣 、

磷 銑 基 ) 苯基

二 乙氧 基 坑

半 乳 糖 和 甲基 傘 形 嗣

.
y

螺 旋金 剛 燒)
(

甲氧 基
、 吋硝 基 苯
。

針 吋城 性 磷 酸 晦 針吋

半乳 糖

半乳 糖 苦晦 )

其

它 的杯 祀 包 括 量 子 魚 杆 祀 、 生 色 因 杆 祀 、 晦杯 祀 、 辛 和 配 休 杆 祀 、
屯 磁 自 旋 杯 祀 、 重 原 子 林 祀 、杯 祀有 鈉 米 微粒 光散射 杯 祀 或 其 它 鈉

米 微 粒 的探 針 、 弄 硫 氧 酸 焚 光 素
歹丹明、

(F T

T

T

、 歹 丹 明 、 四 甲基
ed

藻 缸 蛋 白、

y

y

、得 克 茫 斯 虹 、P h a
H

弄 藻 虹蛋 白 P

、 位 杯杞如 FL 表

或

表位 、以 及 晦杯 祀 如城

性磷 酸 晦 、 辣根 迂 氧 化 物 時 、 1

半乳 糖 苦醇 、 城 性磷 酸 晦 、

半 乳 糖 苦 酵 或 乙 銑 肛 城 醋 酵 和 半 抗 原 偶 耿 物 如 洋 地 黃 毒 苦 或 二硝
基 苯 盼 、 或 能 侈 形 成 配 合 物 的 鈷 合 配 吋如鏈 霉 抗 生 物 素 蛋 白/ 生 物
素 、抗 生 物 素 蛋 白/ 生 物 素 或 抗 原 / 抗 休 配 合 物 如 包 括 兔 g 和抗

兔g

焚 光基 困 如傘 形 三糖 ( u b e

one) 、 焚 光素 、 弄 硫 氧 酸

焚 光 素 、 歹 丹 明 、 四 甲基 歹 丹 明 、 伊 虹 、 綠 焚 光蛋 白、 藻 虹 、香 豆

素 、 甲基 香 豆 素 、 茁 、 孔雀 綠 、 二苯 乙烯 、 焚 光黃 、 a c a d e 藍 、

二氯 三嘻基 焚 光素 、 丹磺 銑 氯 、 藻 紅 蛋 白、 焚 光胡 系 絡 合 物 如 包 括
錡 和拭 、 y
y 、 分 子信 杯 什 o e c

a

beaco n

和 其 焚 光衍

生 物 、友 光 材 料 如牟 米 諾

光散射 或 匆 胞 辰 基 因 組 共 振 材 料 如金
血

或 根顆 粒 或 量 子斑
1

uan

do

或 放射 性 材 料 如
p he

'

。

、" 、

'

"

。

、

,以 及 杆 杞有 可 本 領 域 已知 的任 何 其 它 信 于戶 生 杯 祀 物 的抹針 。 例 如 , 栓 測 的分 子 包 括 但 不 限于 焚 光基 因 以 及 前 面 所 迷 其 它 已知 的 , 在 J o e ph . 如
Tc
血

、"

或H

或 球珠

ca

S

he

La k o
pe c
P

cz

Ed

o

所編的
Pu b
o

P

nc p es
第 二版 J u
P

O

o c o py oag

p enu

p

y
a

F u o e sce ce 和 c ha d

.
do
o

a nd 的 第 六 版 的 o e c u a

obe
do

db ook 所 描 迷 的 。

在 某 些 奕 施 方 式 中 , 杆 祀 物 包 括 半寺 休 鈉 米 微 晶 如量 子 斑 ( 即

. 參 凡 U. P ,
po a

.

0

9

可八
a

ua
ae

u
ou

Do

o 灼 得 。 用 于末友 吋的 半手休 納 米 微 晶 包 括
ge

半 寺休 的 鈉 米 微 晶 如 g
e
Te

gTe

aTe

Ba
g
as

Ba e

BaTe

n

ne

nTe

d

de

dTe

H g e HgTe 和 其 混 合 物 以 及

ou

半 手休 的 鈉 米 微 晶 如
o up

na

nP

n s 和其 混合 物 。

半手休 如堵 或 桂 的使 用 , 有 札 半早休 的使 用 , 某 些 余 在 或

件 下 可 能 是 方 便 可行 的 。 半乎休 鈉 米微 晶也可 以 包 括 合 金 , 含 有 其
丙 神或 多 科 迭 自 于

ou

化 合 物 、 oup

化 合 物 、 oup

元 素 和 其 組 合 物 的 半手休 。
010

在 某 些 奕 施 方 式 中 ,焚 光 能 量 受 休 連 接 到 栓 測 探 針作 力

杯 杞 物 。 在 一奕 施 方 式 中 ,焚 光 能 量 受 休 可 以 通 迂化 合 物 占羊 哉 志

氧反座 形 成 焚 光化 合 物 而形 成 ,或 通 迂化 合 物 占一埔 助 化 合 物反座
井 將 其 持 化 力 焚 光化 合 物 而 形 成 。 迷 矣 化 合 物 可 以 包 括 于本友 明裝

置 中 的緩 沖 液 扒 在 其 它 的 奕 施 方 式 札 焚 光 能 量 受 休 可 以 是 包 括
化 芋 友 光刑 或 基 因 的化 合 物 的 一部 分 , 如 ,焚 光 能 量 受 休 可 以 包 例

括 稀 土金 屆如荷 、 杉 、 碎 等金屆絡 合 物 。 速 些 材 料 因其 具有 尖銳 的

友 光褚 帝 而 特 別 具有 吸 引 力 而 且 , 系 杯 祀物 如侍 ( 胡

) 可 以 提供 有 效 的 弋 吋 同 的信 寺友射 ,同 吋 不 易 光 漂 白,因 而 可 以 使 得 含 有 赴
理 反座 祥 品的 測 試 裝 置 在 需 要 的 情 況 下 可 以 放 置校 未 一段 吋 同 。在

各科 弄 源 和 同 源 兔 疫 測 定 法 叱 已 銓 使 用 未 青命 的 焚 光侍 ( 物 鈉 米微粒 作 力 杯 祀 物 , 如可 以 參 凡 H h nen e a 例

.

.

1) 絡 合 he

.

0

c

5 0 ( 0)

。

但 迷 些 內 部 杆 祀 的 鈉 米微 粒 勻 吋 同 分
而 且 , 迂使 用 栓 測 抗 休 淪 敷 的 高 通

辨 焚 光栓 測 一起使 用 吋 , 定 性 能 可 以 改善 。 在 弄 源 測 定 叱 低 浪 側

度 下 測 定 的功 志 范 困 可 以 扛 展

特 弄 活 性 鈉 米微粒 柄 祀物 ,而 不 是使 用 常規 杆 祀 的栓 測 抗 休 , 定 測
的功 力 芋 特 性 也可 以 改善 。 在 同 源 測 定 叱

吋于 焚 光共振 能 量 特 移

未說 , 錡

(

八 ) 鈉 米微粒 是很有 效 的供休 , 而 可 以 迸 行 筒 羊 、快 速

和 高 效 的 篩 迭 。 在 一奕 施 方 式 札 杯 祀物 如此 赴 披 露 的 焚 光杯 祀物 ,
包 括 占生 物 分 子偶耿 的鈉 米 微粒 杯 杞 物 。 抉 句 祐 玩 , 米微粒 可 以 鈉

本 用 作 栓 測 或 捕 捉探 針 。 例 如 , 友 明
霉 抗 生 物素蛋 白

,可 以 利 用 連接 到 羊 抗 或 桂

的荷

杯 杞 的鈉 米微粒 未栓 測祥 品 中特 定

如 的分析 物 , 鈉 米微粒 基 的克 疫 測 定 。 鈉 米微粒 可 以 作 力 附 看 特 定 結 合 刑 的底 物 , 些 特 定 鈷 合 荊 是針 吋分析 物 和栓 測 如杆 祀 物 ) 或 迷

. 捕 捉 成 分 的 。 有 夫 杆 祀 物 的 奕 例 可 以 參 凡 U. P
4

,
和
中披

和

U

.P
U

,

. 中則 披 露 了肢 休金扁 和 染 色 顆 粒 。 而 U. P 4 .P .

中 則 披 露 了如何 制 各和使 用 非 金局 的肢 休

露 了用 作 杆 杞 物 的有 札 聚合 物 乳 肢 顆 粒 。

[ 0 10] 把 杆 祀 物 鈷 合 到 抗 原 或 抗 休 上 的 方 法 , 以 通 迂 順 丁 可 ) 、 生 物素 活 化 法 , 烯 二 銑 亞 腰 法 ( J B och e )

.

.

(J

.
by
[0 1

he
g a ku

.

oc

),

0

疏 水鈷合 法 、 醋 活
e c hniques

化 法或弄氧酸 酯 法

En z y e 兔 疫 測 定

, pu b

hed n

ho n

如果 上 迷 杯 祀 物 力 放 射 性 同 位 素 ,則 需 使 用 好 的 防 蝠

射 的 工作 台 面 或 液休 防妒 役 各 。如 果 上 迷 杯 祀 物 力 酵 , 加 入底 物 , 需

晦 的 活 性 通 迂 比 色 法 或 焚 光汁 測 定 。 如 果 上 迷 杆 杞 物 力 焚 光 物 辰 、

友 光物友 或 有 色 物友 , 定 方 法 可 以 相 座 的使 用 本領 域 熟 知 的 方 法 測
迸行 測 定 。
[ 1

本友 明

,用 于栓 測

正 型 禽 流 感 病 毒 的祥 品 包 括 但

不 限于 功 物 或 病 人 的排 泄 物 、 口腔 和弄 腔 分 泌 物 、塢 胚 培 莽 中 的全
病 毒或 裂 解 病 毒 等 。

[ [0

栓 測 裝 置 和試 刑 盒
本友 明迂 涉 及 一科 栓 測 H 亞 型 禽 流 感 病 毒 感 染 的珍 晰
正 型 禽 流 感 病 毒 抗 原 或 抗 休 的珍 斬

試 刑 盒 ,尤 其 是栓 測 梓 品 中

試 刑 盒 。 本 友 明 所 迷 珍 析 拭 荊 盒 包 含 至 少 一神 本 友 明 所 迷 羊 克 隆 抗

休 。 本 友 明 所 迷 珍 析 試 荊 所 使 用 的本 友 明 所 迷 羊 克 隆 抗 休 井 不 做 特

可 別 限制 , 以 是任 何 一株 祺 別
Fab

血 凝 素 抗 原 的羊 抗 , 可 以 是本 也
ab

友 明 所 迷 的 具 抗 原 特 弄 性 的 任 一羊 抗 的 抗 休 片 段 ,如 F
Fa b 等 。
[ ]

,、 ,

一方 面 , 友 明 涉 及 丙 神栓 測 本 正型 禽 流 感 病 毒 的拭 荊 盒 , 些 試 刑 至 少 包 括 一科 羊 抗 或 者 是 它仞 的 活 性 片 段 或 者 是 突 迷 本 交 休 。 伉 迭 地 , 友 明 的 試 刑 盒 迂 包 含 這 合 栓 測 抗 原 抗 休 反座 的
栓測試刑 。
[ ] 另 一方 面 , 友 明 涉 及 一科 栓 測 抗 H 亞 型 禽 流 感 病 毒 本

抗 休 的試 刑 盒 , 包 括 至 少 一神本 友 明 所 迷 羊 抗 或 其 活 性 片 段 或 其 它

本 突 交 休 。 伉 迭 地 , 友 明 中 所 迷 拭 刑 盒 包 含 這合栓 測 抗 原 抗休反
座 的栓 測 試 荊 。

[0 1

本友 明 的珍 析 試 刑 盒 中 涉 及 的 固 休 支持 物 或 固 相 支持

物 包 括 但 不 限 于微 孔 板 、 磁 微 粒 、兔 疫 色 禧 用 漩 紙 、 聚 合 休 例 如 聚

苯 乙烯 、 玻 璃 珠 、 玻 璃 淚 器 和 其 它 不 溶 的 栽 休 。 在 一 奕 施 例
明 的抗 休 所 淪 益 。

, 一

介 包 含 多 介 隔 同 或 匹 域 的 固 相 支持 物 屯 至 少 有 一介 隔 同 用 本 友

伉 迭 的是 ,至 少 一介 隔 何 或 第 一介 隔 同 用 本

友 明 的 抗 休 所 淪 蓋 , 且至 少 一介 剩 余 的 隔 同 (或 第 二介 隔 同 用 可 井 H H H H H 以 和 禽 流 感 病 毒 除H 以 外 的 亞 型 側 如,
H

H

H

,

H

H

O

H

結 合 的抗 休 所 淪 蓋 ,仇 迭 的是 亞 型 H
[0

H

,

H

Hg

.

可以 特弄 性地

本 友 明 的珍 晰 試 刑 迅 包 含 一些 其 它 成 分 ,包 括 但 不 限

于 杆 祀 用 的 晦 、 相 座 底 物 、 放 射 性 同 位 素 、 反 光物 底 、 焚 光 物 底 、
有 色 物 底 、 鍰 沖 液 和板 奈 以 及 前 面 提 到 的堵 如此 美 的 物 底 。
[0

本 友 明 的珍 晰 拭 刑 中 ,所 使 用 的友 明 羊 抗 必 須 預 先 包
。 Ta e

被 在 固 相 支持 物 上 。 在 一仇 迭 的 奕 施 方 式 札 吋 包 被 的 羊 抗 迸 行 方 向定位舍有 助 于提 高 抗 原 抗休 結 合 效率
(P
oon

ha 等

o eo

cs

1

1

200

已征 奕 控 制 預 包 被 蛋 白分 子 的枸

相 化 蛋 白的反座 活 性 及 效什 。 文 扶 已扳 道 迂 多 神 方 法 能 移 把 抗 休 按
預 定 枸 象 方 向結 合 在 固 相 支持 物 上 。 h a n e n g 等 (

o eo
J

c

2

7

0)

曾 扳 道 迪 利 用 核 酸 連 接 蛋 白的 方 法 使 蛋 白分 子 以 相

同 的 空 間 定位 結 合在 某 介表 面 上 。 o e

n e ,M 等

.. 川

E

.

.

0
ad

00

扳 道 了一科 能 把 包 括 抗 休 和 抗 原
n g e 反座

在 內 的蛋 白通 迂

ge 連 接 反座 而 以 一科 相 同 的 方 式 結 合 到
a ud

某 介表 面 上 的方 法 。 在

,

,垂 氮 化 合 物 和磷 硫 酯
( na

反座 形 成 一神氨 基 化 合 物 。 H
09
2 006 )

ong hang 等

.

he

扳 道 了 一神通 迂 抗 休 Fab

片 段 上 的 自 由硫 醇 反座

依 將 鍍 金 的磁珠 上 抗 休 定 位 到 顆 粒 表 面 的 方 法 , 搪 迷 介 , 有 抗 休 所

上 的 抗 原 鈷 合 位 焦 都 定 位 于 一介 理 想 的枸 象 上 。 a
he
B .,

等(
P o eo

.
c

Phys

.
,

0

0

)
e ung

曾 扳 道 將 抗 休 吸 附 到 辛 水桂 氧
e o ng

化 物 / 水表 面 的 方 法
1
00

yong

等

,

)

概 括 了 定 向地將 蛋 白 固 定 到 某 介 表 面 的 方 法 以

及 在 速 些 方 法 中 所 用 到 的蛋 白分 子 。 所 有 速 些 參 考 文 猷 都 被 完 整 地
仁 鈉 在迷里 。
01 0

本 友 明 的珍 斯 試 刑 盒 中 ,所 使 用 的羊 抗 或 抗 原 必 須 事 本 友 明 迅 涉 及 一科 可 自 功化 栓 測 祥 品 中 的 禽 流 感 病 毒

先 用 上迷 提 到 的 杯 祀 物 存 祀 。
[01

的 自 功化 栓 測 裝 置 。
[0

現有 技 木 中 已 銓 公 升 了各神 利 用 兔 疫 化 芋 栓 測 生 物 液
法"

祥 品 中是 否 存 在 分析 物 的裝 置 。 迷 矣 裝 置 可 以 利 用 所 硝 的 " 夫

測 定 ,例 如 , 目林 分析 物 如抗 原 夫在 杯 祀 的抗 休 和 固 定 在 固 相 支持

物 的抗 休 之 同 。通 迂現察 是 否 存 在 結 合 的抗 原 杆 祀 的抗 休 夏合 物 和 /
或 其 敖 量 而 迸 行 測 定 。 迷 矣 裝 置也可 以 采 用 竟 爭 法 克 疫 測 定 , 中 , 其

將 鈷 合 于 固相表 面 的抗 休 占含有 未知敖 量 抗 原 分析 物 的祥 品以 及 占
同 祥 矣 型 的杯 祀抗 原 迸 行接 蝕 。 然 后 , 定 結 合 于 固 相 表 面 的杆 杞 測

的抗 原 的數 量 ,以 而 力梓 品 中 抗 原 分析 物 的救 量提 供 同接 的 測 量 。
不 同 的 測 定 可 以 利 用 這 于測 定 不 同 分析 物 的裝 置 ,例 如 , 不 同 的 將

抗 休 或 抗 原 結 合 于 測 試 底 物 的攻汁 匹 或 可子址 匹
膜)
。

( 如吸水 或 非 吸水

也 由于 速 些 方 法 以 及 下 面 村 奄 的 其 它 的 方 法 既 可 以 栓 測 抗 休 ,

可 以 栓 測 抗 原 , 伯 通 常竹 作 兔 疫 化 芋 配 休 受 休 測 定 或 筒 私 兔 疫 測 它
定 法.
[0

固相 兔 疫 測 定 裝 置 , 掩是 夫 元

法 矣 型 返 是竟 爭 法 矣

型

, 可 以 吋生 物 液梓 品如血 液 或 尿 液 中 的分析 物提供 炙 敏 的栓 測 。 都

固 相允 疫 測 定 裝 置 包 括 固 相 支持 物 , 中 , 休 受 休 吋 中 的 一員 其 配

,

早 通 常是 抗 休 、 抗 原 或 半抗 原 , 合 于 亥 固相 支持 物 上 。 通 常 , 期 結

的 固相 支持 物 的形 式 力 平板 、 拭 管 或 聚 苯 乙烯 珠 , 在放射 兔 疫 測 速

人 定 和晦兔 疫 測 定 中是 熟 知 的 。 最 近 , 仞 采 用 各神 多 孔 材 料 如尼 尤 、
硝 化 仟 堆 素 、 乙酸 仟 堆 素 酯 、 玻 璃 牙 堆 和其 它 的 多 孔 聚合 物作 力 固
相 支持 物 。 人們 也公 升 了井 多
自 身 帝兔 疫 測 定 的 試 刑 盒 , 采 用 多 其

孔 材 料 作 力 克 疫 化 芋 成 分如抗 原 、 半抗 原 或 抗 休 的 固相 栽 休 。 通 常
迷 些 試 刑 盒 在 玫 汁 上可 以 采 用 仟 堆 素 試 紙 、 流 通 或 或 迂 移 。 本 友 明
中可 以 采 用 任 何 常規 的 、 已知 的裝 置 未 完 成 兔 疫 測 定 或 特 弄 性 結 合

測 定 ,以 栓 測 流 感 。

01

在 某 些 方 面 本友 明 包 括栓 測 由各神 流 感 病 毒或 其 亞 型
以 測 定 祥 品是 否 被 一神 或

引起 的感 染 的裝 置 。 在 某 些 奕 施 方 式 札 將 含 有 一神 或 多 神 流 感 病

毒 或 抗 流 感 病 毒抗 休 的祥 品送入裝 置 叱

多 神 流 感 病 毒或 其 亞 型 感 染 的主休 。 包 含 固相 支持 物 的裝 置 可 以 包

括 置 于其 上 的 抗 流 感 病 毒 抗 休 或 流 感 病 毒 抗 原 , 而 可 以 吋 杯 疑含 八
有 流 感 病 毒 、 流 感 病 毒蛋 白或 抗 流 感 病 毒抗 休 的祥 品迸 行 測 定 。 在

井多 奕 施方 式
羊抗
Mb

, 友 明裝置 中所 使 用 的抗 休 包 括但 不 限于 本

多抗、

或 其保 守 性 或 功 能 性 交 休 、嵌 合 抗 休 、交 形 抗 休 、人 源 化

抗 休 、 其 生 物 活 性 片 段 或 迷 些 抗 休 的任 意 組 合
以 栓測 流感 病 毒 。 例 如 ,

此 赴 功 能 性 抗休或

八 其 片 段 , 整休 上併 就是指 抗 休 。 本友 明 的抗 休 可 以 迢座 任 何 裝 置 ,
禽 流 感 病 毒 可 以 通 迂靶 定 祥 品 中 的

蛋 自或 抗
流感 病 毒

H
(

正型 抗 休 而 予 以 梓 測 。 在 一奕 施 方 式

.

, 是未 自禽

0

市 功上 胸 得 的井 多 裝 置 可 以 很 容 易地 安裝 ( 或 附加 此

赴 所 公 升 的抗 休 或 抗 原 。 迷 些 裝 置 可 以 包 括栓 測 方 法 中 所 使 用 的 固

相 底 物 ,包 括 但 不 限于微 孔板 、 磁珠 、克 疫 色 措 用 的 濾 紙 、 聚合 物

如聚 苯 乙烯 、 玻璃 珠 、 玻璃 淚 器 和其 它 不 溶 性 的 栽 休 。 底 物通 常可
以 是但 不 限于 下 列 形 狀

帝狀 、 板 狀 、 忍 片 、 球狀 、 珠 狀 、 孔 狀 如

微 滴 定 板 上 的孔 、 或 任 何 其 它合 這 的形 狀 。 而 且 ,結 合 其 配 合 搭桔

(

g

微 抗 原 或 抗 休 ) 的可 以 是任 何 形 狀 , 如 , 滴 定 盎 、 試 管 、 仟 例
管 、 珠 、 自旋盎 等 等 。 合 這 的材 料 包 括 玻璃 、 塑
、 聚 丙 烯 、 聚 苯 乙烯 等 ) 、蛋 白、 紙 、碳 水化 合 物

堆 素 試紙 、微 禹

料 (如聚 乙烯 、
ea

和 其 它 的 固相 支持 物 。 其 它 可 以 使 用 的材 料 包 括 陶 瓷 、 金局 、

o d 、 半寺 休 材 料 、 水 泥 等 。 在 某 些 奕 施 方 式 叱 兔 疫 測 定

法 (如 EL

微 滴 定板 包 括

孔、

孔板 或

孔 的形 式 ,

如 或 吏 多 的孔 , 其 它 商 用 板 。
[0
ca

] 一些 可 以 使 用 的裝 置 包 括 仟 堆 素 試 紙 、 側 流 裝 置 、
U

dge 、 多 重 裝 置 、微 滴 定板 、微 流 裝 置 、板 或 陣列 或 高 通 量 的

平 乞 如在 下 列 美 團 舌 利 中 所 公 升 的
6
9
,

.舌利 考 .
5

6
0

00

,
0

6
9

0 00

6

,
0

2
5

, ,

,0 ,

1

, ,

00
0

2

6

109 0

和

91

微 . 1 例 如 , 流 裝 置 可 以 是 U. P

.

,

和 0 2 00 / 0
[0 ] 仟 堆素拭紙

中所公升 的 。

在 一些 很 平 常 的 牙 堆 素 試 紙 測 定 中 , 家 用 杯 孕 和排 卵 如

栓 測 試 刑 盒 中 , 疫 化 孕 成 分如抗 休是 鈷 合 在 固 相 上 。 栓 測 裝 置在 克
杯 疑 含 有 未知 抗 原 分析 物 的祥 品 中 蘇 一下 , 后 保 溫 培 育 。 或 者 也 然

可將 少 量 的祥 品置 于祥 品接 受 匹 中 。 然 后 加入杆 杞 的抗 休 , 栓 測 井
杯 杞 物 , 力 感 共趣 的分析 物是 否 存 在 的指 示 。 在 某 些 情 況 下 , 作 杯

祀 物 是晦 , 祥 ,需 要加入晦杆 祀 的抗 休 , 可 同 吋加入或 在保 溫 迷 其
培 育 后 加 入 。 然 后 ,清 洗 裝 置 , 將 其再 插入到 含 有 時的底 物 的 第 井

二溶 液 中 。 如果存 在 酵杯 杞 , 舍 占底 物友 生 相 互 作 用 ,使 得 戶 生 其 要 帝 色 的 戶 物 , 戶 物要 么 作 力 沉 涎 物 沉 私 到 固 相 上 , 么 在 底 物 溶 咳
液 中戶 生 可見 光 的 交 化 。 Ba x e

等 在 EP

中公 升 了迷

祥 的夫

形 仟 堆 素 試 紙 的兔 疫 測 定

.a

e

等 在 EP

2

中公 升 了一科 可 以 用 于 竟 爭 法 測 定 的 仟 堆 素 拭 紙 裝 置 。 T 仟 堆 素 試

紙 的材 料 、 形 式 以 及杆 杞 物是 已知 的 ,而 且可 以 用 于 流 感 栓 測
仟 堆 素 試 紙 裝置 的 奕 例 包括 U

。

.P , .

0、

,

0

,

和 ,0

中 所 描 迷 的 。 在 某 些 奕 施 方 式 叱 本友 明 亞型

可 的抗 休 可 以 置 于 牙 堆 素 拭 紙 裝 置 上 。 例 如 , 以 使 用 固 相 支持 物 仟

栓 堆 素 試 紙 , 測 祥 品 中 的抗 H
多 赴 基底

抗 休 , 中可 以 在 一赴 或 其

a

) 魚 位 安裝 咳 試 紙 。 一赴 基 辰 可 附 看有 非 特 弄 性

控 制 的抗 休 或 其 功 能 性 片 段 。 迷 些 基 底 魚 位 可 以 是蛋 白鈷 合 位 和 /

但 或 抗 原 鈷 合 位 ,而 且通 常是 由硝 化 仟 堆 素 制 得 的 , 也可 以 使 用 本
領 域 已知 的任 何 這 占 的媒友 , 某 些 尼 尤和 聚 偏 乙烯 矣 。 在 某 些 奕 如

施 方 式 叱 可 以 在 固相 支持 物 附 看 多 中基 底 , 一基 底 含 有 針 吋 多 每

神 亞 型 流 感 病 毒 的抗 原 或 抗 休 。 02 連琪 流
01 0 連 琪 流 型 允 疫 測 定 裝 置 的役 升可 以 避克 牙 堆 素 試 紙 測
定 中 所 需 要 的 大量 的培 有 和 清 洗 。 a k

等 在 U. P 4

.

0

吋 中公 升 了 一神 包 括 抗 休 ( , 目杆 抗 原 分析 物 具 有 特 弄 性 ) 的裝 置 ,
咳 抗 休 桔 合 于 多 孔 性膜 或 濾 器

,而 咳 裝 置 中加入液休 祥 品。 由于

液休 流 鉅 或 連 琪 流 迂膜 叱 目林 分析 物 結 合 到 抗 休 上 。 在加入梓 品

之后 ,可 以 再 加入杆 祀 的抗 休 。 杯 祀抗 休 的 目視栓 測 可 以 指 出祥 品
2 o e 等 在 EP 中公 升 了一科 在 連 婪 流 裝 置 上 的 改迸 , 其 , 杞 的抗 休 附 栽 到 一膜 , 杆 亥膜 起 到 試 刑 侍 送 休 系 的作 用 。 迷 梓 的裝 置 可 以 包 括吋梓 品 中 的成 分起 迂 滾 器 作 用 的居 , 包 括栓 測 中 所 使 用 的試 荊 。 占梓 品八 一居 井 在 流 向另 一居 吋 , 占特 定 的 結 合 試 荊 接 蝕 井友生 反座 , 某 些 情 況 其 下 , 祀休 系 中 的組 分可 以 提 供 是 否 存 在 目杆 分析 物 的指 示 。 杯

中是 否 存 在 目杯 抗 原 分析 物 。

o

0

允疫 迂濾 裝置

克 疫 迂 漩 裝 置 可 以 八 市 功上 胸 得 如 P e c e ,
)

oc

o d,

, 且可 以 很 容 易 地迸 行 改造 , 附 栽 本友 明 的抗 休 。 在 晦取克 而 以 , 疫 流 功 測 定 法 EL F ) 在 孔梓 品板 和具 空 室之 同 使 用 硝化 坪 堆 素 膜 。 反座 刑 加 到 祥 品板 上 , 空使 得 反座 刑 通 迂 咳硝化 坪 堆 素 其
力 了迸 行栓 測 ,在 添 加 晦底 物 前 ,在 收 集 室 中放 置 一微 量 培 莽 板 ( 微 孔板 ) 。 具 空使 得
膜 。 套 管 將 沒有 桔 合 的 戶 物 特 移 到 收 集 室
。

帝 色 的戶 物 特移 到 微 量培 莽 板 的孔

,以 便在 自功化 的微 量培 弄板

棲 取 裝 置 上迸 行分析 。 EL F 休 系 包 括精 硝 切割 的 聚 甲基 丙 烯 酸 甲
酯 有 札 玻璃 , 帝有 密 封 墊 臥 八 而 能 移 提供 八 一介 孔 到 另 一介 孔 井

之 同 恆 定 的 流 率 。 套 管 可 以 精 硝 地 將 帝 色 的戶 物 持 移 到 微 量 培 莽 板
的孔

, 便 迸 行分析 。 本友 明 的捕 捉 抗 休基 本 上是 魚 在 底 物 上 如 以

微 滴 定 板 、膜 或 忍 片 ) 。 施 加 杯 疑 帝有 流 感 病 毒或 流 感 病 毒 抗 原 的生
使 加 物 梓 品井 迸 行 孵 育 , 得 捕 捉 抗 休 占其 桔 合 。 隨后 , 入栓 測 抗 休 。
U5

. 舌 利 申清 .

00

/0 0

公 升 了一神 高 通 量 的兔 疫 迂 濾 裝 置 。

在 荊 。 圭 祥 品占特 定 的 結 合 試 刑 友生 反座 , 某 些 情 況 下 , 祀休 系 杯
中 的組 分就 可 以 提供 是 否 存 在 某 一分析 物 的指 示 。

01
[0
參 見 To

側 流裝置

在 側 流 測 定 中 ,刊 用 某 些 或 全 部 的栓 測 用 拭 荊 未 浸 潰
等 的 U. P

膜 。 提 供 分析 物栓 測 匹 ,井在 咳 匹栓 測 杯 祀 的 分析 物 。 例 如 ,可 以

和 Zuk 的 EP

已知

吋 于側 流栓 測 裝 置 可 以 迸 行井 多 改迸 。 迷 矣 裝 置 可 以 包 含 某 些 特 弄
性 結 合 栓 測 中 的 拭 刑 (祥 品在 施 加 到 側 流 帝之 前 可 以 勻 某 些 試 荊 反
座 , 者 可 以 依 次 地在 側 流 帝上 添加額 外 的試 荊 或

, 者 側 流 帝可 以 或

包 含 用 于 特 弄 性 皓合 栓 測的 所 有 必 須 的試 荊 。 側 流 裝 置 婪 常 包 含 拭

荊

,迷 些 試 荊 可 以 附 看在 彩 色 杆 祀上 , 而 可 以 直接 現 察 到 栓 測 結 八
ns e n 的

可 果 ,而 不 需 要迸 一步 添加 其 它 物底 。 例 如 , 以 參 凡 Be

U

.P ,
99
。

0

ay

等人 的 0 8 / 0

和

n g 等 人 J BP

迷 矣 裝 置 通 常如此 枸 建 , 其 包 括 施 加祥 品的位 置 、 試 刑 使

匹 和栓 測 匹 。 此 矣 裝 置通 常是 由吸水 材 料 制 得 的 , 祥 可 以 使 得 祥 迷

品八祥 品施 加 匡 銓 試 刑 或 反座 匹 連 琪 流 至栓 測 匡 。 冬 管 某 些 反座 在

反 祥 品施 加 到 帝上之前可 能 就 已友 生 ,在 某 些 奕 施 方 式 中 , 座 匹 包
括 用 于兔 疫 測 定 的試 刑 。 一科 特 弄 性 鈷 合 試 刑 如抗 休 , 可 以 扒 散 其

使 性 地 結 合 到 祥 品施 加 匹 或 反座 匹 的 帶上 , 得 其 能 移 結 合梓 品 中 的

可 抗 原 , 勻 祥 品一起 沿 帝 流 功 。 在栓 測 匡 , 以 直接 用 抗 原 或 抗 休 井
捕 也 的 另 一特 弄 性 結 合搭梢 , 捉 抗 原 抗 休 夏合 物 , 者 , 可 以 用 另 或

如 外 的 特 弄 性 結 合搭 桔 , 抗 生 物 素 蛋 白或 健 霉 抗 生 物 素 蛋 白和 生 物
素 ,同接 地 予 以 捕 茨 。 矣 似 地 ,杆 祀 物 可 以 直接 地 或 同接 地 附 看 在

. 抗 原 或 抗 休 上 。 流 裝 置 的 奕 例 可參 凡 U. P 側
(E
0
0

,,
0
0

,

, ,
9

,
0
0

6

5

2
0

220

0

1

,

和
6

而
6

U5P

. .

4

0

,0
中則

1

0

和

1

公 升 了其 它 的側 流 裝 置 , 可 以 改迸 ,以 便 用 于栓 測 液休 祥 品 中 的 其
多 介 分析 物 。

0

常規技 木 中 可 以 在 一羊 一的 測 試 帝 中 力每介 分析 物 建

立羊 狂 的栓 測 匹 , 而 可 以 栓 測 一介 祥 品 中 的 多 介 分析 物 。 通 迂使 八

可 用 不 同 的杯 祀物 或 者 在 不 同 栓 測 匹栓 測 同 一杯 祝 物 , 以 四分 不 同
的分析 物 。 可 以 采 用 任 何 常規 的裝 置 , 成 吋 多 介 分析 物 的 測 定 。 完

兔 疫 測 定 利 用 兔 疫 休 系 的和制 , 叱 占存 在 致 病 的抗 其

肌 原 或 外 未 弄 物 吋 , 休 就 舍作 出反座 , 生 抗 休 。 迷 些 抗 休 和抗 原 , 戶

也 即 兔 疫 反座 物 ,能 移 彼 此 結 合 , 而 戶 生 一神 高 特 弄 性 的反座 札 八

制 , 札 制 可 以 用 未 硝 定 測 試 祥 品 中是 否 存 在 特 定 的抗 原 以 及 其 沫 咳

度。
[0 ] 迷 祥 的側 流 裝 置通 常 包 括 一 孔 性 膜 , 任 迭 地 血 栽 于 侈 其

一般 地 , 多 孔 性膜 可 由井 多 材 料 制 得 , 能 移 允井 咳 其 流 休 通 迂 即 可 。 例 如 , 于 形 成 多 孔 性 膜 的 材 抖 包 括 但 不 限于 天 然 用 材 料 、合 成 材 料 、或 自 然 存 在但 婪 合 成 改性 的材 料 如 多 糖 (如 坪 堆 素 材料 如紙 、 年 堆 素衍 生 物 如 乙酸 牙 堆 素 酯 、 硝化 年 堆 素 聚 謎珮 聚 乙烯 尼 尤 P F 聚 酯 聚 丙 烯 二氧 化 桂 元 札 材 料 如 天 桂 活 氧 化 裙 , 藻 土 , 硫 酸 鎂 , 其他 元 和微 匆材 料 , 些 材 料 均 亞 或 迷 勻 地 分布 于 多 孔 聚合 物 基 休 中 , 合 物 如氯 乙烯 ,乙烯 氯 丙 烯 共 聚 聚 物 ,乙烯 氯 乙烯 醋 酸 盎 共 聚 物 ,自 然 生 成 的 銀 物 如棉 花 或 合 成 多 孔 滲 水 肢底 , 桂肢 , 脂 糖 , 旋 如 右 的 ( 如尼 尤或 人造 仟 堆 涼 如 糖 苦和凝 肢 聚合 薄 膜 , 聚 丙 烯 銑 腰 或 其 矣 似 物 。 在 一介 特 別 奕 "
剛 性 材料 上 。

施 方 式 中 , 迷 多 孔 滲 水膜 有 硝化 仟 堆 素 和 / 或 聚 謎珮 材 料 形 成 。 座 所
核 理 解 的是 所 迷 木禧

"硝化 牙 堆 素 "

指 仟 堆 素 硝 酸 酯 ,它 可 以 只 是

硝 化 仟 堆 素 或 是 它 占硝 酸 酯 或 其他 酸 酯 的 混 和物 , 帝有 如
原 子 的脂 族 梭 酸 。

介碳

01

迷 祥 的改各也可 包 括 一介 含有 吸收村 墊 的余 帝 , 奈 帝 此

赴 于 所 迷 測 試 / 栓 測 或 吋 照 匹 的上 游 或 下 游 。如本領 域 技 木人 員 所 熟

知 ,所 迷 吸收村 墊 可 祁 助 促 迸 毛 匆 管 作 用 力 式 液休 流 通 迂 所 迷膜 。

吸 在 某 些 奕 施 方 式 中 , 收村 墊 可含 有 可移 功 的兔 疫 測 定 試 刑 ( 如 ,
抗休 )
。

占 然 , 要理 解 的是 , 迷 可移 功或 固 定 的允 疫 測 定 試 荊 需 所

也可 以 被 赴 理 在 所 迷 測 試 / 栓 測 或 吋 照 匹 的上 游 的任 何 位 置 , 像在 就
栓 測 系 統 的羊 狂 組 分 中一祥 。
[0 ] 在井 多 奕 施 方 式 中 , 些 合 這 的材 料 可被 用 于 形 成 所 迷 有
包 多 硝 祥 品村 墊 , 括但 不 限于 , 化 坪 堆 素 , 堆 素 , 孔 聚 乙烯 村 墊 , 牙

坪 堆 玻 璃 試 紙 。 如果 需 要 , 品村 墊 也可 包 括 一神或 多 神預 赴 理 的 祥

分析 試 刑 ,它 仞 或 共介地或 非 共份地 結 合 到 村 墊 上 。 所 迷待 測 梓 品
伙梓 品村 墊 上持 移 到 占祥 品村 墊 一端 連 通 的 鈷 合 村 墊 上 。 所 迷 結 合
村 墊 由一神可供 液休 流 通 的材 料 形 成 。 例 如 , 一奕 施 方 式 叱 所 在
迷 桔 合 村 墊有 仟 堆 玻璃 形 成 。 座 占 理 解 的是其他 結 合 村 墊 也可用 于

在 本友 明 。 可迭 梓 地 , 某 些 奕 施 方 式

,結 合 物 或 其他 允 疫 試 刑 可

被 包 括在 一介 粗 分 札 所 迷 粗 分在 座 用 到 栓 測 帝之 前 占梓 品混合 。 [ 0 0 力 方 便栓 測 待 測 祥 品 中被 分析 的存 在 七 否 , 在 所 迷 結 可

合 村 墊 上座 用 多 科 栓 測 探 針 。 占 迷 些 栓 測探 針 在 鈷 合 村 墊 上 ,占被

分析 物 伙祥 品村 墊 流 到 皓合 村 墊 吋 , 些 探針 仍 然 可供 被 分析 物 結 迷
合 。 一杰 結 合 到 被 分析 物 , 測 探 針 隨后 被 用 未 唳 別 被 分析 物 的存 栓
在 占否 。 栓 測 探 針 可用 于分析 的栓 測 或 是杯 准 。 但在 另 一介 奕 施 方
式 叱 羊 狂 的杯 准 探 針 可被 座 用 到 鈷 合村 墊 上 ,以 占所 迷栓 測 探 針
結 合 以 便 同 吋杯 准 化 井栓 測 , 以 可 以 消 除常規 分析 杯 准 系 統 通 常 所

寺 致 的措唳 。
[0

在 一些 情 況 下 , 能 需 要 以 某 科 方 式修 飾 所 迷栓 測探 針 可

以 便 它伯 史 容 易 結 合 到 被 分析 物 上 。 在 迷 神 情 況 下 , 迷栓 測 探 針 所

可被 特 定 的特 弄 性 結 合 元件 所 修 飾 ,所 迷 特 弄 性 結 合 元件 拈 合 到 栓
測 探 針 上 以 形 成 桔 合探 針 。 特 弄 性 桔 合 元件 一般 指 特 弄 性 桔 合 配 吋

如丙 的 一介 元件 , , 神 不 同 的分子 , 中一介 分子化 孕 性 和 / 或 物 理 其
允 性 地 結 合 于 另 一介 分子上 。 例 如 , 疫反座 性 特 弄 結 合 元件 可 包 括
抗 原 、 半抗 原 、 配 合 休 、 抗 休 物 ,包 括 那 些 由重 組
DN

初 圾 的或 二圾 的 和 它伯 的腐 惡 貸

方 法 或 合 成 肢 方 法 形 成 的 物底 。 抗 休 可 以

是羊 克 隆抗 休 或 多 克 隆抗休 ,重 組 蛋 白或 它仞 的 混 和物 或 片 析 , 或
抗 休 于 其 他 特 弄 性 結 合 元件 的 混 和 物 。 准 各 迷 祥 的 抗 休 的 細 市 及 它
們 作 力 特 弄 性 結 合 元件 使 用 的合 這 性 在 此 公 升 。 其 他 普通 特 弄 性 鈷

合 配 吋 包 括 但 不 限于 ,生 物 素 和抗 生 物 素 蛋 白 ( 或 其衍 生 物 ) ,生
物 素 和桂瑣 狀 球 茵 抗 生 物 蛋 白, 矣 和血 凝 素 ,朴 充 的核 苦 酸序 列 糖

( 包 括 探 針 和在栓 測 目杆 核 酸序 列 的
酸序 列 )

N

染 交 測 定 中使 用 的捕 茨核

,朴 充 的 肢序 列 ,包 括 那 些 由重 組 方 法 形 成 的 肢序 列 , 效

晦 時 座 分 子和 受 休 分子 , 素 和 激 素 結 合 蛋 白, 埔 因 子和晦 , 抑 制 激
物 和 晦 ,等 等 。 而 且 ,特 弄 性 皓合 配 吋 包 括 占原 始 特 弄 性 元件 相似

被 被 的元件 。 例 如 , 分析 物 的衍 生 物 或 片 斬 , 如 , 分析 物 矣 似 物 , 例
都 可被 座 用 , 要 它含 有 至 少 一介 勻 被 分析 物相 同 的表位 。 只
例 如 , 一奕 施 方 式 在

, 有 栓 測 祥 品的 流 休 被逗 送 到 含

金杯 墊 , 金杯 墊 赴 分析 物 和被 一神 特 殊 鈷 合 元件 修 飾 迂 的栓 測 探 在
舛 混合 以 形 成 分析 物 夏合 物 。 困 力金 杆 墊 占多 孔 參 水膜 之 同 流 功 切
通, 以 所
所 迷 夏合 物 可 以 八金 杆 墊 出 特 移 至 多 孔 參 水膜 上 的栓 測
匹 。 或 者 , 以 通 迂 整合 不 同 抗 原 ( 可

如 ,不 同 流 感 病 毒 或 未 自 不 同

流 感 病 毒 的 病 毒 抗 原 ) 的 特 弄 抗 休 未 利 用 多 介 栓 測 匹 域 。 所 迷栓 測
匹 域 可含 有 固 定 荊 , 迷 固 定 刑 一般 可 以 和分析 物 和 / 或 分析 物 夏合 所

物

如 , 析 物 和栓 測 探舛 的 夏合 物 ) 形 成化 孚 或 物 力 連 接 。 在 某 分 如 些 奕 施 方 式 札 所 迷 試 刑 可 以 是一神 生 物 試 荊 , 本 文公 升 的抗 休 。
或
、 抗 生 物 素 蛋 白、桂 霉 抗 生 素

其 他 生 物 試 刑 已 力 本領 域 的技 木人 員 所 熟 知 ,它仞 包 括但 不 限于 ,
抗 原 、 半抗 原 、 抗 休 、 蛋 白辰

蛋 白或 它佣 的 夏 合 物 。 在 某 些 情 況 , 仞 希 望 迷 些 生 物 拭 荊 具有 和 人
分析 物 和 / 或 分析 物 均 栓 測 探 針 的 夏合 物 結 合 的 能 力 。
「 0

迷 些 拭 刑 用 于栓 測 探 舛 / 分析 物 夏合 物 的 固 定 結 合 位

分 如 含 魚 。 在 某 些 情 況 下 , 析 物 , 抗 休 、抗 原 等 , 有 丙 介 鈷 合 位 魚 。

一旦到 迭栓 測 匹 , 中 的一介 結 合位 志 被 夏合探 針 的特 弄 結 合 元件 其 占搪 。 但是 , 析 物 的 未被 占搪 的位 魚 可 以 和 固 定 荊 結 合 。 一旦和 分 固 定 刑 結 合 , 合 探 針 就 形 成 一神新 的三重 夫 式 夏合 物 。 夏 0 栓 測 或 測 試 匹 一般 可 以 提供任 意 敖 量 的 不 同 栓 測 匹 域 , 以 便使 用 者 可 以 更好 地 決 定 待 測 梓 品 中 特 定 分析 物 的存 在 占否 。 每 介 匹 域 都 含 有 相 同 的試 刑 或 含 有 固 定 多 神分析 物 的 不 同 試 刑 。例 如 ,

栓 測 匹 可 能 包 括 丙 介 或 史 多 的 不 同 栓 測 匹 域 ( 如 , 狀 、志 狀 等 ) 域

。

栓 測 匹 域 可 能 被 赴 理 成 域 狀 的形 式 , 方 向占待 測 祥 品流 功通 迂分 其
析 裝 置 的 方 向 奕 底 上垂 直 。 同 梓 , 某 些 奕 施 方 式 中 , 測 匹 域 可 栓 在
能 被 赴 理 成 哉 狀 的形 式 , 方 向占待栓 測 祥 品流 功通 迂分析 裝 置 的 其

方 向 奕 底 上平 行 。
01

在 某 些 情 況 下 , 迷膜 也可 以 硝 定 一介 吋照 匹 未 示 , 所

它 可用 未拾使 用 者 一介 分析 正常迸 行 的信 寺 。例 如 , 迷村 照 匹 ( 未 所

示

可 以 含有 一神 固 定 刑 ,所 迷 固 定 刑 一般 具有 和探 針 或 固 定 在 探
或
、 抗 生 物 素 蛋 白、 健 霉 抗 生 素

針 上 的拭 刑 化 孕 和 / 物 理 結 合 的 能 力 。速 神 試 荊 包 括 但 不 限于 , 如 , 倒
抗 原 、 半抗 原 、 抗 休 、 蛋 白戾

蛋 白、 二圾 抗 休 或 它佣 的 夏合 物 。 另 外 , 可 能 希 望使 用 各科 不 同 也
的 非 生 物 材料 作 力吋照 匡 試 荊 。 例 如 , 某 些 奕 施 方 式 叱 所 迷吋 在

如 可 照 匹 試 刑 可 能 包 括 一神 聚合 屯 解 底 , 上 所 迷 的 , 能 皓合 到 未被
固 定 的探 針 上 。 因 力 所 迷吋照 匡 的試 荊 只 吋探 針 是特 弄 性 的 , 拾 元

分析 物 是 否 存 在 都 舍有 信 寺 形 成 。 所 迷吋照 匹 可 以 被放 置在 沿 看膜
但 的任 何 位 置 , 仇 迭 位 于栓 測 匹 的上 游 。
01

使 用 迷 神分析 裝 置栓 測 某 神分析 物 是 否 存 在 可 以 使 用
式的 式 測 定 的例 子參 凡

各神 不 同 的形 式 。 例 如 , 上迷 奕 施 方 式 中 ,利 用 了一神 失 在
方 式 。 其他 利 用 此 失

ubb 等人 的 美 團 舌 利 第
2

,8 1

寺 ,以 及 T o

的美 囚舌利 第

,

1 考 , 些 文 猷在 迷

也 如 此 被 完 全伕 引 用 。 另 外 , 可使 用 其他 方 式 , 竟 爭 式 。 在 竟 爭 式
分析 中 , 祀探 針 通 常和一介 勻 分析 物相 同 或 相 似 的分 子配吋 。 所 杯
以 , 祀探 針 就 和待 測 分析 物 竟 手可 以 利 用 的拭 刑 。 杯

在栓 測 分析 物

如半抗 原 吋通 常用 竟 爭式 測 定 , 介 羊什 半抗 原 只 可結 合 一介 抗 休 每
分子 。 竟 爭 式兔 疫 測 定 的倒 子 參 見
2
0

e
0

ch

等人 美 囚 舌 利 第
的第

0

考

L

o

a 的第

子及 Bu e c h e

于 寺 利 , 此 迷 些 文 扶被 完 全 引 用 。 其 他 形 式 的玫各 參 在

凡 La bo

,

0

,

e 等人 的 1 考 舌利及

第
a

, 舌 舌 利 、 J u 等人 的 第 0 于舌 利 。 迷 些 舌 c k 等人 的 第 6 , 1

利 文 扶在 此 被 完 全 引 用 。

[0

微 流控 制 裝 置
在 本 友 明 的 某 些 方 面 , 文 所 公 升 的 抗 休 可被 整 合 到 本

[0

一介 微 流 控 器 件 中 。 此 役 各是 一介 微 流 休 流 功 系 統 , 以 鈷 合 一介 可
或 更 多 分析 物 。 結 合 上 的 分析 物 可 直接 在 役 各 上分析 或 伙役 各 上 分
禹 下 未 , 如作 更 迸 一步 的 分析 或 赴 理 。 可迭 梓 的 , 結 合 到 役 各 倒 未

上 的分析 物 可被 收 集 起 束 ,例 如 ,作 迸 一步 的赴 理 或 分析 。
[0
示 范 性 的玫各是 一神 帝有 可供梓 品流 通 的 平 板 通 道 的
流 功 式伙 器 。 此 矣 改各 參 見 美 囤 舌 利 第

,

,

考 。 梓 品可 以 通

迂 重 力 、 毛 匆 管 或 一秤 主 功 力被 特移 到 此 沒各 叱 如通 迂瑜 液 泵 將

一神祥 品如血 液 灌 瑜 到 微 流 控 器 件 中 。 其 他 已知瑜 送 方 法 也可 以 使
用 。 微 流控 器 件 可任 意 地依 靠 攻各 中 的一排 結 枸 休 未 固 定 分析 物 。
包 所 迷 結 枸 休 可通 迂 多 神 方 法 制 造 , 括但 不 限于 , 光 照 射 、座 蚊 、 激

,微影 光

(L

、 屯 鍍 、 屯 侍 、 影 印石 版 木 、 活 性 萬 子蝕 刻 、 禹

子 束 赴 理 法 、 座 縮 模 塑 法 、 侍 造 、 功 力 噴射 造 型 法 、 噴 射 造 型 法 、
昱微 札械 加 工材 料 。 需 了解 的是 ,制 造 本友 明玫各 所 使 用 的 方 法 不

是 芙 鍵 的 , 要 所 用 方 法 手致 大量 的 同 梓 的 鈷 枸 休 和玫各 。 而 且 , 只
速 神 方 法 必 須 寺 致 所 迷 結 枸 休 的 大表 面 私 且相 互排 列 紫 密 以 戶 生 一
介 狹 窄 的通 道 。 所 迷 通 道 允井 分析 物 在 液休 中分散 以 提 高 在 固 定 位
魚 固 定 分析 物 和 或 杯 杞 試 荊 的放 率 。

[0

0

所 迷 大批 量 生 戶 的 鈷 枸 休伉 迭 由任 意 教 量 的 聚合 材 料

但 制 成 。 迷 些 材 料 包 括 , 不 限于 , 烯 炬 矣 如聚 丙 烯 、 聚 乙稀 , 聚 聚
含 醋 如聚 乙稀 吋苯二酸 醋 , 聚合 物 的苯 乙烯 如聚 苯 乙烯 、 苯 乙烯 丙
烯 晴 、 丙 烯 晴 丁二烯 乙烯 苯 均 聚 物 ,聚碳 酸 酯 ,丙 烯 酸 聚合 物 如聚
甲基 丙 烯 酸 甲 酯 和 聚 丙 烯 酸 晴 , 聚合 物 的 氯 化 物 如 乙稀 聚合 物 的 含

氯 化 物 和聚 偏 二氣 乙烯 ,乙縮 醒 同 底 聚 合 物 和共聚 物 ,年 堆 素 及 其

含 酯 矣 ,牙 堆 素 硝 酸 盎 , 聚合 物 的氟 化 物 如聚 偏 二 氟 乙烯 , 四 氟 聚 含 乙烯 , 銑 腰 , 亞 肢 , 謎 謎 嗣 , 聚合 物 的硫 化 物 如聚 亞 苯基 聚 醜 聚

硫 化 物 和 聚 酸硫 化 物 ,聚 亞 安 醋 ,含 聚合 物 的桂化 物 如聚 二燒基 桂
氧 坑 。 另 外 , 迷 桔 枸 休 可 由共 聚 物 、上迷 材料 的 混合 物 和 / 或 碌 座 所

物 、 金局 箔 如裙 箔 、 金扁 赴 理 的膜 或 沉 私 在 上迷 材 料 的金局制 戌 ,

也可 由玻璃 或 陶 瓷 材料 制 成 。 在 其 中 的一神 方 法
底 居 材 料 以 在 材 料 基 居 形 成 通 道 ( e ce ,J . e ,
P

,一神 激 光如受
a

激 准 分子激 光 器 可被 用 束 照 射 光掩膜 ,以 便八 光掩 膜 穿 迂 的 光 融 化

.P ,

E

oceed g
0

o

.

9

e p e be

9

)

微 通 常 , 流 控 器 件 可 包 括 一介 供 待 測 梓 品迸入 的入 口 。

通 常 所 迷 通 道 力 毛 細 管 , 未 持 移 所 迷待 測 祥 品伙 迸 口到 玫各 用

,
和額

迂 包 括 一排 鈷 枸 休 用 未提供 日 位 魚 ,以 及 一介 通 口 , 排 放 乞休 如 定
的 出 口 。 另 外 , 制 此 玫各 吋近 可 以 增 加反座 槽 定
ha b e

待 外 的 毛 細 管 。 通 常 , 測 梓 品依 靠 毛 細 管 作 用 力 移 功通 迂玫各 。 另

可 外 , 以 使 用 一介 或 多 介 毛 匆 管 帝功待 測 梓 品以迸 口到 通 道 屯 此
外 , 以 使 用 一介 或 多 介 毛 匆 管 脫 禹 玫各 的 結 枸 休 面 私 可
a

e
0

cue 也 。 但 是 , 可使 用 不 同 座 力 艇 功 液休 在 沒各 中 流 功 , 此 未 以
2

代替 或 增 加 毛 匆 管 功 力 。

可供 液休 流 功 的 通 道 由相 祁 鈷 枸 休 之 同 戶 生 。 通 道 和
血

結 枸 休 玫 升吋 于伉 化 結 枸 休 表 面 和 流 休 分 子 的接 融 是 重 要 的 。 代 表

性 地 , 道 的深 度 約 八 通

到

。通 道 的 平 均 寬 度

一般 約 伙

00

.

u到

形 、杯形 或 方形
U

"

。

通 道 可 以 包 括 各神形 狀 的 結 枸 休 ,包 括 菱 形 、 六 迫

,其 高度 一般 約 八

u.到 卹 ,平 均 寬 度 約 八

到
0

m。

固 定 刑 可 以 像 在 毛 匆 管 和 / 或 反 座 槽 里 一祥 共 什 地 或

非 共什 地 鈷 合 到 結 枸 休 的表 面 。 所 迷 試 荊 可 以 是 限 吋釋放 拭 刑 ,空

同 隔 禹 試 刑 , 被 包 被 和 干 燥 于表 面 。 放 置 固 定 刑 到 所 迷表 面 的 技 或

木 已 力 本 領 域 的技 木人 員 所 熟 知 。 在 一介 奕 施 方 式 札 所 迷 固 定 刑

是本 文 所 公 升 的 以 流 感 病 毒抗 原 如 H 力 靶杯 的抗休 。 01 使 用 本 友 明沒 各 的 方 法 包 括 利 用 特 弄 性 鈷 合 元 件 。 栓
測 的 方 法 包 括 勻 有 色 柄 祀 物 入 焚 光 染 色 荊 茨 有 色 顆 粒 的 皓 合 。 可迭

梓 地 , 測 步 琛 可 包 括 占一神 可戶 生 有 色 戶 物 的 晦 的 結 合 。 栓 [ 0 1 5 本 友 明 的 改各 中 可 以 使 用 一介 或 多 介 代 替 的 流 功 途
往 。 毛 鈾 管 八 迸 口逗 瑜 待 測 祥 品后 分 支 成 不 同 的通 路
通 向結 枸 休

代 的 主要通 路 和代 替通 路 。. 替 通 路 可 以 允井 多 介 固 定 位 魚 的存 在 ,

且 允 沖 在 羊 介 測 試 位 杰 上 同 吋 奕 現 分析 物 的 存 在 占 否 或 多 介 分析
物 的敖 量 。 在 一介 伉 迭 奕 施 方 式 札 在栓 測 玫各 中 多 介 分析 物 ( 不 同 流感 亞 型 ) 被硝 定 。

[0
務 捕 攻各

替 代 通 路 可 包 括 混合 所 迷 拭 刑 盒待 測 梓 品 的 匡 域 。 例
a p p n g de v c e

如 , 座 槽 可作 力 添 加 拭 荊 的 匹 域 。 另 外 , 玫各通 道 中也可 包 括 反 此
用 以 清 除一定 尺 寸 以 上 的 流 休 成 分 。

例 如 , 本 友 明 的玫各 中 可 包 括 一介 分 禹 器 , 如八 全血 中分 再 出 在 例

血 菜 或 血 清 。 例 如 ,一科 疏 水 燒 鈷 多 孔 滲 水 材 料 的 枯 合 物 辰 ) 可使 一科 血 缸 匆 胞 枯 合 荊 座 用 到 其 表 面 上 。 所 迷 拈 合 物 什a
辰 可被 放 置 在 玫 各 中 所 迷 結 枸 休 的 前 面 。 全 血 祥 品 中 的 血 虹 匆 胞 陷

入到 所 迷 拈 合 物 底 的 空 隙
此 赴 全盎 引 用 美 固 舌 利 第
[1
自 功化

, 奕 底 性 的血 細 胞 自 由 的血 菜 和血 清 而
0

穿 迂 所 迷 拈 合 物辰 , 被 毛 細 管 作 用 力 瑜 送 到 沒 各 中 的 結 枸 休 上 。 井

寺。
自 功化 克 疫 化 芋 分析 伙 。

01

本友 明 的抗 休 很 容 易 這座

力

本 方 便 本友 明 方 法 的 自 功 化 , 及 咸 少 特 交 吋 同 , 友 明 的 克 疫 測 定 以
中 的 一介 固 定 抗 休 需 和磁 性 顆 粒 結 合 。

01

通 迂 可茨 得 的 商 止 方 法 將 抗 休 占迷 梓 的磁 性 珠 結 合 ,

如 yna
包被的

公 司 [Lake

uc c e

, N. .

U

)的

羊抗 兔

g

y nabeads 和 目 杆 蛋 白的 兔 抗 休 ,或 使 用 Dyn

公司 的

0 To y a c

公 v a e d y a bea d , 家 結 合 上一介 相 芙 抗 休 。 可

迭 梓 地 , 刑 如 戊 二酪 可用 未使 目杯 抗 休 共什 結 合 到 一介 固 休 支持 拭

物 上 ,伉 迭 磁 性 珠 。 代 表 性 的 結 合 拭 刑 可 包 括 有 札 化 合 物 如硫 脂 ,

碳 化 二醜 亞 肢 , 珀 銑 亞 腰 酯 , 弄 氧 酸 酯 , 二酪 , 氮 苯 , 唬 二 戊 重 六
亞 甲基 二肢 。

[0
包括
系

0

伉 迭 的 自 功化 的 / 克 疫 分析 系 統 是
PL U 系 統
0

0

.

T

自 .功

化 芋 友光 系 坑 美 因 鈕 約 塔 里 敦 和 巧 茫 堵 塞 州 巧 菲 水 德 拜 耳公 司
E 系 統和

統

。

0

.

. 功克 疫 測 定 系 統 參 凡 文 扶 自
say

. ud ey,B. . ,
ETU
T

.

J

.

n.

unoa

)

ue

9

.此

系

統利

用 化 芋 友 光杯 祀 物 作 力 示 粽 荊 以 及 順 磁 性 顆 粒 ( P P
荊。
系 統 提供 竟 爭 式 結 合 和 夫

作 力 固相 試

式鈷 合 丙 神測 定 方 式 , 其

中每 介 步 琛 都 是 自 功化 的 。

0 系 統 使 用 微米 圾順磁 性顆 粒 以

使 可用 的表 面 私 最 大化 , 且提 供 一神 不 需 禹 而

就 可八 未 結 合 的 示

蹂 刑 中快 速 磁 分 禹 已 結 合 的 示 粽 刑 的 方 法 。 試 刑 可被 同 吋加 入或 稍

如 也 后 加 入 。 其 他 杯 祀 物 , 晦杯 物 , 可代 替 如 叩史 醋 等 化 孚 友 光杯
祀 物 使 用 。 伉 迭 用 光度 升栓 測 友 光信 考 。 伉 迭 使 用 拜 耳公 司 的克 疫
M兔 . . 疫 測 定 系 統 。 其 他 可這 座 使 用 本友 明 的抗 休 的逗 行兔 疫 測

定 法 的示范 性
0

自 功化玫各 包 括 美 團

舌利第

,

寺和第

寺。

在 另 一介 奕 施 方 式 申 ,本 友 明 的 抗 流 感 抗 休 可被 整合 到 自 功 多 孔 板 以 便 使 用 兔 疫 測 定 方 法 。 多 孔 分析 模 具 ( 如 平 板 ) 可 多 這 座 于在 多 孔 分析 模 具 的 一介 或 多 介 孔 或 反座 槽 ( 如 , 孔 分析 板
0
的孔
內 的 誘 手 的基 于化孝 友 光 的 測 定 。 多 孔 分析 板 可 包 括 几 介 元

件 ,包 括 例 如 ,平 板 頑 部 ,平 板 底 部 , ,工作 屯 板 , 算 屯 板 , 孔 汁

屯 屯 參 考 屯 板 , 緣 材 料 , 連 接 的接 融 面 , 連 接 所 迷 屯 板 和接 蝕 面 鈍

分 的 侍 手通 孔 , 合 荊 , 析 試 荊 , 別 杆 祀 或 祀 寺 。 平 板 上 的 孔 可 枯 唳
以 是 平 板 預 部 的 升 口 , 口 的 內 壁 可 以 是孔 壁 。 平 板 底 部 可 占頑 部 升

拈 合 在 一起 ( 可 以 直接 拈 合 或 借 助 其 他 成 分 拈 合 ) 作 力 孔 的底 部 。

[0

所 迷 多 孔 分析 模 具 ( 如 平 板

可含 有 任 意 敖 量 、 任 意

形 狀 或 尺 寸 、以 任 意 形 狀 或 枸 象排 列 及有 多 神 不 同 材 料 組 成 的孔 和

/ 或 反座 槽 。 在 本友 明 的 一介 伉 迭 奕 吋 方 式 中 ,所 迷 多 孔 分析 板 力 利 用 工 止 杯 准 生 戶 的 多 孔 板 , 有 林 准 形 式 的 平 板 和 孔 的敖 量 、 大 具
小 、 形 狀 和枸 象 。 杆 准 式 祥 奕 例 包 括

和

叉 孔 板 ,所 迷 孔 以 二堆 排 列 。 其 他 式梓 包 括 羊 孔 , 孔 , 孔 和 2 L板 。伉 迭 地 , 迷 孔 和 或 反座 槽 至 少 有 一介 整 合 在 其 所 孔和
包 中 的 第 一 屯 板 , 伉 迭 地 , 括 至 少 一介 第 二 屯 板 。 根搪 伉 迭 的 奕 更

吋 方 式 , 迷 孔 和 / 或 反座 槽 至 少 含 有 一介 整合 在 其 中 的 工作 屯 板 , 所
更 伉 迭 地 也 包 括 至 少 一介 汁 算 屯 板 。 根 搪 一介 特 別 仇 迭 的 奕 施 方

和 式 ,工作 屯 板 、 汁 算 屯 板 , 任 迭 地 ,參 考 屯 板 都 被 整合 到 孔 和 /

但 或 反座 槽 中 。 所 迷 分析 平 板 伉 迭 平 坦 的 , 也 可 以 是 育 曲的
坦的 )
。

不平

,

[0

反 而 且 , 中 、 座 槽 中 和 / 或 分析 模 具 的 分析 匹 域 中 例 孔

如 , 多 孔 分析 板 的 孔 中 ) 可 包 含 一神 或 多 科 分析 試 荊 。 例 如 , 在 在
微 滴 板 的 不 同 匹 域 可使 用 含 有 不 同 流 感 病 毒 抗 休 或 一科 流 感 病 毒
多 肢 的 不 同 表 型 抗 休 的分析 試 刑 。 迷 些 分析 試 刑 可 以 被 固 定 或 被 放

最 置 在 一介 或 多 介 孔 和 / 或 反座 槽 的表 面 ( 仇 迭 在 屯 板 的表 面 , 伉
迭 在 工作 屯 板 的 表 面 )

, 且可被 固 定 于 或 被放 置 在 一介 或 多 介 分 井
或汁算屯板 的

析 匹域 中

例 如 , 一定 式 梓 排 列 的 試 荊 被 固 定 于 或 被放 置 在 一介 以

或 多 介 孔 和 / 或 反座 槽 的表 面 ,伉 迭 在 工作 屯 板 和

表 面 , 仇 迭 在 工作 屯 板 的表 面 最

。

所 迷 分析 試 刑 也 可通 迂 所 迷 孔

和 / 或 反座 槽 的拾 廓 而 被 包 含 或 定 位 在 其 內 。 例 如 ,一定 式 梓 的 砲

緣 材 料 可 限定 或 定 位 流 休 。 [0 ] 在 一奕 施 方 式 中 ,本 友 明 的促 器 可被 用 于促 使 井 測 量

在 分析 模 具 中 的友 光 , 迭 的是 多 孔 分析 板 。可 以 整合 在 一起 的有 , 伏

一 例 如 , 介 或 多 介 光 子伽 測 器
屯 連接 器

不 透 光外 亮

用 于接 融 分析 模 具 的

是 侍 送 多 孔 分析 模 具 迸 出 促 器 的和械 裝 置 更 具休 地 , 迸 出 不 透 光外 亮 的和械 裝 置 ) 耿合 井 定 位 多 孔 分析 模 具 和 光子做
測 器 以 及 屯 連 接 器 的和械 裝 置 。 現 察 和 辨 別 模 具 的裝 置

如, 介 一

一 或 多 介 余形 碼 扣描 器 ( 如 , 介 余形 碼 扣描 器 扣描 平 板 或 模 具 的 一 側 ,另 一介 扣描 平板 或 模 具 的 另 一側 ) 方 位 佳 感 器 使 占模 具
一 有 屯 連 接 器 的札 械 玫各 , 介 或 多 介 引 寺 在 模 具 中友 光 的 屯 源
合 這 的 屯 子 裝 置 和軟件 。

和

[0

所 迷伙 器 也可 包 括 倘存 、堆 放 、移 功 和 / 或 分 布 一介 或

多 介 分析 模 具 的 札 械 玫 各

( 如 ,多 孔板 找 式存 借 器
照 相札

。

所 迷伙 器 可

以 方 便 地使 用 光 子倣 測 器 陣 列

光 例 如 , 屯 二板 管 陣 列

或 戍像 光

子佃 測 器 陣

例如,

以 測 量 友 光 。 迷 些 探 測 器 允井

迷 些 伙 器 測 量八 多 孔

和 / 或 反座 槽

中友 出 的光 ,同 吋也 或 使 八

羊 介 孔 ( 和 / 或 反座 槽 ) 中友 出 的 光 的 強 度 和 空 同 分 布 成 像 。
仇 迭 地 ,所 迷 伙 器 可 以 測 量 八 分析 模 具 的 一介 或 多 介
匹 友 出 的 光 , 迭 的 分 析 模 具 力 多 孔 分析 板 。 在 某 些 奕 施 方 式 中 , 伉

和 或 反座 槽 ) , 量 八 一介 到 少 于 分析 模 具 敖 一 一 患 孔 和 / 或 反座 槽 ) 敖 ( 例 如 , 介 多 孔 板 中 孔 的 一行 , 列 或 二堆 子 陣 ) 。 在 一介 仇 迭 的 奕 施 方 式 中 , 介 匹 包 括 多 孔板 孔 敬 的 一

一介 匹 包 括 一群 孔

/

的孔 。 在 一介 特 別 伉 迭 的 奕 施 方 式 和 多 孔 分析 板 被 分成 柱

一 狀 部 面 ( 例 如 , 介 匹 有 一行 或 一列 孔

一 或 方形 部 面 ( 例 如,
。 在某些 奕 施

介 杯 准 尺 寸 的 多 孔 板 杯 分戌 六 介 等 尺 寸 的 方 形 部 面

一 方 式 中 , 介 匹 包 括 一介 或 多 介 孔 井 在 孔 中有 不 止 一介 的 流 休 容 鈉
可 匡 域 。 所 迷 伙 器 , 迭 地 , 以 在 一介 給 定 的模 具 ( 仇 迭 平 板 伉
中

L 井/ 或 逐 步 測 量八所 迷 匹 中 而 未 的 E L [0 所 迷 伙 器 也可 整 合 微 赴 理 器 和 屯 肪 未 控 制 器 具 中 的 某 分 些 功 能 ,以 及 都 助 存 褚 , 析 和昱 示敖搪 。 迷 些 微 赴 理 器 和 屯 肪 可
逐 步誘手
E

位 于伙 器 之 札 或 位 于迅 赴 而 和促 器 相 連

例 如通 迂 岡 絡 連 接 )

。

0 [0

膜 /表面

] 在 本 友 明 的堵 多 方 面 ,整合 了 流 感 病 毒 抗 原 或 抗 流 感

病 毒 抗 休 的玫各 包 括 一介 表 面 或 膜 。 多 神表 面 或 膜 可 以 力 各 科 普 通

兔 疫 測 定 玫 各提 供 一介 表 面 ,在 其 上抗 休 或 抗 原 被 固 定 或 被 赴 理 。
迷 祥 , 可 以 提 供 包 括 栓 測 匹 域 和使 用 克 疫 拭 刑 使 栓 測 鈷 果 例 如 , 膜
元 拾 祥 品含 一 中或 多 神 病 毒

可視 化 的吋 照 匹 域 。 在 多 神 奕 施 方 式
。

扒 含有 流 感 病 毒 抗 原 或 在 其 上 赴 理 有 抗 流 感 病 毒 抗 休 的膜 被 依 次
赴 理 到 固 休 支持 物 上 ( 例 如側 向 流 功或 仟 堆 素 拭 紙 裝 置 )

0

0 ] 抗 原 / 抗 休 可 以 鈷 合 到 其 上 的 膜 或 表 面 由 一神 材 料 組

成 , 材 料 包 括 但 不 限于 牙 堆 素 、硝 化 仟 堆 、尼 尤 、 帝有 一介 四什 此

氨 基 的 陌 萬 子尼 尤

Za a 探 舛

,被 持 抉 成

DPT 的 氨 苯 基 硫 謎

(

nopheny h oe he

PT ) 試 紙 , 氮衍生 物 垂

和 酵栓 測 杆

祀 物 使 用 吋 不 被 染 色 ) 或 辛 水 聚 偏 二 乙烯 氟 化 物 ( P F 可由 , a .B e ca M po e 得 到 ) 。 木禧 "消 化 仟 堆 " 指 任 何
坪 堆 素 的硝 酸 醋 。 所 以 合 這 的材 抖 可 包 括 均 年 堆 素 的梭 酸 酯 結 合 的

硝 化 仟 堆 。硝 化 仟 堆 膜 的 孔 往 可有 很 大 的 交 化 , 通 常是 約 在 但

微 米 ,仇 迭 約

微 米 。 但 是 , 領 域 技 木人 員 可預 期 其 他 所 熟 本

知 材 料 也 可 被 使 用 。 在 某 些 奕 施 方 式 中 ,所 迷 測 拭 匹 域 包 括 由

po e 生 戶 的被 私 座 到 一介 光 亮 的 聚 酯 薄 膜 背 村 的硝 化 牙 堆 卷 制 成 的硝 化 仟 堆 岡 狀 組 件 。 在 另 一介 奕 施 方 式 中 , 含 有 抗 原 / 抗 此 休 匹 域 ( 或 "測 試 匹 域 " ) 由尼 尤制 成 。 在 另 一介 奕 施 方 式 札 所
迷 測 試 匹 域 包 括 一科 可 以 固 定 橡 肢 或 其 他 可 以 拐 帝 另 一介 可 特 弄
性 皓 合 分析 物 的拭 刑 的顆 粒 , 此 可 以 硝 定 一介 測 試 匹 , 如座 制 因 例

的 尼 尤粉 末 , 玻 璃 仟 堆 。 在 某 些 奕 施 方 式 中 , 迷 測 試 匹 域 包 括 或 所

一科 在 干 燥 狀 志 不 透 明 而 在 潮 涅 狀 志 透 明 的 材 料 。
[0
測 試 和吋 照 匹

01

玫各 可 包 括 含 有 測 拭 和 吋 照 匹 的膜 或 表 面 ,測 試 匹 域

可 由上迷 材 料 的任 何 一神枸 成 。 通 常 測 拭 匡 和吋 照 匹 可硝 定 測 試 匹
域 的成 分 。 在 一介 奕 施 方 式 中 , 迷 測 試 和吋 照 匹 包 括 和 測 試 匹 域 所

相 同 的 材 料 。 通 常 ,木倍

"測 試 匡 域 "

在 此 用 未 解 梓在役 各 中 上

包 括 至 少 一介 測 拭 和吋 照 匹 的 匡 域 。 在 有 些 奕 施 方 式 中 , 各使 用 玫

吸水 材 料 而 在 某 些 奕 施 方 式 和 力 提 供 非 吸水 性 的 流 休 , 些 材 料 迷 要被 終 止 液 赴 理 以 打 析 造 戌 吸 水膜 吸水 性 的作 用 力 。 合 這 的終 止 液
包 括 牛血 清 白蛋 白, 基 化 的 牛血 清 白蛋 白, 物 的全血 清 , 蛋 功 甲 酪
P 白 , 脂 奶 粉 , 量 的 清 沽 刑 和 聚合 物 , 如 , E 脫 大 例

P

及其矣 似

物 。 在 某 些 奕 施 方 式 中 , 未 赴 理 的 吸 水膜 上 的 干抗 位 杰 由于 咚止 在
液 的存 在 而 完 全 破 杯 已 允 許 費 吸 水 性 流 休 可 以 通 迂 。 如 此 赴 指 出

的 ,本 友 明 的 測 拭 玫 各是 一介 帝有 多 介 測 試 和吋 照 匹 的役 各 。
0

栓 測 匹 域 一般 包 括 一介 或 多 介 吋 照 匹 ,速 梓 吋 于銓 征

祥 品流 功是 否 是預 期 的很有 用 赴 。每 一介 吋 照 匹 都 包 括 一介 空 同 上
不 同 的 匹 域 , 此 匹 域 里 常有 一介 特 弄 性 鈷 合 配 吋 的 固 定 元件 , 在 咳

元 件 可 和 杆 杞 的 吋 照 試 刊 反 座 。 在 某 介 奕 施 方 式 中 , 序 上 的吋 照 程
匹 包 括 一介 待 測 分析 物 的可 靠 梓 品 , 梓 品 的 一介 片 斬 。 在 迷 介 奕 或

施 例 中 , 用 了一神杆 祀拭 刑 , 迷 的 液 志 祥 本 拐 帝杯 祀試 荊 到 迷 使 所
測 試 和吋 照 匹

沒 有 被 鈷 合 到 被 分析 物 上 的 柄 祀 試 刑 就 將 結 合 到 定

位 在 吋 照 匹 的待 測 被 分析 物 的 可 靠 梓 品上 。 在 另 一介 奕 施 例 中 , 吋
照 域 含 有 抗 休 , 抗 休 吋杯 祀 拭 刑 是特 弄 性 的或 者 力 了 固 定 的杯 祀 咳

拭 荊 而 提 供 的 。 在 操 作 中 , 祀 試 刑 被 限制 在每 一介 羊 介 的 或 多 介 杆

的吋 照 匹 , 使 在 待 測 梓 本 中任 何 一介 或 者 所 有 感 共趣 的分析 物 都 即
不存 在 。

01

在 某 些 奕 施 方 式 中 , 休 支持 物 包 括 一定 式 梓 的 匡 域 , 固

所 迷 匹 域 包 括 抗 原 / 抗 休 桔 合 拈 合 物 底 領 域 , 領 域 可被 玫 汁 成 任 此

何 想 要 的形 狀

垂 例 如 , 形 , 圓 形 ,圓 形 , 域 或 水 平 哉 ) 方 梢

。

例

如 , 原 鈷 合 枯 合 物底 什 a 抗

) 領 域 被 赴 理 到 一介 固 休 支持 仟 堆

素 試 紙 上 , 迷 仟 堆 素 拭 紙 可 由塑 料 或 聚 醋 薄 膜 材 料 制 成 。 通 迂 使 所
用 本友 明 , 迂 整 合 每 介 在 羊 介 測 試 帝 或 羊 介 固 相 支 持 物 坪 堆 素 試 通
紙 的 不 同 位 置 上含 有 不 同 特 弄 性 抗 原 的 多 介 方 形 枯 合 物 底 , 可 能 有

在 一介 羊 蝕 的 測 試 中 測 定 到 多 介 抗

H

抗休 亞 型 。

在 各神 奕 施 方 式 中 , 含 有 本 友 明 的 抗 休 井 座 用 在 兔 疫

分析 中 的裝 置 可被 包 括 在 一介 試 荊 盒 中 。 力 了特 殊 的 形 式 的兔 疫 分
析 座 用 , 試 荊 盒 包 括 了 必 要 的反座 試 刑 。 咳 試 刑 盒 包 括 一介 仟 堆 咳
素 試 紙 和羊 狂 的 隨其 座 用 的試 刑 , 上 固 定 了分析 流 感 多 神 正型 所 其
需 的 抗 休 的橫 向流 功沒各 , 者 任 何 帝有 必 要 試 刑 的 常規 裝 置 。 例 或

如 , 迂 一介 仟 堆 素 試 紙 頻 繁 的 浸 沾 一 系 列 的在 試 荊 盒 中提 供 的 試 通
刑 的 迂 程 , 祥 本 中有 或 沒 有 特 定 的 抗 亞 型 流 感 病 剷 例 如 , 在

抗 休 ) 或 者 流 感 病 毒 抗 原 卜例 如 , 抗 原 可 以 被 筒 羊 快 速 地硝 定 。

咳 試 刑 盒 這 合 寺 家 或 止 內 人 員 使 用 。 利 用 本友 明 的 試 荊 盒 可 以 快 速

迸 行八 休 液 茨得 的 流 感 病 毒

例如,

) 的血 清 珍 析 , 液 可 以 休

是血 液 、 尿 液 、 唾 液 、 精 液 、 樊 便 ,唾 液 、 肛 汁 、 肪 脊 液 , 涕 、 卉
脊 泌 尿 生 殖 器 的 液休 、 弄 呼 乞 , 隨液 , 等 。 等
[ 01 6] 在 另 一奕 施 方 式 中 ,固 相 的 支持 坪 堆 素 試 紙 或 者 橫 向
流 功裝 置 安置在 一介 測 試 試 管 或 者 矣 似 的 容 器 中 , 測 試 管 或 者 矣 咳

似 容 器 添 加 了被 杯 疑 感 染 了 流 感 病 毒

例如,

的 病 人或 者 功

物 祥 本 。 梓 本 和 結 合 在 仟 堆 素 試 紙 中 的 抗 原 / 抗 休 反座 。 然 后 取 出
坪 堆 素 試 紙 井 枉 枉 地 清 洗 。 固 相 支持 仟 堆 素 試 紙 被 八 清 洗 液 中取 出

井 被放入 另 一介 試 管 中 , 試 管 含 有 高 度 稀 釋 的 , 辛 和 分 萬 鈍 化 咳 銓
的 允 疫 球 蛋 白,弦 克 疫 球 蛋 白吋 八 其 中 茨 得 梓 本 的 物 科 是 特 弄 性

的 , 可和城 性 磷 酸 時或 者 其 他 這 宜 的 酵 結 合 。 接 看 坪 堆 素 試 紙 八 井
第 二抗 休 溶 液 取 出 井放 入

卜

介 帝有 清 洗 液 的 容 器 中 。

卜

旦仟 堆 素 拭
上面 的

的 最 終 的 試 管 中 。 陌 性 反座 可 以 通 迪 筒 羊 的現 測 吋 照 杆 准
找 ) 和陌性哉 (

面 的 域 ) 的 比 較 而 坪 定 出 未 。 如果 陌 性 域 顏 色 比

枋 准 域 深 , 么 栓 測 鈷 果 就 是 陌 性 。 共介 連 接 到 婪 寺 和 鈍 化 的克 疫 那

球 蛋 白的 晦和底 物 反座 ,所 迷 底 物 在 晦 底 物 反座 的 鈷 束 吋 戶 生 一
介 有 色 反座 戶 物 。 通 迂 迷 神 方 式 連 接 的 密 切 相 夫 的 鈍 化 的克 疫 球 蛋

白就 可 以 很 容 易 的栓 測 出 未 , 栓 測 昱 示 在 梓 品 中存 在 吋 流 感 病 毒 核
( 如 , 抗 休 ) 特 弄 性 的 抗 休 。迷 介 技 木整合 了 已知 的 E L

技木 ,

在 此 赴 也有 揭 露 。
[0

座 到 理 解 的是 , 梓 合 迢 的 晦和底 物 和合 這 的反座 奈 迭

件 的技 木 已 力 本 領 域 的技 木人 員 所 熟 知 。 迷 些 時在 和兔 疫 球蛋 白結

合 后 要 仍 然 有 活 性 。 每 介 晦 底 物 配 吋 的化 芋 反座 都 要得 到 一介 有
顏 色 的 戶 物 。 另 外 , 多 神 可迭 梓 的 配 吋 方 式 , 中 時和底 物 都 可 有 其

但 以 和 銓 辛 和 鈍 化 的克 疫 球蛋 白結 合 , 是 只 有 在 鈍 化 的克 疫 球 蛋 白
酵 已 銓 連 接 到 祥 本 抗 休 之后 , 和底 物 的反座 才 能 戶 生 有 顏 色 的反座 戶物 。
[0
篩

祥 占 然 , 迂使 用 不 同 的 抗 休 / 抗 原 , 本 可 以 很 容 易 的 通
U E NT

迭 出 一組 不 同 的 病 毒 和 不 同 的 亞 型 。 本 領 域 的 技 木人 員 座 占 明
T

白 ,通 迂 迷 里 描 迷 的 克 疫 測 定 法 需 分 析 不 同 的 組 。 參 見
P

L

N

UN L

o

ga

Jo hn E. e . a

.

ed s

.

0 [0
0

陣列

本 友 明 的 抗 休 可 以 很 容 易 的被 座 用 在 玫各 中 ,用 咳 玫

各栓 測 分析 物 的 方 法 是 神 快 速 栓 測 方 法 , 方 法 包 括 栓 測 祥 本 中 咳 的 一介 或 多 介 流 感 病 毒 蛋 白 倒 如 , 或 者 一介 或 多 介 的 抗 流
感 病 毒 抗 休 。 迷 科 方 法 包 括 抗 休 以 含 其 他 抗 休 的 陣 列 的形 式展 示 的

」

奕 施 方 式 , 迷 其 他 抗 休 其 以 多 神 不 同 的 病 毒 如其 他 的 流 感 病 毒 亞 所

型 ( 如,

) 力靶杆 。 在 其他 的 奕 施 方 式 中 , 休 可 以 以 相 同 的 抗

抗 原 力 目析 或 者 特 弄 性 的 和 一介 既 定 的 多 肢 上 的 不 同 的 抗 原 決 定

基結合 。
[ 01

在 本友 明 迸 一步 的 奕 施 方 式 中 , 休 的 陣 列 包 括 底 物 , 抗

a c h , 底 物 表 面 部 分 的 已知 匹 域 在 大量 的 禹 散 排 列 的 小 片 段 ) 每 一介 片 段 包 括 固 定 在 底 物 上 的 抗 休 , 中 所 迷 既 上 ,其 中 其

定 片 段 中 抗 休 可鈷 合 特 定 的 病 毒表 迷 戶 物 、戶 物 的 片 析 , 者 宿 主 或

蛋 白,例 如抗 病 毒 抗 休 , ( 和 蛋 白, 抗 病 毒 抗 休 。 如
[0

) 陣 列 包 括 很 多 不 同 的抗 休 , 一 每

介 抗 休 都 可 以 鈷 合 不 同 的 病 毒表 迷 戶 物 、 病 毒 戶 物 片 析 , 者 宿 主 或

可 仇 迭 地 , 休 共 什 地 固 定 在 陣 列 的 片 析 上 , 以 直接 抗
0 介片 析。
0 介片 段。

固 定 也 可 以 同接 固 定 。 在 多 敖 情 況 下 ,陣 列 至 少 包 括

在 一介 伉 迭 的 奕 施 倒 中 ,陣 列 至 少 包 括
迭 奕 施例 中 , 列 包括至少 陣
例
。

在 一介 特 別 伉

0 0 介 片 段 。 在 一介 迭 梓 性 的仇 迭 奕 施

,抗 休 陣 列 可 以 包 括 超 迂 0 , 0 ,或 者 0 介 片 段 。 [0 被 每 一介 片 段 覆 蓋 的 底 物 表 面 匹 域 伉 迭 不 超 迂 0 . 廿 到 1000 每 皿 。 仇 迭 地 , 介 片 段覆 蓋 的底 物表 面 匹 域 在 大 約 每 。 在 一介 特 別 仇 迭 奕 施 例 中 , 介 片 段覆 益 的 底 物 表 面 匹 域 在 u到 0 在 大約 。 在 一今 可迭 梓 的 奕 施 例 中 , 陣 列 上 的 一
介 片 段 可覆 蓋 底 物 表 面 的 面 私 有
n

迷 么 小 ,呈 然 如此 小 的 片

段 在 陣 列 的座 用 占 中 一般 是 沒有 必 要 的 。 01 陣 列 中 的 片 段 可 以 是任 何 几 何 形 狀 。 例 如 ,片 段 可 以

是 矩 形 的 ,圓 形 的 。 陣 列 中 的 片 段 也可 以 是 不 規 則 的形 狀 。 片 段 也
可 以 隨 意 的伙 下 居 底 物 中 同 布 局 什 e d a n p a ) 升 始 增 加 。 [ 0 1 ] 隔 升 陣 列 上 的 片 段 的距 萬 可 以 是 不 同 的 。 仇 迭 地 ,陣
列 上 的 片 段 同 相 祁 之 同 的距 禹 大 約

到

0

。

如 典型 地 , 果

, ,隔 升 陣 列 上 片 段 的距 萬 約 占 片 段 的 直 往 或 側 面 長度 成 比 例 。 如 果 片 段 比 較 小 , 吋 隔 升 片 段 的距 再 一般 都 比 迷

片 段 的 直往 大 于

片 段 本 身 的 直往 要 大 。

[0

在 陣 列 的 一特 別 奕 施 方 式 中 ,陣 列 的 所 有 片 段 都 被 包
2

含 在底 物表 面 上 大 約 c

或 更 小 的 匹 域 。 因 此 在 一介 仇 迭 的 陣 列 的
c

奕 施 例 中 , 列 在底 物 表 面 上 患 面 私 大 約 陣

或 史 小 的 匹域 內 包括

一 了 0 0 介 或 更 多 片 段 。 可迭 梓 地 , 介 特 別 伉 迭 的 陣 列 在 底 物 表 面
上忌 面 私 大約 c 2 或 更 小 的 匡域 內 包括 了
迭 的 陣 列 在 底 物表 面 上 患 面 私 大 約 c
1 0 介或 更 多 的 片 段 。 伏

甚 或 更 小 的 匹 域 內 , 至可 以

隨意 包 括
的 匹域 內 。

。

或 者 0 或 者 更 多 的 片 段 。 在 本友 明 的 其 他 奕 施 例 中 ,

所 有 的 陣 列 的 片 段 都 包 含 在 底 物 的表 面 上 面 私 大 約 力

卹 或更小

[0

在 代 表 性 地 , 陣 列 的 一介 片 段 上 只 有 一介 抗 休 。 如 果

在 一介 片 段 上 不 止 一介 的 抗 休 , 么 在 那 介 片 段 上 的 所 有 的 抗 休 必 那

一 須 共 用 一介 普 通 的 結 合 伙 伴 。 例 如 , 介 片 段 可 包 括很 多 科 流 感 病
毒蛋 白的抗 休 (
抗 原 決 定基
流 感 病 毒是
。

呈 然 , 休 港 在地可 以 結 合 既 定 流 感 病 毒上 的 不 同 抗

在 仇 迭 奕 施 例 中 , 迷 流 感 病 毒蛋 白/ 抗 原 是 所

且

[0
包括至少

] 本友 明 中 的 陣 列 可 以 含 有

口 呢 以 敖 量 的 不 同 的抗 休 。

典 型 地 ,所 迷 陣 列 包 括 至 少

0 科 不 同 的抗 休 。 仇 迭 地 , 迷 陣 列 所
00
。

0 科 不 同 抗 休 。 更伉 迭 地 , 迷 陣 列 包 括 至 少 所

神抗

休 。 迭 梓 的仇 迭 陣 列 包 括 超 迂 0 神 不 同 抗 休 或 者 超 迂 0 神 不 同 可
抗 休 。 所 迷 陣 列 甚 至 可 隨意 包 括超 迪 1 0 秤 不 同 抗 休 。

[0

] 在 陣 列 的 一介 奕 施 例 中 ,陣 列 的每 一介 片 段 包 括 一神
0 0 介 片 段可 以 包 括 大約 00

一 不 同 的抗 休 。 如 , 介 陣 列 包 括 大 約 例

一 介 不 同 的 抗 休 。 矣 似 地 , 介 含 約 10000 介 片 段 的 陣 列 溢 包 括 大 約
每 0 0 00 科 不 同 抗 休 。 然 而 , 一介 可迭 梓 的 奕 施 例 中 , 一介 不 同 在

每 的 抗 休 被 固 定 在 陣 列 的 多 介 片 段 上 。 例 如 , 一介 不 同 的 抗 休 可 以
隨意 的在
包 括 大約
00

本 可 介 不 同 的 片 段 中 出 現 。 因 此 , 友 明 的 一介 陣 列 ,

但 抗 休 片 段 , 仗 包 括 大 約 0 00 神 不 同 的抗 休 , 力 因
介 不 同 的 片 段 中 出現 。

每 一介 不 同 的抗 休 在
01 0
的敖 量 至 少 有

典 型 地 ,可被 陣 列 上 的 大 量 不 同 抗 休 鈷 合 的 不 同 蛋 白

在 0 介 。 然 而 , 迭 地 , 陣 列 上 的 大量 不 同 的抗 休 伉
0 或者至少

可 以 用 未 結 合 大量教 量 的 不 同 蛋 白, 如 ,至 少 大 約 例
大約
以 桔 合 至 少 大約

0 介 。 在 迸 一步 仇 迭 的 奕 施 例 札 在 陣 列 上 大 量 不 同 抗 休 可
0 介 蛋 白。
u L 液 休 休 私 的形 式放 置 二堆 陣 列 。 覆 蓋

[0
中以每

利 用 本 奕 施 例 中 的 抗 休 陣 列 可 隨 意 包 含 在 流 功反 座 槽

表面私

在 流 功反座 槽 中 的 陣 列 上 的 罩 亮 可 以 是透 明 或 半透 明 的 。 在 一介 奕
忖 方 式 札 所 迷 罩 亮 可 包 括 耐 熱 玻璃 或 石 英 玻璃 。 在 其 他 的 奕 施 方

, 迷 罩 亮 可 能 是栓 測 系 統 的 一部 分 , 監 測 固 定 在 陣 列 上 的 所 以 如 抗 休 勻 溶 液 , 細 胞 抽提 液 中蛋 白底 之 同 的反座 。 所 迷 流 功反座 槽
式
座 咳 保 持 含 有 這 占 的 液 休 溶 液 以 保 妒 抗 休 。 益 度 、 溫 度 和 其 他 余件

伉 迭 占正 常 生 理 余件 保 持 相 似 。在 流 休 溶 液 中 的梓 品可 能 滲入上迷
流 功反座 槽 札 它仞 肯 定 和 固 定 的抗 休 反座 。 需 要提 供 足 移 的 吋 坷
以 允井 抗 休 及 其 結 合 伙 伴 友 生 結 合 。 迷 所 需 的 吋 岡 取 決 于 抗 休 吋 其

結 合 伙 伴 的 辛 和 力 。 流 休 瑜 送 到 陣 列 中 不 需 要 舌 鬥 的微 流 泵 、 岡 鬥

或 混合 技 木 。

[0 0

栓測 方 法
使 用 本 友 明 的 抗 休 迢 用 的任 何 裝 置 中 , 茨得 很 多 矣 可

的栓 測 成 分 未栓 測 鈷 合 伙 伴 的存 在 。栓 測 可 以 是救 量 上 的也可 以 是
辰 量 上 的 。 本 友 明 的 陣 列 可和 光 芋 栓 測 方 法 如可視 光或 紫 外 光 的 吸

收 、化 孕 友 光和 焚 光

包 括 有 效 期 、偏 振 、焚 光 夫 取 能 措 法 (

)

焚 光共振 能 量 持 移 法 ( F ET

如 合 用 。 而 且 , 他 栓 測模 式 , 基 其

于 光 波 的 ,參 凡 P T 公 升 文 本

(

9

/

和美 囚舌利第

, , 1 考 ) , 于表 面 胞 底 困 共振 分析 技 木 u ace p a o n 基 e onanc 的 , 于表 面 屯 荷 侍 感 器 的 , 于表 面 作 用 力 侍 感 器 基 基
基 的 都 可 以 和 本友 明 的井 多 奕 施 方 式 兼 容 。可迭 梓 地 , 于 B e
角 度 昱微鏡 方 法

e

B

ese
an d

ng e
5 11

c o c o py

B

的 ( c ha a

e
No

.,
.
2

La n g u ,
1
1
1

) 和 楠 圓 光度 法 U.
ac
。

.

Pa

.

o

o e cu e s ,

)) 的科 技 也可被 座 用
c oba a

水 晶微 平衡作 用
0

(

ce

和 解 吸 附 迂程 ( 參 凡 例 如 美 囚 寺 利 第 , 9

考 ) 也提 供 了其 他 這 合 本 友 明 陣 列 某 些 奕 施 方 式 的栓 測 方 法 。 參 見
美 團 舌利 第

,

于 可凡 一神 光 芋 生 物侍 感 器 系 統 可 勻 本友 明
F、e B
e

也 的 一些 矩 陣相 兼 容 , 可 勻 多 神 未 杆 杞 的栓 測 方 法 如表 面 胞 席 困 共
振 分析 技 木 吶 反射 焚 光昱 微 鏡 ( T

,度 昱微鏡 方 法 、 角

光 波友 光模 式 光禧 法
01

L ) 相 兼容 。

,所 迷 整合 了本友 明抗 休 的玫各 可 , 別 是玫 被 整合 到 一介 系 統 和 所 迷 系 統 包 括 岡 瑛 器 ( e a d e 特 如 置 在 屯 肪 中 的 岡 祺 器 , 基 于 反射 和 / 或 焚 光 的 岡 祺 器 ,以 及 包 括
在某 些 奕 施方 式

一介 使 用 敬搪 返 原 ( a a e d uc o n 和 曲域 拙合 算 法 的敖搪 赴 理 軟 件 ,仇 迭 地 占被 圳 銖 的神 婪 岡 絡 a ned ne u a ne o k 連
用 以 准 硝 地硝 定 在 生 物 祥 品 中 分析 物 的存 在 占否 及 其 浪度 。 如迷 里

如 所 使 用 的 岡 瑛 器 是 指 一科 栓 測 和 / 或 定 量 敖搪 的 工 具 , 在 包 括 在
使 用 本友 明 抗 休 的 測 試 玫各 中 測 試 帝
es
S

p

J 。 敖搪 座

是裸 眼可視 的 , 不 需 要 如此 。 所 迷 方 法 包 括 在 病 人祥 品上扶 行允 但
疫 測 定 的 步 琛 , 用 基 于反射 和 / 或 焚 光 的 岡 瑛 器 祺 取 敖搪 的 步 琛 , 使

使 用 利 用 敖 搪 迅 原 的 孜搪 赴 理 軟 件 未 赴 理 所 得 敬 搪 。 仇 迭 的 軟 件 包
括 曲域 拙合 算 法 , 任 意 地 占被 圳 銖 的神 銓 岡 絡 連 用 , 硝 定 在 待 可 以
測 梓 品 中被 分析 物 的存 在 均 否 及 其 波 度 。 八 岡 瑛 器 中茨得 的救 搪 可

以 被 迸 一步 地 通 迂 匡 芋 珍 析 系 統 赴 理 瑜 出 敖 搪 以 提 供 凡 隆 坪 估 或

匡 孕 奈件 的珍 析 。 在 可梓 奕 施 方 式 中 , 迷 瑜 出敖搪 可被 用 于瑜 入 所

如 到 后 婪 的 結 掩 支持 系 統 , 神 至 岡 絡 , 可被 圳 舛 以 坪 估 迷 些 敬 搪 。 它
0 19

在 多 各神 奕 施 方 式 中 , 迷 岡 祺 器 可 以 是反射 岡 瑛 器 , 所
或 丙 介 或 史 多 的結 合

友射 岡 祺 器 , 光 岡 祺 器 , 芋 生 物 友 光 岡 瑛 器 , 力 岡 祺 器 或 屯 磁 焚 化

, 取 決 于要八沒各 中栓 測 迷 的信 考 。 而 且 , 些 栓 測 方 法 一般 用 于侍 統 的兔 疫 測 定 法 , 法 需 某 核
流 測 定 岡瑛 器

要使 用 杯 祀 物 , 些 栓 測 方 法 可座 用 到 本 友 明 的 陣 列 中 。 送 些 技 木 迷
包 括 非 竟 爭 式克 疫 測 定 法 , 手 式克 疫 測 定 法 , 析 祀 物 法 , 值 竟 奴 比

兔 疫 測 定 法 。 迷 些 特 定 的技 木 主要這 用 在 占 帝有 不 同 特 弄 性 的 不 同

抗 休 的敬 目很 小 ( 約 小 于 0 ) 吋 和 抗 休 陣 列 一起 使 用 的 吋候 。 在
所 迷 竟 爭 式 方 法 中 , 合位 魚 的 占搪 是 同接 硝 定 的 。在 迷 神 方 法 中 , 皓

陣 列 的抗 休 被暴 露 在 析 祀 的昱 影 試 刑 中 , 迷 昱 影 試 荊 通 常是 帝有 所

杯 杞 的分析 物 或 其 矣 似 物 。 所 迷 昱 影 試 荊 占分析 物 竟 爭結 合 在 抗 休

上 的位 魚 。 昱 影 拭 刑 鈷 合 到 羊 介 片 析 的 抗 休 上 可 形 成 在 不 同 片 斬 上
抗 休 的 少 量 占搪 。
[0

在 非 竟 爭 式 方 法 中 ,結 合 位 魚 的 占搪 是 直接 硝 定 的 。

在 迷 神 方 法 中 , 迷 列 陣 的 片 析 暴 露 于 杆 祀 的昱 影 液 中 , 迷 昱 影 所 所
液 可 以 皓 合 到 被 結 合 的 分析 物 上 或 在 蛋 白 固 定 試 刑 中 的 以 被 占搪

的 結 合 位 焦 上 。 例 如 , 迷 昱 影 液 可 以 是 占被 占搪 位 魚 直接吋座 的 所 被 杯 杞 的抗 休 例 如 , "夫 式 分析 " ) 。 可迭 梓 地 , 杆 祀 法 , 叉

昱 占 所 迷 抗 休 被 一神 杯 祀 物 枋 祀 , 影 液 背 另 一介 杯 祀 物 杯 祀 吋 采 用

b
1
0

法 Ek n
。

e

a

.

n ca h

ca

ca

.

在 前迷 的技 木 中 可 以 使 用 很 多 不 同 的 杯 杞 方 法 ,包 括放 射

性 同 位 素 法 、 晦法 、 化 芋 友 光 法 和 焚 光 法 。 在 某 些 奕 施 方 式 中 , 仇

迭 焚 光栓 測 法 。 栓 測 的 方 法 包 括 但 不 限于 , 色 的 改交 、 光吸 收 或 顏
P 光侍 瑜 的 改 交 , 的 改 交 , 手 性 的 改 交 , 光 性 的 改 交 , 理 相 侍 焚 物

的 交化 或 矣 似 方 法 。
[0

待 測 祥 品座 提 供 栓 測 系 統 的 可檢 測 成 分 或 者 送 神 成 分

可被加 入 。 所 迷 成 分 的 差 弄 很 大 , 取 決 于栓 測 系 統 的 性 底 。 其 中 迷

一神 栓 測 方 法 包 括 使 用 顆 粒 ,顆 粒 被 用 于 提 供 散 光 或 改 交 流 功 速
度 。 所 迷 顆 粒 可 以 是 , 不 限 于 , 胞 、 不 能 融 合 于 液休 系 統 的 多 但 細
聚 顆 粒 、 橡 肢 顆 粒 、 陶 瓷顆 粒 、核 酸 顆 粒 、 拈 合 顆 粒 或 其 矣 似 物 。
顆 粒 的迭 梓取 決 于栓 測 方 法 、在 流 休 交 化 時 分散 的分布 情 況 和穗 定

性 , 跌 性 , 勻 度 等 諸 如此 矣 。 在 固 定 位 志 分析 物 占特 弄 性 結 合 活 參

元件 鈷 合 可通 迂栓 測 沒各 中待 測 祥 品的座 力 未 隨 意 栓 測 。 例 如 , 占
低 , 迷 座 力 降低 是 由于分析 物 的 結 合 , 合 手致 通 道 內 流 速 放 鍰 。 所 它
0 19
例 如 ,力 硝 定 已存 在 的 可栓 測 的 杆 祀 物
aze

例如, 休 抗

及 可 結 合 ) 的量 , 抗 原 存 在 的量 , 以 使 用

和伙 器 ( 參 凡

na

.

g ove 等 人 的 方 法
。

B oc h e

0

迷科 方 法 是

基 于 勻 屯 肪 連 接 的 屯 視接 影 札 。 所 迷 杆 祀通 迂 屯 視 撮 影 札 成 像 而 昱

且 示 在 一介 友 光 盒 子上 , 被 一神 敬 字 化 平 板 (Tec h血 a
面 私 。 光 密 度 測 量 也用 于 測 定 蛋 自底 的 鈍 吋沫 度 。

,司 公

敖字

化 。 敖 字 化 后 ,屯 肪 舍 祺 取 出 每 介 杆 杞 的位 置 、 寬 度 、 高 度 和相 吋
[0

在 另 一奕 施 方 式

, 包括 將

o

E

測 試 的裝 置 用

本 于栓 測 直接 未 自任 何 祥 品的 目杯 蛋 白。 因 而 , 友 明 的抗 休 可 以 用
于 包 括 下 列 步琛 的方 法 七
(a) 提 供 一 固相 支持 物 ,以 便 迸 行 羊 抗 的 測 定 (b (c)

將 杯 疑 帝有 流 感 病 毒 的祥 品施 加 到 咳 固 相 支持 物 上
將 含 有 有 札 酸 如杆 檬 酸 或 乳 酸 的 溶 液 施 加 到 固 相 支 持 物
co y

上
(d) 將 含 有 溶 拈 液 刑

c age n

和去 污 刑 的 溶 液 施

加 到 咳 固 相 支持 物 上

(e) 將 咳 固 相 支持 物 占初 圾 羊 抗 ( P
或 片 段和 H

血

a

y

a ) 、 嵌合羊抗 、

其 交 休 或 片 段接 融 足 侈 的 吋 同 , 得 初 圾 羊 抗 、嵌 合 羊 抗 、 其 交 休 使

蛋 白結 合 在 一起 , 成 皓 合 抗 原 的初 圾 羊 抗 形
c on uga e ) 接 紐 足 移
以及

將 上迷 占酵杯 杞 的 抗 羊 抗 綴 合 物
9

的 吋 吼 使 得 弦 鈷 合 抗 原 的初 圾 羊 抗 便 于 鈷 合 到 咳 綴 合 物 上

將 昱 色 拭 刑 施 加 到 咳 固 相 支持 物 上 , 扒 咳 昱 色 試 刑 被 其

酵催 化 而 形 成 帝 色 的杆 志 , 而 使 得 能 侈 目視栓 測 祥 品 中是 否 存 在 八

蛋 白。
美 囚 寺 利 申清 2 0

02

中公 升 了 一神 Do

E

方法 ,

此 赴 將 其 整休 作 力 吋 比 文 扶 。

[0
理 ( ca
或
決

在某 些 奕 施方 式

, 友 明 的裝 置 或 試 刑 盒 可 以 用 于 妒 本

e

Se

g

領 域 , 叱 可 以 利 用 昱 色 栓 測 系 統 如采 用 域 其
) 中 的桂 霉 抗 生 物 素 蛋 白 城
肉 兜 肋

分 性 磷 酸 晦 的 系 統 。 例 如 , 萬 出 若 干 小 瓶 , 含有 在鍰 沖 液 、 N T 其
氯
叫 味基 磷 酸 酯 ( B

八 性 磷 酸 晦綴 合 物 , 將 其玫 汁 成 可依 次 迭 到 所 期 望 的 色 彩 , 而 使 井
其 可作 力 拭 荊 盒 的組 分 。 利 用 昱 色 栓 測 系 統 , 結 果 可 以 用 其

察 而 不 需 要任 何 玫各 的 都 助 。 在 一奕 施 方 式 札 栓 測 裝 置可 以 利 用

域 性 磷 酸 晦定 量 硝 定 存 在 的 [0 0

量 。 占 占光 密 度 升 一起使 用 吋 , 速

神 包 含 城 性 磷 酸 晦 的 裝 置 可 以 給 出 准 硝 的定 量 鈷 果 。
在 一奕 施 方 式

,測 栓
決

蛋 白或 抗 肚 亞 型
氯
叫 味基 磷 酸 醋

抗

休 的試 刑 盒 可 以 包 括

栓 測 杆 祀物 如桔 合 在 其 上 的鏈 霉 抗 生 物 素 蛋

含 NBT 或 白 喊性 磷 酸 晦綴 合 物 (B 的試 荊 以 及 參 比 杆 准 。
[0

在 本 申清描 迷 的任 一奕 施 方 式

, 試梓 品可 能 是未 自 測

但 不 限于 生 理 束 源 。 可 咪 用 于本友 明裝 置 的 測 試 梓 品 包 括 杯 疑 帝有
抗 原 或 抗 休 的祥 品 , 些 祥 品可 以 是未 自 非 人矣 的功物 休 或 者 人休 迷

可 以 用 于 本 友 明 裝 置 的 測 拭 祥 品 包 括 但 不 限于

生 理 休 液 如血 液 、

血 清 、 血 菜 、 唾 液 、 眼 睛分泌 物 、 肪 脊 液 、 旅 、 參 出 液 、 乳 汁 、 汗
液 、 眼 泊 、 耳 流 出 物 、 痰 、 淋 巴 液 、 尿 液 、 樊 便 、 口弄 分泌 物
坎 如肺 、 脾 和 腎

組

嗚胚 培 莽 中 的全病 毒 或 裂 解 病 毒 的 液

以 及其 它

杯 疑 含 有 流 感 病 毒蛋 白或 抗 流 感 病 毒抗 休 的祥 品 , 有 其 是可溶 的 只

如 或 可 惠 浮 于這 占 的 流 休 中 。 測 試 祥 品可 以 銓 迂預 先 赴 理 , 萃 取 、
添加 、 分 禹 、 稀釋 、 沫 縮 、 迂 漩 、 蒸榴 、 透 析 等 等 。 除 了生 理 液之
外 ,也可 以 使 用 其 它 的 液休 測 試 梓 品 ,而 且感 共趣 的成 分 既 可 以 是

也 液休 , 可 以 是 固休 , 要 弦 固休 能 被 溶 解 或 可 以 患 浮 于 一液休 介 只
盾 中 即 可 。 在 一奕 施 方 式 中 , 品取 自鼻 腔 。 本友 明 的裝 置通 常 帝 祥
有 可 以 附 看 一科 或 多 科 抗 原 或 抗 休 的表 面 。
02 0
[0 0
治 行 方 法 和 鈣 物組 合 物

本 友 明提 供 了 一神預 防 和 治 行 禽 流 感 病 毒相 芙 病 毒 感

包 染 患 者 的 方 法 , 括 吋 患 者 干預 一定 量 的 包 含 了一神 或 多 科 本 友 明

所 迷 羊 抗 的有 鈣 物 活 性 的 釣 物 成 分 。 本 友 明返 提 供 了 一科 含 有 本 友

明 所 迷 的 一神 或 多 神 羊 抗 的 鈣 物 成 分 或 在 此 基 玷 上得 到 的 盎 矣 釣

物。
[0 0

本 友 明 所 迷 鈣 物 成 分 的 干預 方 式 可 以 是佑 統 的 干預 途

往 ,包 括 口服 、 口腔 、 舌 下 、 眼球 、局 部 、肪 胃外 、 直舫 、什 鞠 內 、 內 胞 菜 岡 槽 內 、腹 股 洵 、膀 耽 內 、局 部 ( 如 , 刑 、 鈣 膏 或 滴 刑 , 粉

但 或 弄 腔 途 往 , 不 仗 局 限于 此 。
[0 0

這 合 肋 胃外 途 往 注 射 的 鈣 物 成 分 可 能 含 有 符 合 苟 物 制

各要 求 的 元 茵 水 或 非 水 溶 液 、 乞 客 荊 、 患 浮 液 或 乳 荊 , 在 帖 用 吋 可
重 志 成 可 注 射 的溶 液 或 乞 客 刑 的元 茵 粉 刑 。 如這 合 的 水 性 和 非 水 性

栽 休 , 具 和各 科 稀 釋 液 如 水 、 乙醇 、 多 楚 基 化 合 物 工
醇 、 聚 乙烯 二醇 、 丙 三 帑及 其 矣 似 物

如 丙 烯 乙二 如

,合 這 的 混合 物 ,菜 油

橄 枕 油 ) , 可 用 于 注射 的有 札 脂 , 乙燒 油 酸 。 如使 用 卵 磷 脂 衣 和 如
亮 堆 持 鈣 物 的合 這 流 功性 。 如使 用 乞 芬 刑 、表 面 活 性 刑 以 堆 持 合 這

的顆 粒 尺 寸 。
00

本 友 明 所 迷 的 釣 物 組 合 物 迂 可含 有 一些 起 保 妒 性 、 保

也 涅 、 化 和 乞 客 化 的佐 刑 , 可 以 含 有 預 防微 生 物 污 染 的速 溶 成 分 , 乳
如 抗 如各科 抗 細 茵 試 刊 、 具 茵 試 刑 , p a aben C h o ob a n o ,苯 盼 ,山梨 酸 及 矣 似 物 。 也可 以 包 括 堆 持 參 透 座 的 試 刑 , 糖 、 Na 如
及 其 矣 似 物 。 可使 用 延 長吸 附 的 拭 荊 未 延 未 注射 用 鈣 物 成 分吸 附 吋

如 同 , 羊 硬 脂 酸 盎 和凝 股 等 。
[0 0

口服 固 相 刑 型 包 括 肢 史 、 片 荊 、 粉 荊 、 顆 粒 荊 等 。 迷

些 固 相 荊 型 中 的 活 性 成 分至 少 混有 一神侍 統 的惰 性 釣 物賦 形 刑 ( 或

如村 檬 酸 鈉 、 磷 酸 鈣 , 伯 填 充 荊 或 添 加 刑 如涎 粉 、 乳 或 如 糖 、 蔗 糖 、 甘 露糖 和桂 酸 b ) 拈 合 刑 , 浚 甲基 仟 堆 素 、 藻 酸
栽休
盎 、 明肢 、 聚 乙烯 毗 咯燒 嗣 、 蔗 糖 和 阿拉 伯 村 股
涅 洞刑 ,
e

如甘油

d

碎 裂 刑 , 掠 脂 , 酸 鈣 , 鈴 薯 粉 或 木薯 粉 如 碳 巧
促 吸 收 刑 , 四氨基 混合 物 如
9)

如 鍰凝 刑 , 石 措
土

保涅刑 ,

如 十 六 燒 基 醇 和羊 硬 脂 酸 甘 油 酯

h ) 吸 附 荊 ,如 高 吟 土 和 斑 脫

如 硬 洞 滑 刑 , 滑 石 , 脂 酸 鈣 , 脂 酸 鎂 ,固 休 聚 乙二醇 , 硬

硫 酸 十二燒 醇 鈉 ,或 其 上 迷 物 辰 的 混合 物 。 在 片 刑 和肢 虹 荊 型 中 ,

可 能 近含有 鍰 沖 刑 。
0 09
固 相 刑 型 可 以 通 迂做 成 改 良釋 放 或 豚 沖 釋放 刑 型

,是

在 上 迷 提 到 的 各 科 立接 釋 放 賦 形 荊 中 添 加 一些 能 改 交 鈣 物 釋 放 速
率 的賦 形 刑

可 形 成 , 以 包 含 在 刑 型 中也可 以 做 成 外 衣 的形 式 。 速

碳 率 粹放 改造 荊 包 括竣 丙 基 甲基 年 堆 素 ,甲基 牙 堆 素 , 甲基 牙 堆 素
鈉 , 堆 素 乙坑 , 酸 仟 堆 素 , 乙烯 氧 化 物 , 原 肢 糖 , 丙 烯 仟 醋 聚 黃 弄
酸 氨 共 聚 物 , 化 稠 味油 ,巴 西 棕 桐措 , 措 , 苯二酸 醋 酸 坪 堆 氫 石 祁

邦 素 , 苯二 甲酸梭 丙 基 甲基 坪 堆 素 ,甲基 丙 烯 酸 共 聚 物 或 上迷 物辰
的 混 合 物 。 改 良 梓放 和 泳 沖 釋放 荊 型 可 能 含 有 一科 或 一組 具有 改 良

釋 放速 率 的 賦 形 刑 。

0
(

0

本 友 明 所 迷 鈣 物 成 分近 可 由快 速 的 客 化 刑 或 消 溶 刑

F

組 成 ,包 含 如 下 成 分
C

磺 天 冬氨 銑 苯 丙 氨 酸 甲 酯 , 腰 鉀 ,
u
C

o pov d on e 抗 杯 血 酸 ,乙 燒 基 丙 烯 酸 盎 ,乙坑 基 牙 堆 素 ,明肢 , 氫 氧 基 丙 基 甲基 仟 堆 素 , 甘 硬 脂 酸鎂 , 露 醇 ,甲基 乙丁 烯 酸 盎 , 味薄 荷 , 乙二醇 ,乞化 稠 聚 桂肢 , 氧 化 桂 ,乙 醇 酸 涎 粉 鈉 , 脂 酸 延 胡 索 酸 鈉 ,山梨 醇 , 二 硬 木
杆檬 酸 ,
o ca
e

oe

S od

糖 醇 。 迷 里 用 于描 迷 F DDF 的

依 "穿化 和 消 溶 " 一祠 , 賴 于 所 用 鈣

如 可 如 物 的 溶 解 性 , 鈣 物 是 不 可溶 的 , 制 成 快 速 的 芬 化 刑 型 , 釣 物
是 可溶 的 ,則 可制 成 快 速 的 溶 刑 型 。
[0
矣 似 形 式 的 固 相 成 分也使 用 堵 如乳 糖 或 牛 奶 糖 或 其 它
高 分 子 量 的 聚 乙二 醇 及 矣 似 的 賦 形 荊 制 成 軟 明 肢 或 硬 明 肢 的 填 充

刑型 。

[0 1

堵 如 片 刑 、 糖 衣 刑 、 股 史 荊 和顆 粒 刑 等 之 矣 的 固 休 荊

型 可 以 通 迂 堵 如舫 衣 或 其 它 本 領 域 普 通 人 員 均 知 曉 的 外 包 衣 亮 的

方 式 制 成 。 也可 以 是含 有 乳 油 刑 、 也可 以 是含 有 能 起 鍰 慢 、 延 返 、

控 制 活 性 釣 物 梓放 的 矣 似 的 成 分 。 也可 以 使 用 多 聚 物 和石 措 等 成 分

也 迸 行 包 埋 。 如 果 合 這 , 可 用 上迷 一神 或 多 科 賦 形 刑 把 活 性 成 分 制
戌 微 史 的形 式 的 刑 型 。
[ 02 ] 用 于 口服 的 液 休 刑 型 ,包 括 符 合 鈣 物 要 求 的 乳 狀 荊 、

溶 液 、 患 浮 液 、糖 菜 和 西 也刑 等 。 除 了 活 性 成 分 , 休 刑 型 也可含 液

如 可 有 本 領 域 常 用 的一些 惰 伴 溶 液 , 水 或 其 它 溶 刑 , 溶 性 試 刑 和乳
弄 化 刑 ,如 乙坑基 醇 , 丙 基 醇 ,乙坑 基 碳 酸 盎 ,苯基 安 息 香 酸 盎 ,

, 烯 乙二醇 ,油 ,特 別 是 , 籽 油 ,落 花 生 油 , 棉 玉米 油 , 枕 油 , 味油 和 芝麻 油 , 油 ,氫 棟 基 醇 ,聚 乙二醇 和 橄 甘 稠 脂 肪 酸 山梨 醇 酯 ,以 及 上 迷 物 辰 的 混合 物 或 吳 似 的 物辰 。 [0 除 了 迷 些 惰 性 稀 梓 液 ,鈣 物 成 分也可 包 括 保 涅 刑 、 乳 鈣 化 刑 、 惠 浮 刑 、糖 化 荊 、 稠 味刑 和香 味荊 等 佐 刑 。 另 外 , 物 成 分
丙 稀 乙二醇 ,

近 可 包 括 乙氧 基 化 均 聚 乙醇 ,聚 氧 乙烯 燒 基 山梨 醇 和 山梨 聚糖 脂 ,
膨 微 晶 仟 堆 素 ,同 氧 氧 化 侶 , 洞 土 , 脂 聚 合 物 和黃 茂 肢 , 迷 些 掠 或

物 底 的 混合 物 之矣 的 患 浮 刑 。 0 本 友 明 所 迷 筠 物 成 分也 制 成 這 合 菩 用 治 行 的 混 合 物 ,
或 符 合 菩 用 的 盎 矣 , 符 合 菩 用 的 溶 刑 或 初 戌 鈣 , 根搪 普 通 菩 匡 或 井

和 菩 匡 八 止 者 的要 求 制 成 一神 最 這 合 某 神 特 定 功 物 的 給 釣 荊 量 和
途 往 鈣 物 的合 這 荊 型 。

0

本 友 明 所 迷 一介 或 多 介 羊 抗 可 以 結 合 其 它 抗 病 毒 試 刑
禽 流 感 病 毒感 染 相 芙 疾 病 。 羊 抗 可 以 和迷 些
L

用 于預 防 和 或 治 行

分 抗 病 毒 試 荊 同 吋 、 升 或 連 瑛 給 鈣 。其 它 抗 病 毒 試 刑 包 括 利 巴 丰 林 ,
金 剛 院 ,浚基 腺 , L
[0 [0
8

和五梭桂胞 酸 , 不 仗 限于 迷 些 。 但

多 肢 篩 迭 方 法 和抗 休 祺 別 的 多 肢 及 疫 苗

本 友 明提 供 了 一科 篩 迭 本 友 明 所 迷 羊 抗 祇 別 的模 拙 表
D

本 位 多 肢 的栓 測 方 法 。 而 且 , 友 明也提 供 了本友 明 所 迷羊 抗 祺 別 的

表位 模 抽 多 肢 。 一方 面 , 友 明公 布 的短 肢 含 有 氨基 酸序 列 E 本
Ns
3

39。 迷 些 多 肢 能 侈 鈷 合 本友 明 所 迷 羊 抗 。 迷 些 多 肢 也可用 也 血 凝 素 抗 休 的存 于制 各 亞 型 禽 流 感 疫 苗 , 可 以 用 于珍 析 抗 在 , 可以 用 于 近 亞 型 禽 流 感 佐 刑 的 席 迭 及伏 化 坪 介 。 [0 另 一方 面 , 友 明 所 迷 的 肺 迭 方 法 包 括 如 下 步 睬 本
) 把培 在 特 定 余件 下培 莽 一介 這 合 多 肢 表 迭 的 多 肢 展 示 文犀 席 迭 特 弄 性 結 合 上迷 羊 抗 的 ( 莽 溶 液 和本 友 明 的羊 抗 混合

噬 茵 休 克 隆 。 用 于 篩 迭 的羊 克 隆 抗 休 不 仗 限于 羊 抗
0
。

,

D

和

本 申清 奕 施 例

中祥 匆 描 迷 了一科 利 用 噬 茵 休展 示 多

肢 文 庫 成 功 席 迭 結 合 本友 明 所 迷 羊 抗 的 短 肢 栓 測 方 法 。
奕 施例

0 20

吋 下 面 結 合 具休 奕 施 例 占 附 固 , 本友 明 迸 一步 加 以 描

但 迷 , 迷 些 描 迷 井 不 枸 戌 吋本友 明 的 限制 。

奕 施例

[0

] 下 面 結 合 具 休 奕 施 例 占 附 軋 吋本友 明 迸 一步 加 以 描
] 奕 施例

但 迷 , 迷 些 描 迷 井 不 枸 戍 吋本友 明 的 限制 。
[0

抗

正型 禽 流 感 病 毒

H

基 因羊 克 隆抗 休 的

[ [0

抗 原 的制 各
以 病 毒株

k/

/

/
以
0 .

N

)

竹

接科

夭齡 受 精 鳩 胚 ,0 C 孵 育
在 病 毒 。 收集活 病 毒 ,
病 毒努
H
C

收 得 天 后 , 集 塢胚 液 , 到 扛 增 后 的 u 2

夭 福 巧 林 福 水 巧 林 夭活 , 活
注
H

栓 測 , 定 夭活 病 毒 液 的 滴 度 硝

H
二

滴 度測定和 H

栓 測 的 具休 方 法 參 見
[ [
中
>

操作 指 南 , 們 迭梓 我
。

0

, 病 毒株 咳

由香 港 大 羊 微 生 物 系 提 供 )

白鼠 周 齡雌 性 扣 b / c

鼠 力 廈 口大 芋 生 命 科 芋 院 奕 醃 功 物

提供 。
[0 [2 ] 染 交瘤 的 制 各 ] 我 伯 使 用 杯 准 的休 內 兔 疫 方 式 和 P E
Ed

融 合 方 法 茨得 羊

克 隆 抗 休 ,祥 匆 方 法 參 見
La b o a o

a

o
a

e

a

. ,

"n
o

bod e s

y

a nua

o

p

ng

bo La b o a

y

.

筒

要 迂程 如 下
[0
(
F

小 鼠兔 疫

將 上迷預 赴 理 的病 毒液 勻 福 氏 完 全佐 刑

) 等 休 私 混 合 乳 化 ,銓 四肢 肌 肉 多 魚 注 射 , 只 每 次 注 射 每

0 0 u 。首 次允 疫后

d和

分 d , 別 用 同 祥 荊 量 的 病 毒 液加 弗 氏 不
的抑 制 效

完 全佐 刑 ( F

迸 行加 強 克 疫 。 第 二加 弦 后 采血栓 測

什 ,占 效什 迷 到
[ 02

6 0 后 , 小 鼠 脾 肚做 融 合 。 融 合 前 取

加 強 兔 疫 , 尾靜泳 注射 病 毒 液 叟
融 合 取血 清

次,

h 再次 1 只 。 制 各 0 抉 融 合板 。

滴 度 最 高 的 小 鼠 脾 肚 匆胞 占 小 鼠 骨 缸

先 瘤 匆 胞 相 融 合 , 把 脾 肚 研 磨 得 到 脾 匆胞 惠 液 , 后 占 匆胞 教 低 十 然
倍 的 赴 于吋敖 生 未 期 的 P / 0 小 鼠 骨隨瘤 匆胞 混合 , P E 婪
用
0

作

n 將 丙 神 匆胞 融 合 一起 ,然 后 把 融 合 匆胞 液 0 0血 1 分裝 到 0

抉 9 孔 板 中培 莽 。 融 合 培 莽 基 力 含 T 和 FB 的 P 0完 奕醃篩 迭 , 全 篩 迭 培 莽 基 。 抗 原 特 弄 性 克 隆逼 世 血 凝 抑 制 銓
次 克 隆化 后 ,得 到 穗 定 的羊 克 隆抗 休 細 胞 株 。

0

0

染 交瘤 的 篩 迭

融 合 后 匆胞 在 6 孔 匆 胞 板 上 培 莽
H

0

天 后 ,吸取 匆 胞 上 清 做 血 凝 抑 制
集 力止 。

栓 測 ,陌 性 孔 錐 按 克 隆化 ,
株 病 毒 占鳩 血 友 生 凝
D

直 至 匆胞 株 所 分 必 的 抗 休 能 移 穗 定 抑 制 u
0 0
1
篩 迭 皓果

茨得 三株 羊 克 隆抗 休
6

2

染 交 瘤 的培 莽

稔 定 的 染 交瘤 羊 克 隆 抗 休 細 胞 株 先在

二氧 化 碳 培 莽 箱 中妒 增 培 莽 , 銓

孔 持移 至

再 孔 , 特移 至

0

1

匆胞 瓶 多妒 增 培 芥 。 然 后 收 集 鈾 胞 瓶 內 的 細 胞 注射 到 小 鼠 腹 腔 內 ,
0 天后 八 小 鼠 腹 腔 叱吸取 腹 水 。 [0 0

羊 克 隆抗 休 的 鈍 化
腹 水先用
E

0
P

的硫 按 沉 涎 赴 理 ,然 后 吋 P B

pH

2 .透

析, 后用 之
D

柱在

得 下 鈍 化 , 到 鈍 化 后 的羊 克 隆 抗 休 , 婪

P

E 荃 定 鈍 化 后 的羊 克 隆 抗 休 鈍 度 。

[0
02

羊 克 隆 抗 休 的血 凝 抑 制 奕 盼活 性 銓征
迭用

株 束 源 于越 南 、印尼 、巧 東 西 亞 、泰 囚 、香 港 、
20 0

中 囚 和 歐洲 等 地 的局 于 不 同 交 弄 正 系 的 ( hen e
a
PN
N

H N 病 毒和 1 株 非

病毒 H

鳩

)

,利 用 血 凝 抑 制 試 醃 方 法

(

) 荃 定 所 迷 羊 抗 勻 病 毒 的反

座 性 ,結 果 如表

和 ,可凡
而吋

株 羊 抗 均 具有 很 好 的特 弄 性 ,占非
病 毒株 的反座 , 株 羊 抗 均 能 移 和 所

病 毒株 均 元 反 座

有 的 病 毒株 友 生 反座 ,昱 示 出很 好 的反座 藉 。
[0

表 1 羊抗吋

和非

病 毒 的血 凝 抑 制 試 詮 陌 性 反座

[0 [0
N1

] 0

羊 抗 吋病 毒 的 中和 奕 盼
利 用 微 孔 中 和 奕 驗栓 測 所 迷 羊 抗 吋
Hu

株不 同亞 系

病 毒 代 表株 的 中 和 活 性
)

e

Po

ea

.

PN
N

0

0

(

, 果 凡表 , 几 三株 羊 抗 吋所 有 可 結

病 毒株 均 昱

示 出 很好 的 中 和 活 性 。

利 用 抗 休 被 功 兔 疫 治 行 侍 染 病 是 一神 港 在 有 效 的 抗 病 毒 治 行

途 往 。 通 迪 休 外 微 孔 中和拭 盼 已征 奕 本友 明 涉 及 的羊 抗 吋 不 同 交 弄
亞系的
N

病 毒株 均 有 很 強 的 中 和 活 性 , 抗 特 魚 是 中 和褚 戶 、 羊

中 和 滴 度 高 。 力 迸 一步 銓 征 羊 抗 的 休 內 抗 病 毒 效 果 ,本 友 明 基 于
N

病 毒感 染 功物模 型

ab

. 小

在 鼠 , 功 物 生 物 安全

圾奕驗室

內 迸 行 了羊 抗 吋 一株 H N

禽 流 感 病 毒 的 抗 病 毒 治 行 休 內 驗征 奕 盼 。

具 休 如下
、 材料 勻 方 法

功 物 Ba b / H ) 羊 抗 an
)

,
b

PF

6

雌 休 周齡 , 性 , 重約
an

9

.

,

HMb

an

H

p

b
)
) (

2
N

病毒

Ba
o

ead

/ H/

/ 200
BL

N

)

麻 醉刑

o a n e (弄 弗 燒 )
奕聆室, 按

) 功 物 分組

提 前一天 將 小 鼠 送 入
。

只 一苑 分成

組 , 祀成 杆

…., 杞 汞 下每只 小 鼠 的 井
T

休 重 , 匆方 案 几表 祥
) 病 毒感 染

病 毒預 先 稀 釋 成

, ,小 鼠 病 毒接 /
。

神量 力

1 / 只 。 接 神 前先 用 弄 弗 燒麻 醉 小 鼠 ,然 后 病 毒 銓 鼻 腔 接

神感 染 小 鼠 。
) 羊 抗 的干預

病 毒感 染 后

h

dp

.

吋抗 休 治 行 組 小
e gh

鼠 分別 注射 不 同 的抗 休 , 量 均 力 荊

g /kg

bo d y

,注射 休

私力

u/o

e
病 毒感 染 后 的

現察祀 汞

每 天 , 天祀 汞 小 鼠 存 活

情 況 和相 座 的行 力 表 征 情 況 。

. 果 占分析 結
現 察 病 毒感 染 后
天 的 小 鼠存 活 情 況

表

,可知抗 休
00

治 行 組 和 明 性 吋 照 組 七梓 , 鼠 均 正 常存 活 小

天 , 行 效果 迷 治

, 病 毒吋 照 組 和 元 芙 羊 抗 吋 照 組 的 小 鼠 均 在 病 毒 感 染 后 第 而
0

天

升 始 死 亡 , 毒感 染 后 第 病

天全部 死 亡 , 亡 率 死

00
N

。 上迷 結 果

說 明抗
Ba

H

羊抗
/ H/

和
/

1D
0

在休 內 能 侈 有 效 治 行

禽 流感 病 毒

e ad

吋 小 鼠 的感 染 。

奕 施例

羊 克 隆 抗 休 的 戶 措 抗 病 毒 治 行 功物 試 銓

上 迷 試 驗 已征 央 羊 抗

和

能 移 成功治 打

N

禽 流感 病

毒吋 小 鼠 的感 染 。 由于 N 禽 流 感 病 毒 具 有 高 交 弄 性 ,不 同 交 弄 N 禽 流 感 病 毒株 的 抗 原 性 有 明 昱 不 同 , 以 有 必 要 迸 一 亞系的 所
步 驗征 羊 抗 吋 遺 侍 性 底 有 昱 著 差 弄 的
病 毒效 果 。
N

禽 流 感 病 毒株 的 戶 褚 抗

、 材 料 占方 法
(
( )
s

) 功 物 Ba b /

小 鼠 ,P F

6

休 周齡 , 性 , 重 約 雌
a

09

羊抗
N

an
病

b

p

b
Ba

E ead

毒
00

ndo e

a/

/
00

00

/H
e na

0

/ 19 /

henzhe / 0 /

) 麻 醉荊

o 1o a n e 弄 弗 坑 )

功 物 分組
只 一兌 分成

提 前 一天 將 小 鼠 送 入

B

L

奕 盼室 , 按

1 組 , 祀成 杆
。

,
0T

, 祀 汞 下每只 小 鼠 井

的休 重 , 匆 方 案 凡表 祥
) 病 毒感 染

病 毒預 先 稀 祥 成

, ,小 鼠 病 毒接 。 /

神量 力

1/ 只 。 接 神 前先 用 弄 弗 燒麻 醉 小 鼠 ,然 后 病 毒 銓 鼻 腔 接
) 羊 抗 的 干預

科感 染 小 鼠 。

分 別 在 病 毒感 染 后
g

h

4

1、

h 吋抗 休
e gh

治 行 組 小 鼠 注 射 不 同 的抗 休 , 量 均 力 刑

kg bo d y

,注

射休私 力

u / ou e
病 毒感 染 后 的

) 現察杞 汞

每 天 , 天祀 汞 小 鼠 存 活

情 況 和相 座 的行 力 表征 情 況 。

、 結 果 勻 分析

現 察 病 毒感 染 后
明 昱 不 同 ,毒 力 最 大 的是
始 死亡 , 染后 第 感

天 的 小 鼠存 活 情 況 ( 表

, 搪 各組 根

可 小 鼠 死 亡 吋 同 的早 晚 差 別 , 知 不 同 H N

病 毒株 吋 小 鼠 的 毒 力 有

,病 毒吋照 組 在 感 染 后 天 即 升 相 天 全部 死 亡 , 座 的 元 芙 抗 休 組 在 感 染 后 天
/
0

升始 死 亡 , 染 后 第 感

夭全 部 死 亡

毒 力 最 枉 的是

DN

,抗 休
天死

吋照 組 在 感 染 后 第

天 死 亡 一只 ,病 毒吋 照 組 在 感 染 后 第

亡 一只 ,其 余 均 存 活 下 未

和 N/

前 的毒 力 相 占 , 者
天全部 死 亡 , 休 抗 天全部 死 亡 。

的 病 毒吋 照 組 和 抗 休 吋 照 組 均 在 感 染 后
第

天 升始 死 亡 , 在 感 染 后 井

天 全部 死 亡

后 者 的 病 毒村 照 組 在 感 染 后

吋照 組 在感 染 后 第

天升始 死 亡 , 染后 第 感

h 2 h 的抗 休 干 吋 于 不 同 吋 同 志 的抗 休 干預 治 行 組 , h NM 1 等 三科 病 毒 的 治 行 效 果 均 力 0 0 預 吋 DN ,H

, 有 小 鼠 和 明 性 吋 照 組 一祥 正 常存 活 天 。 而 抗 休 吋 / 0 所 干預 組 治 愈 率 力 0 h 干預 病 毒 的 治 行 , 況相吋夏 染 , 情
組 的治 愈 率 力

.3

h 干預 組 未 能 成 功 治 行 病 毒吋 小 鼠 的感 染 ,
天和
羊抗

只 小 鼠 最 終 全 部 死 亡 ,小 鼠 死 亡 起 始 吋 同 和 最 終 全 部 死 亡 吋 同 分

別 比 病 毒吋 照 組 推 返 了

休 天 , 可 能 占核 病 毒毒 力 太 大 , 迷

內 夏 制 太快 , 休 干預 吋 同 太返 有 夫 。 抗

上迷 結 果說 明抗

H

吋

N

病 毒感 染 功 物 具 有 不 措

戶楷抗 病 毒治 行 效果 。

[0
E 耿兔 疫 法 , L

奕 施例
)

H 亞型 流感 病 毒

抗原 栓測 試 刑 盒 ( 晦

的組 裝
法栓 測 杆 本 中 的 H 亞 型 流 感
型

[0

本 拭 刑 盒使 用 叉抗 休 夫

病毒的

抗 原 。 首先 在 試 刑 盒 的 聚 乙烯 微 孔板 余上預 包 被 抗

流感 病毒

基 因 的羊 克 隆 抗 休 ,占 裂 解 后 的

型 流感 病 毒

抗

隨 原 加 到 微 孔 后 , 包 被 的羊 克 隆 抗 休 能 將 其 捕 茨 , 后 加 入 的 酵 杯 預
羊 克 隆 抗 休 也 能 勻 之 結 合 ,而 后 通 迂 晦催 化 底 物 昱 色 程 度 判 晰 結
果 。 占 杆 本 中 不 含 流 感 病 毒抗 原 或 不 是
H

底 型 流感 病 毒 吋 , 物 不

舍 昱 色 。 可栓 測 的林 本 包 括 排 泄 物 、 口卉 腔 分 泌 物 、 鳩 胚 培 莽 的 完
整 病 毒或 裂 解 病 毒等 。
[0 [0

晦杆 板 的 制 各
在 拭 刑 盒 的 聚 乙烯 微 孔板 余 上預 包 被 抗 H 型 流 感 病 毒
0刷 磷 酸 盎 緩

基 因 的羊 克 隆抗 休 隆 抗 休 , 克 隆抗 休 包 被 使 用 羊
沖液
+0 0
PB,

p

.

)
0

, 在

J 下 包 被 迂夜

然后使用 P B T

血 PB

.

T ee

明肢

柵P B + 2 , C 封 閉 h ,再 扣 干井其 空抽干 包 裝 成 成 品試 刑 盒 酵
孔
o

扣 洗 潦 一次 , 干后 再 加入封 岡 液 (

杯板
[0

x1

試 刑 盒其 它成分的 配 置
病 毒 裂解 液組 戌

02 7

裂解 液 裂解 液
B

LB
LB

HP

+

e en

0

+

T een

0

B
)

M

p

使 工 F , 用 弄 丙 醇 溶解 , 作 終 沫度 力
p
P

刪。
裂解 液
[0
LB

刪

PB

.
型 流感 病 毒
H

]

晦杆 拭 荊
日性 吋 照

以

杆 祀抗

基 因 的羊

得 克 隆 抗 休 隆 抗 休 , 到 稀 釋 度 合 這 的 酵杯 拭 刑
02

使 用 合這 滴 度 的

N

u22 株 夭 活 病 毒作

力 陌 性 吋照
「 0

0

明 性 吋照

以 裂解 液

力 陌 性 吋照 。

[0

昱色

.
B

g / L Na HP

.

0+

.

g / L 杆檬

, 酸 . + 0 . g / L 迂氧化 氧豚
0

昱 色刑

液

02M
T B)

.

h
0 [ [0 [0 [0 [0 [0

b e nz

ne

5 L 四 甲基 耿 苯 肢 , ,, M/ L 二 甲基 甲銑 腰 +

,

,

終止液

波硫 酸
x PB T

浪縮 洗 潦 液

封板 膜
自封 袋

2張

介

說明半

份
0

栓 測 迂程
配液 將
1 浪縮 液 ( 0

,用 蒸榴 水 或 去 萬 子水稀 梓 )
空 白吋照 孔 不 加祥 品及 晦

至
[0
0

各用
編考

每 將 祥 品吋座 微 孔 板 按序 編 考 , 板 座 玫 明 性 吋
2 L和 空 白吋照
。

照

孔 , 性 吋照 陌
0

孔

析 試 荊 , 余各 步 相 同 ) 其
[0

祥 品赴 理 及加 梓
2 ] 占 祥 品力 液 休 吋
包 括 原 始 林 本 、 塢胚 培 莽 杆 本 、 細

胞培 莽杆 本 )

占

B

u B +4 B B 預 配這量 的 B 按每 孔 需 要 u待 的 混合 液 井 振 蕩 混合 。 然 后 在微 孔 上每 孔 先加 入

再 測 杆 本 , 加入
[

u

配 好 的 上 迷 裂 解 液 迸 行 反座 。

占祥 品力 干拭 子原 始 杆 本 吋

取

LB

+

0u

B

B

+

pB 混合 后 ,加 入一介 林 本 管 中 , 坊 溶 解 杆 本 ,室 溫 靜 置 振

n 后 ,重 新 振 惠 后 ,
加
0

00

p

萬

n ,吸取 上 清 栓 測 , 孔 每
取

1 迸 行反座 。
占祥 品力 干 異 便原 始 杆 本 吋

0

LB

+ 40

LB B

+1
600O

加 一介 PBS 混 合 后 , 入, . 林 本 管 札 將 干 樊 便 配 置 戍
3Om i

10 % ( W/ V )

振 的 樊 患 液 杆 本 , 莎 溶 解 杆 本 ,室 溫 靜 置

n

后 ,重 新 振 患 ,

rp

萬

5 m i n, 取 上 清 栓 測 , 孔加 吸 每

0O

迸 行反座 。
1 O Ul
O

[0265] 每 次 栓 測 均 需 要玫 置 明 陌 性 吋 照 孔 , 孔 加 每

吋

[0266] 孵 有 : 用 封 口膜 封 板 后 置 微 量 振 坊 器 上 中 等 速 度 室 溫
( 25 ~ 2 ; ) 震 蕩
次 冬量 扣干 。
m

n
揭 掉 封 板 膜 , 洗板 札 洗 潦 5 遍 ,最 后 一 用
0O

[0267] 洗 潦 小

[0268] 加 晦 : 分 別 在 相 座 孔 中加 入酵 杆 試 刑
[027 0 ] 重 夏 步 琛 6

[0269] 孵 有 : 用 封 口膜 封 板后 , 3 7 度 溫 有 3 0 分舛 。 置

[0271] 昱 色 : 每孔 加 入昱 色 荊
37

A 、 液 各 5 Ou l , 控 振 坊 混 勻 B 枉

,

C 避 光昱 色

30

分舛 。

[0272] 測 定 : 每孔 加 終 止 液 1 滴 ( 5 0 1 ) ,枉 控 振 坊 混 勻 , 用 晦杆 伙 羊 波 未 4 5 O n m ( 需 玫 空 白吋 照 孔 ) 或 叉 波 未 4 5 O n m/ 63 0 n血
測 定 各孔 D 值 。

[02 7 3 ] 桔 果 判 定 :

[0274] a) 明 性 吋 照 的正 常 范 固 : 正 常 情 況 下 ,明 性 吋 照 孔 弋

.( 阿 性 吋照 孔 OD 值 若 大 于 0 .座 舍 弄 , 果 所 有 阿 性 吋 照 孔 OD 如 1 1 03 03 值 都 大 于 0 . 座 重 夏 奕 醃 。 若 陌 性 吋 照 孔 小 于 0 . ,則 按 0 . 1,
0

汁算 )

。

[02 7 5 ] b) 陌 性 吋照 的正 常 范 園 : 正 常 情 況 下 ,陌 性 吋 照 孔 OD

值

戶

0 50

.
C)

[0276]

帖 界值 ( CUTO FF)if算 : 明 性 吋 照 孔 OD 均 值 + O
片

.

5

[0277] d) 陌 性 判 定 : 祥 品 OD 值
流 感 病 毒 H5 型
HA

帖 界值 ( UTO F ) 者 力 禽

抗 原 反座 陌 性 。

[0

e) 例 性 判 定
型
H

梓品

值 帖 界值 (

UT F F

者 力禽 流

感 病毒

抗 原 反座 阿 性 。

0
禹

奕 施例

羊 克 隆抗 休 控 鏈 基 因 和 重 鏈 基 因 可 交 匹 的 分

0

9

半 貼 壁 培 莽 1 0 介 染 交 瘤 匆胞 , 管 吹起 貼 壁 匆胞 使 患 吹
1禹
管

浮 , 移 到新 的 持

,
pH

p

萬

.

n , 集沉涎 的細 收

胞, 患于 重

u

元 茵 PB
T

.

持 中 , 移 到 一新 的
e

.

禹

管 中 。 加入 0 0 u

zo

靜置
1

0

。

加入

u

a ny ,枉 控 期倒 混 勻 , 。 刷 n, 4 氯 仿 , 烈 振 蕩 1 S 靜置 1
o c he

p

再

n , 移 上居 液休 至一新 的 特

.
。
。

萬

管 中,

n。 4 加 入 等 休 私 的 弄 丙 醇 ,混 勻 ,靜 置 n ,弄 上 清 , 入 u1 醇 洗 潦 ,4 加
n ,弄 上 清 , 涎 于 沉
DE P

20

p

禹
萬
0

p

0

C 其 空抽干 5

n 。 透 明 的沉 涎 溶 于
T

1

H

,中 ,分裝 成 丙 管 。 每 管 加入

u 反持 汞 引 物 ,其 中 一管
g
T

加 入 的反 特 汞 引 物 力 M J
ggT

g TT T

T/

g

TT

g/
DJ h

特汞 引物力
(g /

,用 于折 增 重 鏈 可 交 匹 基 因 。 每 管 再 加 入 。 n , 即放 到 冰 浴 中 置 5 n ,加 dNTP (上 海 生 工 , 2 置 水浴 立 u u / u Po ega) , u an x 反特 汞 鍰 沖 液 入0 1 將 N 反 特 汞戍 c N C ( u u P o e g a ,混 匆后 于 )法, [ 0 0 ] 抗 休 基 因 可 交 匹 的 分 萬 采 用 聚 合 酵桂 式 反座 ( P
使 用 根搪 No vage

,

,用 于折 增 控 健 可 交 匹 基 因 ,另 一管 加入 的反 TT g /g gg T g gT gg T

公 司 的 g Pn
Jk

e

k

s

合 成 的 引 物姐 以 及 另 外 設
海 博 正公 司 合 成

汁合成 的 丙 余下 游 引 物

Jh
DJ h

,

Jk

力 控 撻 可 奕 匹基 因扛 增 的 下 游 引 物 ,

力 重 桂 可 奕 匹基 因 折 增

模 的 下 游 引 物 。 板 即 力 以 上合 成 的 丙 科 c N

余件 力

,

°

0

°

n

0

Cyc

e

,

°

n

回收 目 的

片 段 井克 隆至 p

T 栽 休 , 至上 海 博 亞 公 司 測 序 , 列 銓 b a 送 序
D

比 吋后 硝 定 抗 休 可 交 匹 序 列 ,井推 測 出 相 座 的氨基 酸序 列 。

[

] 依 上迷 方 法 八

禽 流 感 羊 抗 染 交瘤 鈾

胞 株 中 克 隆 出 其 抗 休 可 交 匹 基 因 , 推 測 出 相 座 的氨基 酸 序 列 。 表 井

表 所 示 力 所 用 的上 游 引 物序 列 ,

所示

株 羊 克 隆抗 休 可 交 匹核
Co p

甘 酸 和氨基 酸 序 列 蝙 考
de e
Pe

表
)
oe
U

' 中的互朴 決 定 匹

e en a y
TT

nan

e g on
o

D

a ba

方 法硝 定 ( a b a
e q u en c e
O

y

es an

e
De p a

.

p

oe s

O

uno o g c a
e
D

nee
N

.

en

O

He a

v ce

P

Be he da

其中

h an d Hu a n 和 ¥

推 匹 一致 , 測 二者 是 同 一介 羊 克 隆 抗 休 而 未 。
[0

表

扛 增 禽 流 感 羊 抗 可 交 匹基 因 的上 游 引 物

0

3

奕施例

羊 鏈 抗 休 的表 迷 及 活 性 栓 測
) 短肢

[0

] 將 抗 休基 因 的 重 鏈 和鞋 鏈 可 交 四通 迂
N

,

連接 成 羊鏈 抗 休

片

段。 以
F/
D

g

F/

力 引 物 吋妒 增 出 力 引 物 吋扛 增 出 力 引 物 吋扛 增 出

重 撻 可 交 匹 片 段 ,以 控健可交 匹 片 段 。 以 重鏈 可交 匡 片 段 。 以
F

F/

D

力 引 物吋折 增 出
P
系

控

鏈 可 交 四 片 段 。 引 物 序 列 凡 表 0 。 分 別 回 收 四介 片 段 。 再 以 重 健

可 交 匹 和 枉 鏈 可 交 匡 片 段 互 力 引 物 及模 板 在 新 的
以
g
HF /
D

統 中迸 行

得 重 垂 延伸 , 到 少 量 完 整羊鏈 抗 休 片 段 。 然 后 以 完 整 片 段 力模板 ,
力 引 物 迸 行 大量 扒 增 重 垂 的
F/
D

羊鏈 抗休 片

段 ,以

力 引 物 迸 行 大量 扛 增 重 垂 的

車桂
E

抗 休 片 段 。 回 收 羊 健 抗 休 片 段 ,以 Nd e 抗 休 片 段 , 隆 到 相 同 時切 的 p T 克

/ Ec o

酵 切 回收到 羊 健

T 原 核 表 迷 栽 休 中 。以

大肋 杆 茵 作 力 表 迷 茵 株 ,采 用 常 規 方 法 表 迷 ,鈷 果 表 迷 的 蛋 白底

是 以 不 溶 性 的 包 涵 休 形 式 存 在 。 以 常規 方 法 洗 潦 鈍 化 包 涵 休 ,結
果 羊 鏈 抗 休 主要 溶 解 于

尿 素 中 。 將 溶解 于
0

尿 素 中 的羊 桂 抗
0

休 蛋 白逐 步 吋

透析 夏性 ,

p

再

分舛 去 除沉 涎 ,

將 最 終 得 到 的初 步 鈍 化 的羊 健 抗 休 溶 液 迸 行 活 性 測 定 。

[0

采 用 竟 爭 EL

法栓 測 初 步 鈍 化 出 的

羊撻 抗 休 的
禽 流感

活 性 。 在 聚 苯 乙烯 板 余 的 孔 中 包 被 禽 流 感 多 克 隆 抗 休 ,井 用 B

封 閉 , 測 孔 中加 入 待

上迷 羊鏈 抗 休 溶 液 以 及
t

病 毒 ,明 性 吋 照 孔 中 則 加 入

1 x PB 溶 液 及
1 反座 C

1 禽流
小 吋后 ,

感 H 病 毒 , 性 吋 照 孔 中 加入 陌

禽 流 感 多 克 隆抗休 及

禽 流感

三 病 毒 , 孔 重 夏 。 各孔稍 混 勻 后 于

以

P 杆 杞 的 禽 流 感 多 克 隆 抗 休 力 二抗 再 反 座 半 小 吋 , 入 加
1 昱色 C

、B

昱 色 液于
均 敬值 力 0

分舛 ,終 止 反 座 后 用 酵 杆 伙 瑛 敖 。 鈷 果 坍

性 吋照 平 均 敬值 力

, 性 吋照 平 均 敬 值 力 陌

00

.

, 測孔平 待

.

,祝 明 初 步 鈍 化 出 的
株
N

羊 健 抗 休 蛋 白具 有 較 高

的活 性 。

[0

迭用

病 毒 ,利 用 血 凝 抑 制 試 銓 方 法 ( H )

荃定所迷

羊 撻 抗 休 占 病 毒 的反 座 性 。 在 6 孔 血 凝 板 扒 每 孔

加入
00

L
g

PB

,在 第 一孔 中 加 入

1

羊鏈抗休溶液

如 L 到 第 二孔 , 此 向后 倍 比 稀 釋 。 取 n ,再 加入 0 . 鳩 病 毒加 入羊 捷 抗 休 屯 室 溫 孵 育 0 n, 察 虹 細胞凝 集 。 皓 果 8 羊 現 紅 匆胞 0 L,室 溫 孵 有 0
井混 乞 取

.

桂 抗 休 吋其 中 的

株 病 毒都有

活性

表

o

[0

]汪

. 、

滴 度力

矛清

釋

的 n 次 牙 , n 力 表 中鉗 直

、

迭用
迷
u

H N 病 毒 , 用 血凝 抑制 試詮 方 法 利

H

荃定所
9

羊 鏈 抗 休 占 病 毒 的反座 性 。 在
B

孔血 凝 板 中 , 孔 加 入 每
1
病 毒加

D 羊撻 抗 休 溶 液 0 . , 第 一孔 中加入 u 在 取 如 井混 勻 , 2 到 第 二孔 , 此 向后 倍 比 稀 釋 。 取 n , 加 入 0 . 鳩 虹 匆胞 再 入羊 撻 抗 休 叱 室 溫 孵 育 0
1

L

室溫 孵 有

n ,現 察 虹 細 胞 凝 集 。 結 果
U

羊鏈 抗休在稀梓 至

倍 吋仍 吋
奕 施例

病 毒有 弱 H 活 性 。

抗 休 基 因 可 奕 匹 的 突 奕 及嵌 合 抗 休 的表 迷 及 活 性 栓 測
NB

通迪

岡站中 B a s

友 序 列 比 吋分析 , 現

和 和
g

的

重 撻 可 交 匹序 列 的 F

匹 域 存 在 几 介 氨基 酸 的 交 弄 , 測 是在 克 隆 推

基 因吋由

DJ

下 游 引 物 的 兼 井 性 而 引 入的 。所 以 將
匹 域 迸 行 氨基 酸 突 奕 。 其 中
N N
E E

的 重鏈 可 交 匡序 列 的 F

H

的核

苦 酸序 列 由原 未 的
基 酸序 列 由原 未 的
中
N

突 交成 突 交成
E

E

N
DN

4

氨 的序 列 ,
的序 列 。 其
E

E

4

D

的核 苦 酸序 列 由原 未 的

N

分別 突 交 成
的序 列 。

4

和

E E

DN

4 的序 列 , 基 酸序 列 由原 未 的 E 氨

DN

分別 突 交 成

N

4

和

E

N

D占

的

核 苦 酸 和氨基 酸序 列 相 一致 。 突 交 后 的
DN
E

的核 苦 酸 序 列

和 氨基 酸 序 列
DN

E
D

N N
0

分別 占

的核 苦 酸序 列
因此表 迭 由 E
DN

9 和氨基 酸序 列 E
E

一致 。

4

和

N

組 成 的嵌 合 抗 休

即 同 吋代 表 1 D 占

的嵌 合 抗 休 。

將

和

分 羊 抗 的 重 健 可 交 匹 和控 桂可 交 匡 基 因 , 別 加
a

上信 青肢 序 列 ,再 克 隆到 含 有 人 g a
序 列 的具 核 表 迷底 粒 中 。 其 中 p c N

重 鏈 和 kappa 控 撻 恆 定 匹

.

含有 人 g a

a

重桂 恆

定 匹 序 列 ,pcDNA3
以
8G98CH

. 1-

Ak

含 有 木控 健 kappa

恆 定 匹序 列 。
8G9

Fl

/8GgVHRl 力 引 物 吋扒 增 出
PCR

部 分重 鏈信 子肢 序
F 2 /8GgVHRl

列 及可 交 匡 片 段 , 咳 以

8G98CH 戶 物 力 模板 ,
8G9

力 引物
H

吋,妒 增 出 帝完 整信 考 肢 的
Xh

重 健 可 交 匡 序 列 ,克 隆 至

Bam

/

八 晦切 的
8G9

pcDNA3

. l-AH
9。

底 粒 ,八 而 茨得 表 迭人 鼠 嵌 合 重 健 的
以
8G98C

表 迭席 粒
出
8 G 98CK

pcDNA3

. l AH8G

F 1 /8GgVKRl
PCR

力 引 物 吋折 增

部 分控 撻 信 寺 肢 序 列 及 可 交 四 片 段 ,以 亥
F2/

戶 物 力模 板 ,
8G9

8G gVKR l 力 引 物 吋扒 增 出 帝 完 整 信 考 肢 序 列 的

控健
底粒,

可 交 匹 片 段 , 隆 至 Eco 克

ho

1 叉 酵切 的
pcDNA3

pcDNA3

. 1- A k
A

八 而 茨得表 迷人 鼠 嵌 合 枉 鏈 的表 迷友 粒
同 上 方 法 ,以 1 3D4VH F l /13D4VHRl

.l

k8G 9

.

引 物 吋 折 增 出 1 3D4
NO:

43

)

,克 隆至 Bam

和 13D4VHF2 / 13D4VHR l 力 重 鏈 信 寺 肢 序 列 及 可 交 匹 片 段 ( 含 S E Q ID H I/ X h o 1 汲 晦切 的 pcDNA3 . -AH 戾 粒 ,八

而 茨 得 表 迭 人 鼠 嵌 合 重 鏈 的 表 迷 底 粒 pcDNA3
13D4VHFl

.-

A H l3D4SV 。 以

/13D4VHR2 和 13D4 V H F 2 /13D4VHR2 力 引 物 吋扒 增 出 13D4

重 桂信 考 肢 序 列 及 可 交 四 片 段
/
Xh o

1 叉 晦切 的
F 2 /13D4VKR2
EcoR

pcDNA3

.

ID NO : 4 5 ) ,克 隆 至 Bam H -AH 底 粒 ,八 而 茨得 表 迭人 鼠 嵌 合 重
(

含

S EQ

健 的表 迷戾 粒
1 3D4VK

pcDNA3

. l A H l3D4LV
I/
Xh o

.

以 13D4VKFl /

13D4VKR2
Ak

和

力 引 物 吋扛 增 出 13D4 控 桂信 考 肢 序 列 及 可 交

克 匡 片 段 , 隆至

1 叉 晦切 的
pcDNA3

pcDNA3

.-

八 底粒,

而 茨得 表 迷人 鼠 嵌 合 控 鏈 的表 迷辰 粒

. l-Akl3D4 。 嵌 合 抗 休

表 迷席 粒 凡 固
293

1。

通 迂磷 酸 鈣 特 染 法 將 含 嵌 合 重 鏈 和嵌 合 控 桂 的 叉底 粒 共 特 染 FT 細 胞 ,收 集 培 莽 上 清 ,卸 茨得 表 迷 的嵌 合 抗 休 (cAb) o
'

13D4

的 丙 科 嵌 合 重 桂 的底 粒 分 別 占 13D4 嵌 合 桂 健 的席 粒 組
13D4

合 , 而 茨得 丙 神 伙

一 嵌 合 抗 休 , 神私 力

13D4

嵌 合 抗休

V

, 另

一神 竹 力

13D4

嵌 合 抗 休 L V。 將

13D4 鼠 羊 抗 的 沫 度 稠 整 嵌 合 抗 休 和

什 b ) 的初 始 波度 至 . u g / ,用 丙 神嵌 合 抗 休 的 細 胞 培 芥上清針吋 神 N 毒株 迸 行 血 凝 抑 制 活 性 栓 測 。 由表
鼠羊抗

的 結 果 可知 , 神嵌 合 抗 休 吋 丙

神H

N 1 毒株 的 H

反座 占

D鼠

羊 抗 基 本 一致 , 明 丙 神 表

D 嵌 合 抗 休 都 休 留 了 鼠 羊 抗 的特 弄 性

和戶褚性 。

嵌合抗休

的序 列 占

致 , 此 也征 明 2 因

的嵌 合 抗 休 亦 有 很 好 的特 弄 性 和 戶 褚 性 。

迭用 胞 上清 中的

U

H N 病 毒 , 用 血凝 抑制 試醃 方 法 ( 利

) 荃定 匆

嵌 合 抗 休 占 病 毒 的反座 性 。 結 果
病 毒有

嵌合抗休在

稀粹 至
奕施例

倍 吋仍 吋 U

活性。

八噬茵休

肢 庫 中 席 迭 模 抽羊 克 隆抗 休

祺 別 表位

的短 肢

噬茵休肢 的 篩 迭
[0 迭 用 Ne
p
D. .

En g a n d B o a b s

公司 的

肢 噬 茵 休展 示
結合

文犀
的

pe p

de

b

ay
n

肺 迭 勻 羊 克 隆抗 休

肢 ,按 操 作 祝 明 半 迸 行 。 大休 如 下

0
于微 量 禹

0

吸取
J管

Poe
TB

加 中,

,.
.

掠 脂 糖 介席
T e en

0

的水 惠 液 )

T B T)

溶液 。 控 彈

管 壁 或 溫 和 震 訪 重 惠 介底 。 低 速 禹

0

秒 , 涎 介底 ,小 沉
C

吸去

上 清 。 介成 重 患 于
勻 。 此 期 同 , TB 在 用

血

1 封 阻鍰 沖 液 中 ,

鍰 沖 液將
00

, " 介 噬 茵 休 粒 子( 相 占 于
t

作用

0

分舛 , 水 混 偶

u

1 的原 始 文 庫
力
用

和

n

。

室溫作 用

ng 抗 休 稀 釋 至 終 休 私 0 0 分 舛 。 封 阻反 座 后 , 速 萬 低

,抗 休 終 沫 度 沉 涎 介底 , 井

TB T 洗

次 ,每 次 均 需 沉 涎 介戾 。 將 噬 茵 休 抗 休 混 合 物

加 入 洗 迂 的 介底 札 溫 和 混 軋 室 溫 作 用
速禹
于
J

分舛 井 不 吋 混 勻 。 低
0 次 。 重 惠 沉 涎 介辰
g/

沉 涎 介底 ,弄 上 清 , 用
02M的

TB T 洗
p

.

y c ne

2

.

B

室溫

作用

分舛 ,洗 脫 結 合 的 噬 茵 休 。 禹

洗脫 混合 液
0

分舛 ,小
T

將 上 清 特入 另 一新 的微 量 萬
p

管 中 。立 即 用 1

1

H

.的鍰 沖 液 中 和 洗脫 液 。 取 出 約
7

L 滴 定 噬茵休 滴 度 。 將 剩

余 的 噬 茵 休 溶 液加入
C 震 蕩 培莽
n 。 吸取 上 部
PE
00

L 吋敖 生 長 前期 的 E

宿主 茵 液 中,
0

. 。 將 茵 液移 入 h
0

L禹

管 中,

p
Na
p

禹
0

清 ,加 入 1
)

休私 的

PE

.

Na

溶液
PE

靜 置 迂夜
/ Na

萬

n 。 倒 掉 上 清 ,用

L TB 溶 解 沉 涎 噬 茵 休 。

C禹
3

5
0

n

吸 取 上 清 ,加 入
1

/

休私 的
。

溶液 ,
0

靜置

. h

p

41 禹

倒 掉 上 清 ,用
8

L TB 溶 解 沉 涎 噬

茵休 ,
0
LB

保 存 。 重 夏 上 迷 步 琛 ,迸 行 再 一拾 的 篩 迭 。

將 迂夜 培 莽 的 E
介銓 迂

宿 主 茵 按 照 1 10 的 比 例 稀 釋 到

培 芥基 中 , 將 茵 液 分 裝 到 培 莽 管 中 ( 井
PT

抗 休 挑取
到 1.

拾 肺 迭 的 LB 接 菌 斑 羊 克 隆 , 神 到 上畔茵 液 中 。
萬

每神 羊 克 隆 / ga 培 莽 板 上 主 色 的 噬
L/ 管
。

管 中 ,1 0

9禹

按照 小 量
作 手 冊提 取

3 抽提 鈍 化 試 刑 盒
s s DN 。

C 震 訪 培 芥 . 。 將 茵 液移 h 后, 取 余 u 清保存 , 下 的 海 半 舜 生 物 工程 有 限公 司 ) 操

婪 上 海 博 亞 生 物 技 木有 限公 司 測 序 ,茨 知 插

入的

肢序 列 和

肢 序 列 如表

.

[0
序列

表

勻 羊 克 隆抗 休

結合的

肢序 列 及

肢

噬茵 休 肢 的結 合 活

性栓測

u 洗脫 下 未 的 噬 茵 休 迸 行 滴 定 。 劣 取 萬 羊 一噬 茵 休 空 斑 至吋敖 期 的 E 茵 中 , C培 芥 . h、
收 集 噬 茵 休 上 清 迸 行 EL
以

第 三掩 篩 迭 后 , 出 約 取

、、

栓測 。 包被

/ Ph a c a , 血 e s ha 噬 茵 休 上 清 力 一抗 , n 0 0 稀 梓 力 二抗 , 禽 流 感 相 夫 抗 休 B o e ch U 以 取 b
以 及抗
E

" 休( 抗
b
B

g

波度 的 鼠 羊 抗

E 蛋 白的 不 相 芙 抗 休

b 力 鼠 羊 抗吋照 。

囚

昱 示 噬 茵 休 多 肢 的栓 測 桔 果 。 由 囚 中 結 果 可知 , 部 分 噬 茵 休 大
的瑛 值 高 于 吋 照 抗 休

肢 針 吋 目析 抗 休
性。

倍 以 上 , 較好 的特 弄 有

噬 茵 休 肢 的結 合特 弄 性栓 測

迭取
E

篩

迭 所得序
E

的 陌 性 噬 茵 休 代表介休 , 在

茵 中 重 新 折 增 四介 小 忖 , 取 上 清 , E L 收 作

栓 測 其特弄性
的
9 8

分別 迭取
羊 抗有
2
由困

和
8

羊 克 隆抗 休 共 0 株 , 力 吋 照 , 中 作 其
0F

F

E

的羊 抗 有

0

F

。 抗 休 包 板 港度 力

可見

栓 測 奈件 同 上 。 具 叫 , 休 EL 迷 五 介 序 列 勻.目杆 羊 抗 的反座 活 性 很 高 ,七

神 吋 照 抗 休 的 結 合 活 性 都 很 低 , 很 好 的特 弄 性 。 有
奕 施例

.

占

蛋 白融 合 表 迷 及 活 性 栓 測
E

融 合 表 迭 栽 休 的枸 建

本
(a a

奕

聆 室在 大肪 杆 茵 中表 迭 了
0

F2

的 一介

片

段

. .

)

,茨得 的 重 組 蛋 白

可組 裝 成 力 矣 病 毒顆 粒 ,
方法, 建 枸

具 有 良 好 的兔 疫 原 性 。 以
出2

力 例 ,我 們 通 迂 P

序列的
9

端 融合

肢 序 列 的原 核 表 迷 栽 休 p T 肢 序 列 玫汁 引 物 ( 表
:

針 首先 , 吋

序列和
9 F/

)

T ,以

.

基因
妒增 。
迸

力模 板 , 用 引 物 2 座

3g 鈍 化 后 作 力 模板 , 用 引 物 座
妒增 , 增 出 折
9

迸 行 第 一拾

P

扛 增 。 戶 物 回收 、
9

F/

迸 行 第 二拾 P
F/
N

戶 物 回收 、 鈍 化 后 作 力 模 板 , 用 引 物 座
P
片 段。

迸 行 第 三掩

回收 ,鈍 化 后 用

和 Bg

行 耿 晦切 , 后 連 接 入用 然
連 接 物 特 化 大舫 杆 茵 E
即 力 重組原 核 表迷栽休
2
:

Nd

八 晦切 的 栽 休 p T T 中 。 , 量 表 迷及底 粒 時切荃 定 , 性 克 隆 小 陌

和 Ba

g

。

用 同梓 方 法 , 建 出 枸

g

,

融 合 蛋 白的底 粒 。

[04 0 4 ]

表 1 4 239

G

l,

2 3 9 G2

,

239 G 3

,

239 - G5 克 隆 引 物 序 列

[04 0 5 ] 239 -

,

G2

,

G3

,

G5 G2

融 合 蛋 白的表

也和 鈍 化

[0406]

才

取 特 fb 2 3 9 - Gl

,

G3

,

G5

底 粒 的 ER2566 羊 茵
D

落 ,于 2 血 L 含 有 Kn 功訕性 的 L
0 8 , 后 按照 1: 然
功

吾 芥基

中 ,3 7 C 震 坊 培 芥 至

約

.

100O 的 tt 例 特 接 妒 大培 芥 至 5 0 0 b
方 約 1 0 吋,

B ( 含 有 Kn

培 訕性 ) 中 , 莽 至 D

.

入 IPT
L
]皮

OO

l

L, 3 7 C 誘 手
的
J

8 lC 下 收 集 茵 休 , 00O 9 禹 t J 6 血 i n。 弄 上 清 , 休 沉 涎 用 2 0血L/ 茵

裂解 液重 惠 。 冰 水浴 , 用 超戶 破 采
1 2 0 OO rpm 萬

,赴 理 , & P匆
牛

吱 9戶 余W,。

停 下 : 工作 吋 間 : 5 m i n ; 泳 沖 : 打 2 s e c , 5 s e c ; 喻 出 功 率 : 7 0

; 1 O m i n , 留 上 清 ,冗 涎 用 保
l

mL 2%T

r

on 重 惠 ,

震務 3

i n 12 0 OO rpm
30 m in

;冗 1O m i n , 保 留 J 清 , 3定 用
,

1 重惠 , 坊 震
萬
tf

震坊

uffeI 1 赴 理 一次 12 0 OO rpm lO m i n ,保 留 上 清 ,9冗 涎 用 mL 2M U f e a / Buffef I 重 志 , 3 0 血 i n 12 0 OO rpm 萬 ; 1O m i n , 留 上 清 ,冗 涎 用 mL 4M 保

重 夏 T riton/

.

L Buffe r

.

U

e a / Bu

重惠 , 坊 震
n , 留 上清 。 將 保

0

n

p

萬

保留
n

上清 , 涎 用 沉

U e a / Bu

e
U ea

重患 , 蕩 震

.

p血

軒
PB

U e a 中 的蛋 白梯 度 透 析 至
o

中
00 [0 0 ] 00

U ea

U ea
2

U e a PB )

2

融 合 蛋 白的 活 性 栓 測

直接

EL

法栓 測
9

將初步鈍化 的

,

,

融 合 蛋 白以

g

/ L 的 波度 包 被

孔板 ,

C

h 。 洗板 1 次 , u F

封 岡 液封 閉

非 特 弄 性 結 合位 魚 ,

C 2h 后

C 迂夜 。 弄 去封 岡 液后 , 孔加 每
P,
g

入
其中
抗,

不 同 的 晦杯 抗 休 ,包 括
P力

P

及

P

.

蛋 白特 弄 抗 休 ,

P力

肢 篩 迭所用 羊

n PB T 洗板 次 , 入昱 色 液 昱 色 加 n, C孵有 終 止 液 終 止 ,晦杆 伙祺 值 。 結 果 見 困 。 由 圈 結 果 可知 , 栽休 0 P 都 有 反座 , 座 值 迷 .以 上 , 明 反 玩 融 合 蛋 白占抗 休

載 休 融 合 蛋 白表 迭 、 鈍 化 正硝 。
弱 的反座 。 有 可 能
篩 迭得到 的
2

和
肚段

g

占
2

H P 有較

,

在

栽 休 蛋 白上 井 不 能 很 好 地展 示 出 相 座 肢 段 在 噬 茵 休 上 所 具 有 的 活

性。
奕 施例

肢 占 HB

Cg

蛋 白融 合 表 迷

融 合 表 迭 栽 休 的枸 建

利用

Bc

g

的a. 肛

在 大肋杆 茵 中 能 以 矣 病 毒顆 粒 形 式 表
介 氨 基 酸 插 入 大腸 杆 茵 表 迭 栽 休
Bc g
Bc

迷 的 性 底 ,本 奕 盼 室 將 核
pT
80

T 中 ,井 以 連 接 子替代
兩 介 氨基 酸 , 建 了 突 交 型 枸
T

B 匆胞 伉 勢 表位 匹 段 的 第

表 迭席 粒
Bc

p
g

u
內部

HB c g 有
ayo

看很 強 的

匆 胞 克 疫 原 性 ,外 源 多 肢 在
nan
eg

咖u

odo

o n , ,a a

.
8

的 融 合 不 合 改交 其顆 粒 的 多

性且 聚 特 ,, 可

吏 外 源 表 位 暴 露 于顆 粒 表 面 。

將

,
HB C
。

肢 分別 以

介 拷 貝 插入 HB C g 的 第

9

和
HBC

0

立氨 基 酸 片早 到 相 座 融 合 蛋 白

以 HBC

p

分 的栽 休序 列 , 別 役
BC

。 十含

BC D , 別 命名 力 BC 分 首 力 例 , 先根 搪 肢 序 列 ,以 及

肢 序 列 的正 向 引 物 及 通 用 反
力 模板 , 用 引 物 座
莫板

向 引物
Bc

表 拾
P

)

。

以P

HBC

F

, 用 引物 座 卜 HBC F HB C 迸 4于 第 二 b p 扛 增 。戶 物 回收 、 化 后 作 力 模板 , 鈍 B 座 用 引 物 HBC F / H C 之行 第 三拾 P 妒 增 , 增 出違有 妒 ,銓 Bg 和 E CO 晦切后 回 介拷 貝 序 列 的 a. a.
迸行 第
妒 增 。 戶 物 回收 、鈍 化 后 作 力

叉 晦切 栽 休 6 回 &栽 休 后 占 片 段 連 接 。 違 接 物 特 匕大肋杆 茵 E
收鈍 化得 到 片 段 。 同 吋以

,

Ba 血

和 E CO

P 先
于

UT

表

荃

荃 定 及友 粒 晦切 荃 定 , 定 正硝 的辰 粒 即 插 入 了
命名 力
[0
BC

介
BC

拷貝序列 ,
D

。用 同祥 方 法

, 建出 枸
HB C

BC

2

,

HB C

融 合 蛋 白的底 粒 。

表

HB C

HB C

BC

克 全引

0 1 ] 融 合 蛋 白的表 迭及 鈍 化

0
2

恃

Bc

Bc
血

D

,
牙

HB c

HBc D

表

之辰 粒 的

接 茵神 , 利 于
約0

,

L 含有

私性 的 L B

培 莽基 中 ,
0

震 坊培
B

芥至
1 C 誘手

. 然 后按照 ,

00 0 的 b 例 特接 扒 大培 莽 至 0 0血
約0

含有 n 抗 性
沉淚 用
瑜 出 功率
0

.4

培 中 , 芥至 D

.吋 ,加
再

下收集 茵休 , 0 9

,6

u n 。 弄 上 清 ,茵 休
打

&的 裂 解 液 重 患 。 冰 水 浴 ,采 用 超 戶 破碎伙 赴 理 皮碎
工作 吋 間
00

細 胞 。 超 戶 奈件 如 下

n, 留上清 。 保 [ ] 由 于 上 清 表 之蛋 白 校 柴 ,故 需 要吋其 走 于 鈍 化 。 井 且此 美 蛋 白在 這 宜 的 余件 下 可 以 自友組 裝 形 成 顆 粒 , 以 吋蛋 白迸 所
皿

, p

n

泳沖

停 ec ,

ec

萬

.

行 鈍 化 的 同 吋 , 考 慮 其 自友 組 裝 形 成 顆 粒 的 余 件 。 我 們 采 用 以 下 座
方 法 吋蛋 白迸 行 鈍 化 以 及促 迸 蛋 白 自友組 裝 形 成 顆 粒
以 忌 休私

,弄 上 清 。 沉 涎 用 含 有 起, C 震訪 0 n, 2 p禹
萬

,

的 量 加 入飽 和硫 酸 按 迸 行蛋 白沉 涎 , 浴反座 冰

n
B

p
Bu
PB

琉 基 乙醇 的

吹

n , 清透析 至 上

.

(

含有
P

0

刪 Na

和

0

刪E

) 的鍰 沖 液 休 系 中 。
00

每

h抉 液一

抉 次, 液

次后 收集透析 液 ,
E 荃定 鈍度 。
D
HB c
Bc

p

萬

1

血

n , 清 祥 品迸 上

行

Bc

HB c
Bc

HB c D HB c

合 蛋 白活 性 栓 測
Bc D

將初步 鈍化 的

融 合蛋

白以

/ L 的 浪度 包 被

孔板 ,

C

2h 。 洗板

次, u F

. 封 岡 液封 岡 非 特 弄 性 鈷 杏位 魚 , T 2h 后

C 迂夜 。 弄 去 封 岡 液
HP
P

每 后 , 孔加入
P。

L 不 同 的 酵杆 抗 休 ,包 括
P力

及

其中

蛋 白特 弄 抗 休 ,
n

P力1 肢

篩 迭 所 用 羊抗 ,

孵有

pB

T

洗板

加 次 , 入昱 色 液 昱 色

, 止 液 終 止 , 杯伙 瑛 值 , 果 凡 困 。 由 困 鈷 果 可知 , 時 終 結 肺迭 占 只 有 HBc 有 反座 , 反座 值 較 低 。 說 明 由 但 得到 的 肢段 , 在 B c 栽 休 蛋 白上 井 不 能 很好 地展
示 出相 座 肢 段 在 噬 茵 休 上所 具有 的 活 性 。
奕 施例
奕銓

合 成 肢 占禽 流 感 病 毒 的 竟 爭 E L

[0

取禽 流感 病 毒
k/

特弄 鼠羊抗

以

u g/

包板 ,

病 毒株

/u
/

/0

以

稀 梓 后 加 入孔板 中 孵 有 ,

h
000

弄 去 孔 中 病 毒 , 不 同 沫度 梯度 的 將

合成肢 占 1
C,
0血

稀釋 的

g

P 共 同 加 入孔 板 中 孵 育 ,
PB

n 。 以 不相 夫
洗板

肢 作 力 明 性 吋照 , 又 以 另

力不 加 合 成 肢 的 明 性 吋 照 。P B

次 , 入昱 色 液 昱 色 加
迭
0

血

n ,終 止 液 終 止 ,時杆 伙瑛 值 。 竟 爭率
酵
抗 原 表位 的部 分 空 同 結
9 吋具有 竟

且 力 波度依 賴 性 ,則 合 成 肢 能 占禽 流 感 病 毒 竟 爭 結 合
肢 可 能模 拙 了
。

迸 杯 抗 休 , 一步 提 示
枸 。 皓果几 囿

由困

可知 , 合 成 肢 的 沫 度 力

爭活 性 。
奕 施例

禽 流感 羊抗 用 于 席 迭 禽 流感
型 禽 流 感 羊 克 隆抗 休 包 被

H

蛋 白特 弄 結 合 的 配 休

用

孔板 , 一步 捕 茨 禽 流 感 病 迸

毒 , 將 這 量 噬 茵 休 肢 庫 勻 病 毒 孵 育 , 去 未 桔 合 噬 茵 休 及 大量 非 再 除
特 弄 性 吸附
用 戶 培 中 和羊 抗 或 腹 水 竟 爭 洗 脫 勻

蛋 白特 弄 性 結

合 的噬 菌 休 肢

再 用 血 凝 抑 制 或 竟 爭 EL

栓測噬茵休肢 , 迭 出 挑

勻 戶 禧 中 和羊 抗 竟 爭 結 合

蛋 白的
以

肢 , 于禽 流 感 的 鈣 物 治 行 。 用

禽 流感 羊抗 F

9 / 血 1 量 混合 包 板 捕 茨 病 毒 效 果 良

好 , 流感 禽

亞 型 病 毒 yu

皓合 完 全 取 噬茵 休原 始 肢庫 (

孔 的 量 另 包 板 的抗 休 01 p u ) u 1 稀 粹 于 TB T 中 ,
以
1 C

平 均 加入 0 介 孔
淘洗
H

u

孔,
.

孵 育 h 第 一拾 用 TB T

.

次 , 后 用 TB T ' 以
D

. 淘洗 附

遍

用 這 量 的禽 流 感 抗 休

混 合 物 未 竟 手 洗脫 。 如此 循 杯 至 第 三拾 篩 迭 , 定 滴

篩 迭 物 , 取 羊 克 隆 噬 茵 斑 折 增 后 做血 凝 抑 制 或 竟 爭 EL 挑

, 占

竟 爭 病 毒 的 結 合 位 魚 。 挑 迭 出 占 戶 措 中 和羊 抗 竟 爭 結 合

蛋 白的
奕 施例

肢。

.

、

合成 肢 阻析

奕醃

按 常規

方 法稠 整 病 毒 k/ H U

/ 0 至合 這 的 滴 度 取
1
50 0

ug
9腹

合 成 肢 , 比 稀梓 至 1 倍

,各稀 釋梯度 均 占
k/

稀釋 的

叉 水 混合 , 孔 重 夏
育
,

核 混合 物 占病 毒

U

/ 0 在孔 中 室溫 孵

h 后 ,加入

u 塢 虹 匆胞

室溫 孵 有 0

. 后 ,硯 察合 成 肢 h

-

-

?
HI #|!R *f, *f 4$M , *TJ L G 2
S

4

HULB
UL

6

.

G2

ltB

r «it
8G9mA

ia
b

*f4jfc W
A,

THMiWR T

**J

ttf t

*
i

HI

5

*#.

8G9 V H :

f?
'J:

S E Q ID N O : 1

CAGG TCCAACTGCTGCAGCCTGGGGTTGAGCTGGTGAGGCCGGGGGCTTCAGTGAAG C TGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACGTTCACCAGCTTCTGGATGAACTGGGTTAAACAGA
GGCC TGACCAAGGCCTTGAGTGGATTGGAAGGATTGATCCTTACGATAGTGAAACTCACTA

CAA TCAAAAATTCAAGGACAAGGCCATATTGACTGTAGACAAATCCTCCAGCACAGCCTAC
A TGCAACTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTGGAAGAGGCATTG

CTACA TTAATGGTTCTACCTGACTACTGGGGTCAAGGCACCACGGTCACCGAATCTCTAGA
GGA

TCCCCGGGTACCGAGCTCGAA

tTCGTAA

8G9 V H
QVQ

-

l MM U

J

:

S E Q ID N O : 2

LLQPGVELVRPGASVKLSCKASGYTFTSFWMNWVKQRPDQGLEWIGRIDPYDSE

THYNQK FKDKAI LTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCGRGIATLMVLPDYWGQGTTVTE
S LEDPRVPSSNS

8G9VK

:

f

r&tiLfr&\

S E Q ID N O : 3

GACA TCCTGATGACCCAATCTCCATCCTCCATGTCTGTATCTCTGGGAGACACAGTC
AGCA TCACTTGCCATGCAAGTCAGGACATTAGCAGTAATATGGGGTGGTTGCAGCAGAAAC

CAGGGAAGTCATTGAAGGGCCTGATCTATCATGGAACCAACTTGGAAGATGGAGTTCCT
AAGG TTCAGTGGCAGTGGGTCTGGACCAGATTATTCTCTCACCATCAGCAGCCTGGAATCT

TC

GAAGA TTTTGCAGACTATTACTGTGTACAGTATATTCAGTTTCCGTGGACGTTCGGTGGAG
GCAC CAAGCTGGAGATCAAACGGGCT

8G9VK

#

f

J

:

S E Q ID N O : 4

D
V

ILMTQSPSSMSVSLGDTVSITCHASQDISSNMGWLQQKPGKSLKGLIYHGTNLEDG

PSR FSGSGSGPDYS

LTISSLESEDFADYYCVQYIQFPWTFGGGTKLEIKRA

13D4VH:
CAGG

&&&%&]

SEQ

ID N O : 5

TTCAGCTGCAGCAGTCCGGAGCTGAGCTGATGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAG

A TATCCTGCAAGGCTACTGGCTACACATTCAGTGGGCACTGGATAGAGTGGGTAAAGCAGA

GGCC

TGGACATGGCCTTGAGTGGATTGGAGAGATTTTACCTGGAAGTGGTAATATTCACTA

TAATGAGAAGTTTAAGGGCAAGGCCACATTCGCTGCAGATACATCCTCCAACACAGCCTAC
A TGCAACTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCCGTCTATTACTGTGCAAGATTGGGTA

C TACGGCAGTAGAGAGGGACTGGTACTTCGATGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGA
A TCTCTAGAGGATCCCCGGGTACCGAGCTCGAATTCG

c c f 13D4VH . £ j f# * J:

SEQ

ID N O : 6

IHYNEKFKGKATFAADTSSNTAYMQ
V TES

LSSLTSEDSAVYYCARLGTTAVERDWYFDVWGQGTT

LEDPRVPSSNS

13D4VK:
GACA
AGCG

&&&%&)

SEQ

ID N O : 7

TTGTGATGACCCAGTCTCAAAAATTCATGTCCGCATCAGTAGGAGACAGGGTC

TCACCTGCAAGGCCAGTCAGAATGTGGGTACTCATTTAGCCTGGTATCAACAGAAAC

CAGGTCAA

TCTCCGAAAGCACTGATTTACTCGGCATCCTACCGGTACAGTGGAGTCCCTGA

TCGCTTCACAGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAATGTGCAGTCT
GGAGAC GCACCAAGC

TTGGCAGACTATTTCTGTCAGCAATATAACAACTTTCCGCTCACGTTCGGTGCTG TGGAAATAAAACGG

V

PDR FTGSGSGTDFT

LTISNVQSGDLADYFCQQYNNFPLTFGAGTKLEIKR

20A 1 1 VH;
CAGG

c c f # Sf# * J:

S

EQ

ID N O : 9

TTCAGCTGCAGCAGTCTGGAGCTGAGCTGATGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAG

A TATCCTGCAAGGCTACTGGCTACACATTCAGTGGGCACTGGATAGAGTGGGTAAAGCAGA
GGCC

TGGACATGGCCTTGAGTGGATTGGAGAGATTTTACCTGGAAGTGGTAATATTCACTA

TAATGAGAAGTTTAAGGGCAAGGCCACATTCGCTGCAGATACATCCTCCAACACAGCCTAC
A TGCAACTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCCGTCTATTACTGTGCAAGATTGGGTA

C TACGGCAGTAGAGAGGGACTGGTACTTCGATGTCTGGGGCCAAGGAACCTCCGTGACCGT
G TCCTCC

20A 1 1 V H

# J,gk

?J:

S

EQ

ID N O :10

IHYNEKFKGKATFAADTSSNTAYMQ
V TVSS

LSSLTSEDSAVYYCARLGTTAVERDWYFDVWGQGTS

13D4VK:
GACA

& $-&%&]

SEQ

ID N O :11

TTGTGATGACCCAGTCTCAAAAATTCATGTCCGCATCAGTAGGAGACAGGGTC

AGCG

TCACCTGCAAGGCCAGTCAGAATGTGGGTACTCATTTAGCCTGGTATCAACAGAAAC
TCAATCTCCGAAAGCACTGATTTACTCGGCATCCTACCGGTACAGTGGAGTCCCTGA

CAGG

TCGCTTCACAGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAATGTGCAGTCT
GGAGAC

TTGGCAGACTATTTCTGTCAGCAATATAACAACTTTCCGCTCACGTTCGGTGCTG TGGAAATAAAACGG

GCACCAAGC

13D4VK
D

#J

f?
'J:

S EQ

ID N O :12

IVMTQSQKFMSASVGDRVSVTCKASQNVGTHLAWYQQKPGQSPKALIYSASYRYSG

8G9

VH

£ ? .f e

#

?
' J

S E Q ID N O :41

CAGGTCCAACTGCAGCAGCC

TGGGGTTGAGCTGGTGAGGCCGGGGGCTTCAGTGAAG

C TGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACGTTCACCAGCTTCTGGATGAACTGGGTTAAACAGA
GGCC TGACCAAGGCCTTGAGTGGATTGGAAGGATTGATCCTTACGATAGTGAAACTCACTA

CAA TCAAAAATTCAAGGACAAGGCCATATTGACTGTAGACAAATCCTCCAGCACAGCCTAC
A TGCAACTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTGGAAGAGGCATTG

C TACATTAATGGTTCTACCTGACTACTGGGGTCAAGGCACCTCCGTGACCGTGTCCTCC

8G9 VH
QVQ

£?

&& &# *' J

S E Q I D N O: 4 2

LQQPGVELVRPGASVKLSCKASGYTFTSFWMNWVKQRPDQGLEWIGRIDPYDSE

THYNQK FKDKAI LTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCGRGIATLMVLPDYWGQGTSVTV
SS

13D4VH -SV

%$L & #$J?H:

S EQ I D

N O :43

CAGG TTCAGCTGCAGCAGTCTGGAGCTGAGCTGATGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAG
A TATCCTGCAAGGCTACTGGCTACACATTCAGTGGGCACTGGATAGAGTGGGTAAAGCAGA
GGCC

TGGACATGGCCTTGAGTGGATTGGAGAGATTTTACCTGGAAGTGGTAATATTCACTA

TAATGAGAAGTTTAAGGGCAAGGCCACATTCGCTGCAGATACATCCTCCAACACAGCCTAC
A TGCAACTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCCGTCTATTACTGTGCAAGATTGGGTA

C TACGGCAGTAGAGAGGGACTGGTACTTCGATGTCTGGGGCCAAGGAACCTCCGTGACCGT
G TCCTCC

13D4VH -SV
QVQ

£ ?#J

f?J:

S E Q ID N O :44

LQQSGAE LMKPGASVKISCKATGYTFSGHWIEWVKQRPGHGLEWIGEILPGSGN

VTVSS

13D4VH -LV

e £?f #$

? J:

S EQ

I D N O:

45

CAGG TTCAGCTGCAGCAGTCTGGAGCTGAGCTGATGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAG
A TATCCTGCAAGGCTACTGGCTACACATTCAGTGGGCACTGGATAGAGTGGGTAAAGCAGA
GGCC

TGGACATGGCCTTGAGTGGATTGGAGAGATTTTACCTGGAAGTGGTAATATTCACTA

TAATGAGAAGTTTAAGGGCAAGGCCACATTCGCTGCAGATACATCCTCCAACACAGCCTAC
A TGCAACTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCCGTCTATTACTGTGCAAGATTGGGTA

C TACGGCAGTAGAGAGGGACTGG
G TCCTCC

TACTTCGATGTCTGGGGCCAAGGAACCCTGGTGACCGT

13D4VH -LV
QVQ

£ ? & & !*#

*]:

S E Q ID N O :46

LQQSGAELMKPGASVKISCKATGYTFSGHWIEWVKQRPGHGLEWIGEILPGSGN

IHYNEKFKGKATFAADTSSNTAYMQLSS LTSEDSAVYYCARLGTTAVERDWYFDVWGQGTL
VTVSS

杖
1、

利
H

要

求

一神 能 特 弄 性 鈷 合

亞 型 禽 流 感 病 毒血 凝 素 蛋 白的羊 克 隆
Ns

其 抗 休 , 中 , 迷 的羊 克 隆 抗 休 包 括 迭 自 于 如 下 一組 的 可 交 重 鏈 所

山
D

包 含 一介 或 多 介 、 氨 基 酸 序 列 力

E

的

的可 交 重 鏈
包 含 一介 或 多 介 、 氨基 酸序 列 力
E

N

S

1
2

的

的可 交 重 桂
(
包 含 一介 或 多 介 、 氨基 酸序 列 力
E

DN

的

的 可 交 重鏈 。

如枝 利 要 求 所 迷 的羊 克 隆抗 休 ,其 中 ,所 迷 的 可 交 重 鏈 包 括 迭 自 于 如 下 一組 的氨基 酸序 列
、
E
E

N

2
E

E

DN

和

E

N

0

E

N

N

4

N

如杖 利 要 求 下 一組 的 可 交 枉 捷
、

所 迷 的羊 克 隆 抗 休 , 迸 一步 包 括 迭 自 于 如 其

包 含 一介 或 多 介 、 氨 基 酸序 列 力

E

Ns

的
2

的可 交 控健

) 包 含 一介 或 多 介 、 氨基 酸序 列 力
的可 交 控 健
(
包 含 一介 或 多 介 、 氨基 酸序 列 力

E

Ns

的

E

N

0的

的可 交 控健 。
、

如杖 利 要 求

所 迷 的羊 克 隆 抗 休 ,其 中 , 迷 的 可 交 枉 鏈 所

包 括 迭 自 于 如 下 一姐 的 氨基 酸序 列

E

N

E

N

和E

N

.

、

如杖 利 要 求

所 迷 的羊 克 隆 抗 休 , 迸 一步 包 括 迭 自 于 如 其

下 一組 的 可 交 控 桂

山

包 含 一介 或 多 介 、 氨 基 酸序 列 力

E

N

的 的 的

的可 交 枉 撻
包 含 一介 或 多 介 、氨基 酸序 列 力
E

DN

的可 交 控 桂
包 含 一介 或 多 介 、 氨基 酸序 列 力
E

N

的可 交 枉 鏈 。
、

如杖 利 要 求
E

所 萍 的羊 克 隆 抗 休 , 叱 所 迷 的 可 交 控 撻 其
E

包 括 迭 自 于 如 下 一組 的氨基 酸序 列

N

4

N

和

E

N

、

如枝 利 要 求
Fa b

所 迷 的羊 克 隆抗 休 , 扒 所 迷 的羊 克 隆 抗 其 或 Fv

休 力 Fab
、

F a b)

如杖 利 要 求

所 迷 的羊 克 隆 抗 休 , 札 所 迷 的羊 克 隆 抗 其

休 力 比 b 、 Fab
、

、 叭a b )

, Fv 或

如枝 利 要 求

所 迷 的羊 克 隆 抗 休 , 叱 所 迷 的羊 克 隆 抗 其

休鈷合
0、

亞 型 禽 流 感 病 毒血 凝 素 的

值小于

X

u
0

如杖 利 要 求

所 迷 的羊 克 隆 抗 休 , 札 所 迷 的羊 克 隆 抗 其
K

休結合

亞 型 禽 流 感 病 毒血 凝 素 的

值小于

。

x

。

11

、

如枝 利 要 求

1

所 迷 的羊 克 隆 抗 休 , 札 所 迷 的 羊 克 隆 抗 其

休 包 括 非 -CDR 匹 , 非 -CDR 匡 是 未 自 不 是 鼠 矣 的物 神 。 孩
、

12

如杖 利 要 求

11

所 迷 的 羊 克 隆 抗 休 , 札 所 迷 的 非 -CDR 其

匹 是 未 自人 矣 的 抗 休 。

13

、

如枝 利 要 求

12

所 迷 的羊 克 隆 抗 休 , + 其

, 迷 的人矣 非 -CDR 所

匹 具 有 一介 或 多 介 未 自 鼠 抗 休 的取 代 氨基 酸 。

14

、

一科 能 特 弄 性 結 合

H5

亞 型 禽 流 感 病 毒血 凝 素 蛋 白的羊 克 隆

抗 休 , 札 所 迷 的 羊 克 隆 抗 休 包 括 迭 自 于 如 下 一組 的 羊 克 隆 抗 休 : 其

山
胞株
8G9

染 交 瘤 匆胞 株

8G9

所 戶 生 的羊 克 隆 抗 休 , + , 交 瘤 匆 其 染

的保 藏 考 是

C C TCC

-C2 006
TCC
A

39

;

(i i)

染 交瘤 匆胞 株

13D4
CC

其 所 戶 生 的羊 克 隆 抗 休 , +

, 交瘤 染 ,交 染

匆胞株

13D4

的保 藏 考 是

- C2 0072
ll
TCC

1;

(i i i)

染 交瘤 細 胞 株
2OA

所 戶 生 的羊 克 隆 抗 休 , + 其

瘤 細 胞株

ll

的保 藏 考 是

CC

- C2 006

38
0

15

、

一神 染 交 瘤 匆胞 株 ,咳 染 交 瘤 匆 胞 株 迭 自 于 如 下 一組 的 柴

交瘤 匆 胞 株 :

山
(i i) (

保藏考 力

C C TCC

保藏考力
)

CC

保藏考 力

CC

- C2 006 TCC - C2 0072 TCC - C2 006
H5

39

的 染 交 瘤 匆胞 株
1
38

8G9

;

的 柴 交 瘤 匆胞 株

13D4;
2OA

的 染 交瘤 匆 胞 株

ll

16

、

一神 能 特 弄 性 結 合

亞 型 禽 流 感 病 毒血 凝 素 蛋 白的羊 克 隆

抗 休 , 札 所 迷 的 羊 克 隆抗 休 能 侈 封 閉 所 迷 的血 凝 素 蛋 白占迭 自 其

于 如 下 一組 羊 克 隆 抗 休 相 結 合 的 活 性 的 至 少

5 0%

:

山
胞株 8
(
匆胞 株

染 交瘤 細 胞株

染 所 戶 生 的羊 克 隆 抗 休 , 中 , 交瘤 細 其
0

的保 藏 寺 是
染 交瘤 細 胞 株

染 所 戶 生 的羊 克 隆 抗 休 , 中 , 交 瘤 其
T

的保 藏 考 是

0

(

) 染 交瘤 匆 胞 株
的保 藏 舌 是
T

染 所 戶 生 的羊 克 隆 抗 休 , 中 , 交 其
00

瘤 匆胞 株 2

、

如枝 利 要 求

所 迷 的羊 克 隆抗 休 , 中 , 迷 的羊 克 隆抗 其 所
0

休 封 岡 所 迷 的血 凝 素 蛋 白結 合 活 性 的 至 少
1、

如杖 利 要 求 7 所 迷 的羊 克 隆 抗 休 , 中 , 迷 的羊 克 隆 抗 其 所 休 封 閉 所 迷 的血 凝 素 蛋 白結 合 活 性 的 至 少 0

一神 分 禹 的核 酸 分 子 ,其 包 含 能 侈 編 碼 抗 休 重 鏈 可 交 匹 的 核 酸序 列 , 所 迷 的 抗 休 重 鏈 可 交 四 則 包 含 迭 自 于 如 下 一組 的氨基 而
、

酸序
E

Ns
E

1
9

(

)

N
E

)
0、

N

如杖 利 要 求
E

所 迷 的 分 禹 的核 酸 分 子 , 中 , 迷 的 重 鏈 其 所

可交 匹 包 含迭
N N
E

自 于 如 下 一組 的 氨基 酸序 列

2
E

E

N
N

和

E

DN

0

E

N

其 所 如杖 利 要 求 0 所 迷 的分 禹 的核 酸 分 子 , 中 , 迷 的核 酸 分 子 包 括 迭 自 于如 下 一組 的核 酸序 列
2 1、

E E

N
E

E

N
DN

5

和

E

N

E

N

DN

、

一神 包 含 如枝 利 要 求 一科 包 含 如枝 利 要 求

所 迷 的核 酸 分 子 的表 迷 栽 休 。 所 迷 的表 迷 栽 休 的 宿 主 匆 胞 。

、

一科 分 禹 的核 酸 分 子 ,其 包 含 能 侈 蝙 碼 抗 休 控 鏈 可 交 匹 的 核 酸序 列 , 所 迷 的 抗 休 控 桂 可 交 四 則 包 含 迭 自 于 如 下 一組 的氨基 而
、

酸序
E

N
E

(

)
)

N
E

Ns

2

0

所 迷 的 分 再 的核 酸 分 子 , 中 , 迷 的 枉 桂 其 所 如杖 利 要 求 可 交 匹 包 含 迭 自 于如下 一組 的氨基 酸序 列 E N 8和 E N E N 、

即迷 的分 萬 的核 酸 分 子 , 中 , 迷 的核 酸 其 所 分 子 包 括 迭 自 于 如 下 一組 的核 酸序 列
、

如杖 利 要 求
N

E

E

DN

和

E

N

.

、

一神 包 含 如枝 利 要 求
一科 包 含 如枝 利 要 求 一神栓 測 梓 品 中

所 迷 的核 酸 分 子 的表 迷 栽 休 。
所 迷 的表 迭 栽 休 的 宿 主 細 胞 。

、

、

亞 型 禽 流 感 病 毒 的 方 法 , 包 括 如下 步 其

a 將 所 迷 的祥 品占校 利 要 求

1、 、

或 1 中 的 羊 克 隆抗 休 迸

行接 蝕
b 栓 測 所 迷 的羊 克 隆抗 休 占所 迷 病 毒 的反座 。
0、

如枝 利 要 求

其 所 迷 的方 法 , 札 所 迷 的羊 克 隆抗 休 附 看

在 固相 上 。
、

如枝 利 要 求

所 迷 的 方 法 , 札 所 迷 的 固 相 迭 自 于如 下 其

一組
、

微 滴 定 板 、磁 顆 粒 、 股 乳 顆 粒 和硝化 年 堆 素 膜 。

如枝 利 要 求

0 所 迷 的方 法 , 札 其

所 迷 的羊 克 隆 抗 休 是按

如此 方 向 附 看 在 所 迷 固 相 上 , 能 侈 增 加 所 迷 羊 克 隆 抗 休 勻 所 迷祥 其 品的 結 合 放 率 。
、

如枝 利 要 求

其 所 迷 的 方 法 , 札 所 迷 的 羊 克 隆 抗 休 是通

迂其 但 定 匹 域 而 附 看在 所 迷 固相 上 的 。
、

如枝 利 要 求

所 迷 的 方 法 , 札 所 迷 的反座 是通 迂 晦昱 其

色 迸 行測 定 的 。

、

如枝 利 要 求

研 迷 的 方 法 , 中 , 迷 的反座 是通 迂 焚 光 其 所

迸行測 定 的 。
所 迷 的 方 法 , 札 所 迷 的反座 是通 迂 化 孕 其 如枚 利 要 求 友 光迸 行 迸 行 測 定 的 。
、

、

如杖 利 要 求
F (ab)
4

Fab

Fv

.

所 迷 的方 法 , 其

, 迷 的羊 克 隆抗 休 力 Fab 所

、

如枝 利 要 求 2 所 迷 的 方 法 , 叱 所 迷 的祥 品未 自 于 冉 矣 其

或 人矣 。
、

一科 苟 物 組 合 物 ,其 包 含 如枝 利 要 求

、、

或

所迷

羊 克 隆 抗 休 或 其 在 釣 芋 上可接 受 的 盎 。
0、

一科 鈣 物 組 合 物 ,其 包 含 一神 或 多 神 迭 自 于 如 下 一組 羊 克
柴 交瘤 匆胞 株
T

隆 抗 休 的 、 其 釣 孚 上可接 受 的 盎

山
(

所 戶 生 的羊 克 隆 抗 休 , 其
00

, 交 瘤 匆胞 株 染
, 交瘤 細 胞 染

9 的保 藏 考 是

) 染 交 瘤 匆胞 株
D 的保 藏 于 是
染 交 瘤 匆胞 株

D 所 戶 生 的羊 克 隆 抗 休 , 其
T

株
胞株

0

1

所 戶 生 的羊 克 隆 抗 休 , 其
T

, 交瘤 匆 染

的保 藏 考 是

0

、

如枝 利 要 求

0 所 迷 的 釣 物 組 合 物 , 迸 一步 包 括 其 它 抗 病 其

毒 成 分在 鈣 孕 上可接 受 的 盎 。
、

如枝 利 要 求
Fa b

所 迷 的 釣 物 組 合 物 , 中 , 迷 的羊 克 隆 抗 其 所

休 力 Fab
、

F ab

Fv

一神 防止 或 治 打 由禽 流 感 病 毒 感 染 在 一主休 上 引 友 的 疾 病 的 方 法 , 包 括 向所 迷 的主休 拾 釣 青放 刑 量 的 、 杖 利 要 求 9 所 迷 其
的 鈣 物組合 物 。

、

一神 用 于栓 測 祥 品 中 禽 流 感 病 毒 的組 合 物 ,其 包 括 附 栽 于
、、

固 相底 物 上 的 、 枝 利 要求

或

所 迷 的 羊 克 隆抗 休 。

、

如枝 利 要 求
Fa b F (ab)

所 迷 的組 合 物 , 札 所 迷 的羊 克 隆 抗 休 力 其

Fab
6、

Fv

所 迷 的組 合 物 , 札 所 迷 的羊 克 隆 抗 休 包 其 如杖 利 要 求 含 可 交 重 桂 , 可 交 重 健 含 有 迭 自 于 如 下 一組 的 肢 序 列 咳
E

N

2
E

E

N
N

和

E

DN

0

E

N

E

N

其 迷 的 組 合 物 , 札 所 迷 的 羊 克 隆抗 休 迸 一 如枝 利 要 求 步 包 含 可 交 控 ,核 可 交 枉 含 有 迭 自 于 如 下 一組 的 肢 序 列 DN N E E 和E N4
、

、

如枝 利 要 求

所 迷 的組 合 物 , 札 所 迷 的 固 相 底 物 迭 自 其

于 如 下 一組
、

微 滴 定 板 、 磁 顆 粒 、 肢 乳 顆 粒 和硝 化 仟 堆 素 膜 。
所 迷 的組 合 物 , 札 所 迷 的 固 相 底 物 力 測 其

如杖 利 要 求

試 帝。
所 迷 的 組 合 物 , 札 所 迷 的 測 試 帝具 有 至 其 如杖 利 要 求 少 一測 試 匹 和 一控 制 匹 。
0、

所 迷 的 組 合 物 , 扒 所 迷 的 羊 克 隆抗 休 是 其 如杖 利 要 求 按 如此 方 向 附 看 在 所 迷 固 相 底 物 上 , 能 移 增 加 所 迷 羊 克 隆 抗 休 占 其
、

所 迷 祥 品的 結 合 效 率 。

一神 用 于栓 測 祥 品 中 禽 流 感 病 毒 的裝 置 , 包 括 固相底 物 , 其 咳 固相 底 物 包 括 夏 教 介 分 隔 匡 同 , 叱 一介 或 多 介 所 迷 的 分 隔 匹 其 間 淪 覆 有 如枝 利 要 求 、 、 或 所 迷 的羊 克 隆 抗 休 。
5、

、

如枝 利 要 求

其 所 迷 的裝 置 , 札

一介 或 多 介 所 迷 的分 隔

匡 同 淪 覆有 不 同 于 能 特 弄 性 結 合

亞 型 禽 流 感 病 毒血 凝 素 蛋 白的

所 迷 羊 克 隆抗 休 的 、 鈷 合 試 荊 。

、

如枝 利 要 求
H

所 迷 的裝 置 , 札 所 迷 的 結 合 試 荊 是 能 移 其

特 弄 性 皓合

,或

正型 禽 流 感 病 毒 的 抗 休 。

所 迷 的 裝 置 , 迸 一步 包 括 自 功化 栓 測 裝 置 , 其 如枝 利 要 求 核 自 功化 栓 測 裝 置 能 移 栓 測 所 迷 羊 克 隆 抗 休 勻 H 亞 型 禽 流 感 病 毒 血 凝 素 蛋 白之 同 的 結 合 。
、

、
、

一神栓 測 祥 品 中禽 流 感 病 毒 的 拭 荊 盒 , 包 括 如枝 利 要 求 其
或

、

所 迷 的 、 附 看 于 固 相底 物 上 的羊 克 隆抗 休 和 可栓 測 的 、

被 杯 祀 的 第 二羊 克 隆 抗 休 。
、

如杖 利 要 求

所 迷 的試 刑 盒 , 札 所 迷 的 第 二羊 克 隆 抗 其

休 能 移 特 弄 性地結 合禽 流感 病 毒 。
所 迷 的試 刑 盒 , 札 所 迷 的 第 二羊 克 隆 抗 其 如枝 利 要 求 休 能 移 特 弄 性 地 鈷 合 禽 流 感 病 毒血 凝 素 蛋 白。
、

、

如枝 利 要 求
杖 利要求

所 迷 的試 荊 盒 , 迸 一步 包 括 控 制 杯 准 。 其 所 迷 的 羊 克 隆抗 休 , 于禽 流 感 用

0、

、、

或

疾 病 的 治 行 苟 物 肺 迭 的用 途 。

、

枝 利 要 求 1、 、 1 或

所 迷 的羊 克 隆抗 休 , 于預 防或 用

治 行 禽 流 感 疾 病 的疫 苗 研 制 的用 途 。

、

枝 利 要求 、 、 1 或

所 迷 的羊 克 隆 抗 休 , 于 禽 流 感 用

病 毒血 凝 素 蛋 白模 拙 表位 肢 篩 迭 的用 途 。

、

枝 利 要求

所 茨得 的模 拙表位 肢 用 于 制 各預 防 禽 流 感 疾 病

的疫 苗 的用 途 , 于制 各禽 流 感 疾 病 珍 晰試 刑 盒 的用 途 。 用
、

力

E

一神 能 特 弄 性 鈷 合 0 D N s 31 3

羊 克 隆 抗 休 的短 肢 包 含 氨基 酸 序 列

、

枝 利 要 求 6 所 迷 短 肢 及 其保 守 性 奕 弄 休 或 活 性 片 段 或 美 似

物 , 于 制 各預 防 禽 流 感 疾 病 的 疫 苗 以 及 制 各 禽 流 感 疾 病 珍 析 試 荊 用

INTERNATIONAL SEARCH REPORT
A . CLASSIFICATION OF SUBJECT MATTER

International application No.

PCT/CN2008/001153

See extra sheet According to Inte ational Patent Classification (IPC) or to both national classification and IPC
B.

FIELDS SEARCHED

Minimum documentation searched (classification system followed b y classif cation symbols)

IPC: C07K; C12N; GOlN; A61K; A61P

Electronic data base consulted during the international search (name o f data base and, where practicable, search terms used)

CPRS; CNKI; WPI; EPODOC; PAJ; MEDLJNE and keywords: avian influenza, virus, H5, H5N1, haemagglutinin, HA, monoclonal antibody, mAb etc. EMBL; GenBank:
C.

SEQ ID NOs: 1-46.

DOCUMENTS CONSIDERED T O BE RELEVANT Citation of document, with 而dication, where approp ate, of 山e relevant passages

Category*

「

Relevant to claim No.

TAPRYAL S . e t al. 'anti-rhGM-CSF heavy chain variable domain' 0 7 Feb. 2006(07.02.2006). GenBank[online]. [retrieved o n 0 9 Sep. 2008(09.09.2008)]. Retrieved from: NCBI, Bethesda, USA. GenBank accession no. ABC94918 amino acid sequence and features o f the sequence

1, 8-13

Further documents are listed in 山e continuation of Box C .
Special categories of cited documents:

See patent family annex.

"T"

"A" "E" "L"

document defining the general state of the art which is not considered to b e of pai cular relevance earlier application or patent but published o n or after the international 血 ing date
document which may throw doubts on priority claim (S) or which i s cited to establish the publication date o f another citation or o小 er special reason (as spec 而ed)
doc ment refei 行 ng to an o 圳 d 沽 closure, use, exhibition or o山er means

later document published after the international filing date or priority date and not in conflict with the application but cited to understand the principle o r theory underlying the invention document o f particular relevance; the claimed invention cannot b e considered novel or cannot be considered to involve an inventive step when the document is taken alone document of particular relevance; the claimed invention cannot b e considered to involve an inventive step when the document is combined with one or more other such documents, such combination being obvious to a person skilled in the art

"X"

"Y"

"" "P"

document published prior t o the international filing date but later than the priority date claimed

" & "document member o f the same patent family Date of mailing of the international search report

Date of the actual completion o f the international search

0 9 Sep. 2008(09.09.2008)
ame and m a山ng address o f the I SA/CN I e Sta 他 Intellectual Property O而ce, 山e P.China R. 6 Xitucheng Rd., Jimen Bridge, Haidian District, Beijing, China 100088 Facsimile No. 86-10-62019451

25 Sep. 2008 (25.09.2008)
Au 山orized officer

LIN, J 士吋
Telephone No. (86-10)624 1 1095

Form PCT/ISA/210 (second sheet) (April 2007)

INTERNATIONAL SEARCH REPORT
C (Continuation). Category* DOCUMENTS CONSIDERED TO BE RELEVANT

International application No.

PCT/CN2008/001153

Citation of document, with 而dication, where appropriate, o f 山e relevant passages

Relevant to claim No.

C N 1814623 A (UNIV XIAMEN) 0 9 Aug. 2006(09.08.2006) X A claims 1-14, examples 1-7 o f the description the whole document

16-18, 29-39, 43-45, 48-63
1-15, 19-28, 40-42,

46-47, 64-65
C N 1978634A(UNIV X A MID-CHINA AGRIC) 13 Jun. 2007(13.06.2007)

claims 1-7, examples 1-12 o f the desc ption and figure 1

「

16-18, 29-39, 4 3刁5 , 48-63
1-15, 19-28, 40斗 2 , 46-47, 6小 65

山e whole document

W O 2007089753 A 2 (HX DIAGNOSTICS INC) 0 9 Aug. 2007(09.08.2007) PX PA claims 1-64

16-18, 29-39, 43-45, 48-63
1-15, 19-28, 4 0斗 2, 46-47, 6小 65

山e whole document

E

C N 101220097 A (UNTV XIAMEN) 16 JuI. 2008(16.07.2008) claims 1-61, examples 1-20 o f the description

16-18, 29-39, 43-45, 48-63

A

QIN, A . e t 刨 . Development and application o f monoclon 圳 antibodies spe 何 c J. to hemagglutinin o f subtype H 5 and H 9 avian influenza virus. Chinese Journal o f Preventive Vete nary Medic 而e . May 2003, vol. 25, No. 3 , pages 161-163, ISSN 1008-0589

1-65

「

山e whole docu

ent

cited in the application A CAO, Z . e t 出. F「 eparation and characterization o f monoclon 圳 antibody specific t o hemagglutinin o f subtype H 5 avian influenza virus. Acta Lab Anim Sci Sin. December 200 七 vol. 12, No. 4 , pages 197-199, ISSN 1005 斗 847

1-65

山e whole document

A

LUO, H . F. e t al. Characterization o f broad-spectrum neutralization monoclonal antibody against haemagglutinin o f H 5 subtype avian influenza virus. CHINESE JOURNAL O F VIROLOGY. March 2007, vol. 23, No. 2 , pages 85-90, ISSN 1000-8721

1-65

山e whole document

Form PCT/ISA/210 (continuation of second sheet ) (April 2007)

INTERNATIONAL SEARCH REPORT
Box No. π

International application No.

PCT/CN2008/001153
Observations here cert 証 cl 缸 ms were found unsearchable (Cont 血 uation of item 2 of rst sheet)

This inte ational search report has not been established in respect o f certain claims under Article 17(2)(a) for 山e following reasons:
1.

Claims Nos.: 4 3 because 山ey rela 比 to subject

atter not requ ed to b e searched by this Au 山ority, namely:

See e x什 a sheet

2. □

Claims Nos.: because 山ey relate to parts of 山e 而 temation 刨 application 山at do not comply with the prescribed requirements to such an extent 山at no mean 而域 l 五ternation 組 search can be carried out, spe 山 cally:

3. □

Claims Nos.: because 山ey are dependent claims and are not drafted in accordance with 山e second and 山ird sentences of Rule 6.4(a).

Box No. B

Observa ons where unity of 五ven廿on 杞 lack 五g (Cont

a on of item 3 of first sheet)
application, as follows:

This 止 ternational Search 而gAu 山ority found multiple

面 ventions 而 山is in 他 rnational

See e x仟 a sheet

1 . LJ

As all required additional search fees were timely paid by the applicant, this international search report covers all searchable claims. As all searchable claims could b e searched without effort justifying an additional fees, this Authority did not invite payment of any additional fee.

2. 1

3.

As only some of the required additional search fees were timely paid by the applicant, this international search report covers only those clai s for which fees were paid, specifically claims Nos.: No required additional search fees were timely paid b y the applicant. Consequently, this international search report is restricted to the invention first mentioned in the claims; it is covered b y claims Nos.:

4.

Remark on protest The additional search fees were accompanied b y the applicant's protest and, where applicable, the payment of a protest fee.
h additional search fees were accompanied by the applicant's protest but the applicable protest fee was not paid within the time limit specified in the invitation. No protest accompanied the payment of additional search fees.

Form PC

SA/2 10 (continuation o f first sheet (2)) (April 2007)

INTERNATIONAL SEARCH REPORT

Inte ational application No.

PCT/CN2008/001153

Continuation of:

Box No. II

Although claim 4 3 relates to methods for treatment of the human or animal body by therapy (see Rules 39.1(iv), 67.1(iv)), the search of claim 4 3 is based on the subject-matter that could reasonably be expected to be amended, namely "the use of pharmaceutical composition of claim 39 for the manufacturing a medicament for the prevention or treatment of diseases associated by avian influenza virus infection".

Continuation of:

Box No. Ill

This Authority considers that there are 13 groups of inventions covered by the claims indicated as follows: 1: claims 1-63 (all partly), directed to the monoclonal antibodies produced by hybridoma cell line 8G9, monoclonal anitibodies capable of blocking at least 50% of the hemagglutinin binding activity of the 8G9 monoclonal antibodies, ucleic acid molecules encoding the 8G9 monoclonal antibodies, expression vectors comprising the nucleic acid molecules, host cells containing the expression vectors, compositions, apparatuses and kits comprising the 8G9 monoclonal antibodies, and the uses of the 8G9 monoclonal antibodies;
2 : claims 1-63 (all partly), directed to the monoclonal antibodies produced b y hybridoma cell line 13D4, onoclonal antibodies capable of blocking at least 50% of the hemagglutinin binding activity of the 13D4 monoclonal antibodies, nucleic acid molecules encoding the 13D4 monoclonal antibodies, expression vectors omprising the nucleic acid molecules, host cells containing the expression vectors, compositions, apparatuses and its comprising the 13D4 monoclonal antibodies, and the uses of the 13D4 monoclonal antibodies; 3 : claims 1-63 (all partly), directed t o the monoclonal antibodies produced b y hybridoma cell line 20A11,

onoclonal antibodies capable of blocking at least 50% of the hemagglutinin binding activity of the 20Al 1 onoclonal antibodies, nucleic acid molecules encoding the 20A 1 1 monoclonal antibodies, expression vectors omprising the nucleic acid molecules, host cells containing the expression vectors, compositions, apparatuses and its comprising the 20A11 monoclonal antibodies, and the uses of the 20A11 monoclonal antibodies;
4 : claims 64-65 (all partly), directed to a short peptide capable of binding to 8G9 monoclonal antibodies and uses thereof, the said short peptide has the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 31;
5 : claims 64-65 (all partly), directed to a short peptide capable o f binding to 8G9 monoclonal antibodies and uses thereof, the said short peptide has the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 32;

6 : claims 64-65 (all partly), directed to a short peptide capable of binding t o 8G9 monoclonal antibodies and uses

thereof, the said short peptide has the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 33;
7 : claims 64-65 (all partly), directed t o a short peptide capable of binding to 8G9 monoclonal antibodies and uses

thereof, the said short peptide has the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 34;
8 : claims 64-65 (all partly), directed to a short peptide capable of binding t o 8G9 monoclonal antibodies and uses hereof, the said short peptide has the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 35;

9 : claims 64-65 (all partly), directed to a short peptide capable of binding t o 8G9 monoclonal antibodies and uses thereof, the said short peptide has the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 36;
10: claims 64-65 (all partly), directed to a short peptide capable of binding t o 8G9 monoclonal antibodies and uses

thereof, the said short peptide has the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 37;

11: claims 64-65 (all partly), directed to a short peptide capable of binding to 8G9 monoclonal antibodies and uses thereof, the said short peptide has the amino acid sequence as shown in SEQ ED NO: 38;
or

PCT/ISA/210 (extra sheet) (Ap 12007)

「

INTERNATIONAL SEARCH REPORT

International appl icat ion N o .

PCT/CN2008/001153

12: claims 64-65 (all partly), directed to a short peptide capable o f binding to 8G9 monoclonal antibodies and use

thereof, the said short peptide has the amino acid sequence a s shown in SEQ ID NO: 39;
13: claims 64-65 (all partly), directed to a short peptide capable o f binding t o 8G9 monoclonal antibodies and uses

thereof, the said short peptide has the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 40; The reasons for which the inventions are not s o linked as to form a single general inventive concept, a s required b Rule 13.1 PCT, are as follows: the common o r corresponding technical feature o f inventions 1-3 is monoclonal antibodies specifically binding to hemagglutinin o f avian influenza virus subtype H5, however, the said technical feature has been disclosed b y D 2 (see claims 1-14 of D2); the special technical feature o f each o f the inventions 4-13
is the sequence structure o f the said short peptide but rather than the 8G9 monoclonal antibodies binding t o the said

short peptide; while there is a common property (i.e. binding to 8G9 monoclonal antibodies) among the short peptides claimed b y inventions 4-13, the said short peptides d o not share a significant structural element that is essential t o the ommon property, thus, the inventions 4-13 d o not share the common o r corresponding technical feature. In conclusion, the 13 groups o f claims are not linked b y common o r corresponding special technical features and define
13 groups o f different inventions not linked b y a single general inventive concept. The application, hence does not

meet the requirements of unity o f invention as defined in Rules 13.1 and 13.2 PCT.

CLASSIFICATION OF SUBJECT MATTER
C07K 16/18 (2006.01) i C07K 16/46 (2006.01) i C12N 5/12 (2006.01) i C12N 15/13 (2006.01) i C12N 15/63 (2006.01) i GOlN 33/53 (2006.01) i GOlN 33/569 (2006.01) i A61K 39/395 (2006.01) i C07K 7/06 (2006.01) i C07K 7/08 (2006.01) i A61K 38/08 (2006.01) i A61K 38/10 (2006.01) i A61P 31/16 (2006.01) i C07K 14/11 (2006.01) n

Form PCT/ISA/210 (extra sheet) (April 2007)

INTERNATIONAL SEARCH REPORT Information on patent family members
Patent Documents referred 山 the Report

International application No.

PCT/CN2008/001153
Publication Date Patent Family I卜blication Date

CN 1814623 A

09.08.2006

None

CN 1978634 A

13.06.2007

None

W O 2007089753 A 2

09.08.2007

None

CN 101220097 A

16.07.2008

None

Form PCT/ISA/210 (patent family annex) (April 2007)

固 阮 申清 弓

匡 阮栓 索 掘告

PCT7CN2008/001153

. 題 的分 癸 主
參 几 附加 頁 按 照 因 阮 寺 利 分癸表 (ipc) 或 者 同 吋按 照 因家 分 癸 和 IPC 丙 神 分 癸
B

.索領域 栓
IPC: C07K; C12N; GOlN; A61K; A61P

栓 索 的最 低 限度 文 猷 林 明分芙 系 統 和 分芙 弓)

包 含 在 栓 索 領 域 中 的除最 低 限 度 文 袱 以 外 的栓 索 文 猷

在 因 阮 栓 索 吋查 廁 的 屯 于教 据 倖 (數 据 倖 的名林 和 使 用 的栓 索 祠 ( 如 使 用 ) ) CPRS; CNKI 和 夫 鍵 祠 , 流 感 病 毒 H5, H5N1, 血 凝 素 , HA, 草 克 隆 抗 休 等 ; 禽 WPI; EPODOC; PAJ; MEDLINE 和 夫 鍵 祠 : avian influenza, virus, H5, H5N1, haemagglutinin, HA, monoclonal

antibody, mAb 等 ; EMBL; GenBank: SEQ ID NOs: 1-46.
C. 相 夫 文 件

癸

型

引用 文 件
TAPRYAL, S .等

必要肘

指 明相 夫 段 落

相 夫 的杖 利 要 求

X

anti-rhGM-CSF heavy chain variable domain'

, 07.2

1 , 8-13

月 2006(07.02 . 2006), GenBa 坷 耿 1], [
2008(09.09.2008)],
粒 索 自: NCBI

索 日 0 9 .月 期 9

B e山e妃 a , USA. GenBank 登 秉 青

ABC94918
氨 基 酸 序 列 和 序 列特 征

C N 1814623 A ( 廈 鬥大 羊 ) 09.8 月 2006(09.08.2006) X
杖 利 要 求 1-14, 稅 明弔突 施 例 1-7

16-18, 29-39, 4 3斗 5 , 48-63 1-15, 19-28, 4 0 斗 2 , 46-47, 64-65

A

全文

其余文件 在

柱 的鎂 頁 中列 出 。

兄 同族 寺 利 附件 。
'T"
在 申清 日 仇 先枚 日 后 公 布 勻 申清 不相抵蝕 或 之
理解友 明之理 冶或 原 理 的在后 文件
革狙 考 慮 咳文 件

引用 文 件 的具 休 芙 型 "A" 臥力不特別相夫的表示 了現有技木一般 杰 的文件

但力了

"E"

。

。 。

"X" 特 別 相 夫 的文 件
或 力碗 定 另 一篇

臥定 要 求 保 扣 的

"L" 可 能 肘 仇 先杖 要 求 枸 成 杯 疑 的文 件
用 的文 件

友 明不 是 新 穎 的或 不 具 有 刨 造 性

引用 文 件 的公 布 日而 引用 的或 者 因其 他 特 殊 理 由而 引
"O" 涉 及 口共 公 升 、使 用 、展 捷 或 其 他 方 式 公 升 的文 件
公 布 日 于 因阮 申清 日 退 于所 要 求 的仇 先杖 目的文件 先 但

"Y" 特 別 相 夫 的文 件

圭 咳 文 件 占另 一篇 或 者 多 篇 咳 英 文 件

拮 合 井 且 迭 神 拮 合 肘 于本 領 域 技 木人 貝 力 昱 而 易 兄 吋

要 求 保 扣 的友 明 不 具 有 刨 造 性 "&" 同族 寺 利 的文 件

因 防栓 索 奕 阮 完 成 的 日期

因 阮 栓 索 扳 告 卹 寄 日期

09.9 月 2008(09.09.2008)

25.9 月 2008 (25.09.2008)
受 杖 官貝

中竿 人 民 共和 因 因家
因
侍其 骨

洪 芒 杖 局(ISA/CN)

京 市 海 碇 匡 莿 仁 析 西 土城 路 6 青 100088

林 峻凱
屯 活 骨碑

(86-10)62019451

(86-10) 62411095

PCMS A/2 10 表 (第 2 頁 ) (2008 年 7 月)

因 阮 申清 弓

回阮栓 索 振 告

PCT/CN2008/001153

C ( 縷 ). 相 夫 文 件
癸
型

引用 文 件

必要吋

指 明相 夫 段 落

相 夫 的杖 利 要 求

C N 1978634 A (竿 中衣 血 大 羊 ) 13 . 2007( 13 .06 . 6月 2007) X
杖 利 要 求 1-7, 稅 明 弔安施 例 1-12 和 團 1

16-18, 29-39, 4 3斗 5 , 48-63

A

全文

1-15, 19-28, 40 斗 2 , 4 6斗 7 , 64-65

W O 2007089753 A 2 (HX DIAGNOSTICS INC) 09.8 月 2007(09.08.2007) PX
杖 利 要 求 1-64

16-18, 29-39, 4 3斗 5 48-63

PA

全文

1-15

19-28, 40-42, 46-47, 64-65

E

C N 101220097 A ( 廈 何 大 羊 ) 16.7 月 2008(16.07.2008)
杖 利 要 求 1-61, 槐 明弔突 施 例 1-20

16-18, 29-39, 4 3斗 5 , 48-63

A

秦 愛 建 等 抗 禽 流 感 病 毒 H 5 和 H 9 亞 型 血 凝 素 特 昇 性 革 克 隆 抗 休 的研

1-65

制及 匝用 申因預 防 嘗匡羊扳 , 5 月 2003, 第 25 卷 , 第 3 期 , 第 161-163
頁 , ISSN 1008-0589
全文

在 申清 中引征

A

曹振等

抗 H5N1 立型 禽 流 感 病 毒 血 凝 素 草 克 隆 抗 休 的制 各 及 鑒 定

1-65

中 固 突 啦功物 羊 扳 , 12 月 2004, 第 12 卷 , 第 4 期 , 第 197-199 頁 ,

ISSN 1005 斗 847
全文

A

步 海 峰等

一株 抗 H 5 皿 型 禽 流 感 病 毒 血 凝 素 蛋 白車 克 隆 抗 休 的仁 槽
1000-8721
全文

1-65

中和 活 性 病 毒 學 扳 , 3 月 2007, 第 2 3 卷 , 第 2 期 , 第 85-90 頁 , ISSN

PCT/ISA/210 表 (第 2 頁 縷 頁 ) (2008 年 7 月 )

因阮 申清 弓

回阮 栓 索 扳 告
第 II 桂
芙 干某 些 杖 利 要 求 不 能 作 力栓 索 主 題 的意 兄 (接 第

PCT/CN2008/001153
1 頁第 2 項)

按 集 釣 17(2)(a) 肘 某 些 杖 利 要 求 未 作 固 阮栓 索 扳 告 的理 由如 下 :

1. 凶

叔 利要 求 : 43

因力 它們 涉 及 到 不 要 求 本 因阮 栓 索 革位 迸 行 栓 索 的主 題

即

尺 管 杖 利 要 求 4 3 涉 及 肘 人 休 或 功物 休 治 汙 的治 斤方 法 ( 參 兄 PCT 突 施 細 則 39.1(iv), 67.1(iv)) 但 杖 利 要
求 4 3 的栓 索 是 基 于可 能 被 合 理 預 期修 改 的主 題
感 病 毒 感 染 所 致 疾 病 的釣 物 中 的匝用
。

即

杖 利 要 求 39 所 迷 的釣 物 組 合 物 在 制各 預 防 或 治 汙 禽 流

2. D

杖 利要求

因力 它們 涉 及 到 匡 阮 申清 中不符 合 規 定 的要 求 的部 分
具 休 地晚

以 致 不 能迸 行任 何 有 意 叉 的因阮栓 索

3. D
第

杖 利要 求

因力 它們 是 伙 厲 叔 利 要 求

井 且 沒 有 按 照 鈕 j 6.4(a) 第 2 旬 和 第 3 旬 的要 求 撰 丐

m柱

芙 干缺 乏 岌 明卓 — 吋 的意 几 (接 第 1 頁 第 3 項 ) 性
即

本 因阮 栓 索 草 位 在 咳 因阮 申清 中友 現 多 碩 友 明 參 凡 附加 頁

i. D
2. 凶

由于 申清 人 按 吋繳 鈉 了被 要 求 繳 鈉 的全 部 附 加 栓 索 鞍

本 因 阮 栓 索 扳 告 計 肘 全 部 可作 栓 索 的杖 利 要 求 。

由于元 需付 出有 理 由要 求 附加 黃 的芳 功 即 能 肘 全 部 可栓 索 的杖 利 要 求 迸 行 栓 索
通 知 繳 鈉 任 何 附加 憩 。

本 回阮 栓 索 車 位 未

3. D

由于 申清 人 仗 按 吋繳 鈉 了部 分 被 要 求 繳 納 的 附加 栓 索 蝨
具 休 地兢

本 匡 阮 栓 索 扳 告 仗 涉 及 已墩 寅 的那 些 杖 利 要 求

是杖 利要求

4. D

申清 人 未 按 吋繳 鈉 被 要 求 的 附 加 栓 索 強 。 因此 , 因 阮 栓 索 扳 吉 仗 涉 及 杖 利 要 求 中首吹提 及 的友 明 本
包 含 咳 友 明 的杖 利 要 求 是

芙 千昇 伙 的瑰 明

.D D

申清 人 墩 鈉 了附 加 栓 索 鼓 申清 人 繳 鈉 了附 加 栓 索 蝨

同 吋提 交 了昇 汶 弔 同 吋提 交 了昇 汶 弔

墩 鈉 了昇 汶 鼓 。

□

但 未繳 鈉 昇 以 憩

繳 鈉 附加 栓 索 蕪 吋禾 提 交 昇 汶 弔 。

PCT/ISA 210 表 (第 1 頁 的挨 頁 (2)) (2008 年 7 月 )

因 阮 申清 青

固阮粒 索 振 告
鍥

PCT/CN2008/001153

第 Ill 桂
本 因 阮 車 位 臥 力 杖 利 要 求 弔包 括 13 狙 友 明 , 如 下 所 示 :
1 : 杖 利 要 求 1-63 ( 部 分 ) , 涉 及 朵 交 瘤 細 胞 株 8G9 所 芒 生 的卓 克 隆 抗 休

能 阻 斷 至 少 50% 的 8G9 革 克

隆 抗 休 勻血 凝 素 蛋 白結 合 活 性 的革 克 隆 抗 休 貌 碑 8G9 革 克 隆 抗 休 的核 酸 分 于 包 含 咳 核 酸 分 于 的表 迭 裁 休

包 含 咳 表 迭 裁 休 的宿 主 細 胞 包 含 8G9 革 克 隆 抗 休 的組 合 物 、 置 和 拭 荊 盒 以 及 咳 8G9 草 克 隆 抗 休 的匝用 ; 裝

2 : 杖 利 要 求 1-63 ( 部 分 ) , 涉 及 朵 交 瘤 細 胞 株 13D4 所 芹 生 的革 克 隆 抗 休

能 阻 斷 至 少 50% 的 13D4 羊

克 隆 抗 休 勻血 凝 素 蛋 白結 合 活 性 的革 克 隆 抗 休 貌 罔 13D4 革 克 隆 抗 休 的核 酸 分 于 包 含 咳 核 酸 分 于 的表 迭 載

休

包 含 咳 表 迭 載 休 的宿 主 細 胞

包 含 13D4 草 克 隆 抗 休 的組 合 物 、裝 置 和 拭 荊 盒

以 及 咳 13D4 卓 克 隆 抗 休

的匝用
3 , 利 要 求 1-63 ( 部 分 ) , 涉 及 朵 交 瘤 細 胞 株 20Al 1 所 芒 生 的革 克 隆 抗 休 杖
能 阻 斷 至少 50% 的 2OA 1 1

革 克 隆 抗 休 勻 血 凝 素 蛋 白拮 合 活 性 的革 克 隆 抗 休
迭載休
包 含 咳 表 迭 載 休 的宿 主細 胞

縮 碑 20Al 1 革 克 隆 抗 休 的核 酸 分 于

包 含 咳 核 酸 分 于 的表
以 及 咳 20Al 1 革 克

包 含 20Al 1 草 克 隆 抗 休 的組 合 物 、裝 貴 和 拭 荊 盒

隆 抗 休 的匝用

4 : 杖 利 要 求 64-65 ( 部 分 ) , 涉 及 具 有 如 SEQ ID NO: 3 1 所 示 的氨 基 酸 序 列 的 能 特 昇 性 拮 合 8G9 草 克 隆
抗 休 的短 肚 及 其 匝用

5 : 杖 利 要 求 必 -65 ( 部 分 ) , 涉 及 具 有 如 SEQ ID NO: 32 所 示 的氨 基 酸 序 列 的能 特 昇 性 笙 合 8G9 革 克 隆
抗 休 的短 肢 及 其 匝用

6 , 利 要 求 64-65 ( 部 分 ) , 涉 及 具 有 如 SEQ ID NO: 33 所 示 的氨 基 酸 序 列 的 能 特 昇 性 結 合 8G9 草 克 隆 杖
抗 休 的短 肢 及 其 座 用

7 , 利 要 求 64-65 ( 部 分 ) , 涉 及 具 有 如 SEQ ID NO: 34 所 示 的氨 基 酸 序 列 的能 特 昇 性 結 合 8G9 革 克 隆 杖
抗 休 的短 肚 及 其 匝用

8 : 杖 利 要 求 必 -65 ( 部 分 ) , 涉 及 具 有 如 SEQ ID NO: 35 所 示 的氨 基 酸 序 列 的能 特 昇 性 結 合 8G9 革 克 隆
抗 休 的短 肋及 其匝用 杖 9 , 利 要 求 64-65 ( 部 分 ) , 涉 及 具 有 如 SEQ ID NO: 36 所 示 的氨 基 酸 序 列 的 能 特 昇 性 鈷 合 8G9 草 克 隆 抗 休 的短 肪 及 其 匝 用

10: 杖 利 要 求 64-65 ( 部 分 ) , 涉 及 具 有 如 SEQ
隆 抗 休 的短 狀 及 其 匝用

NO: 37 所 示 的氨 基 酸 序 列 的 能 特 昇 性 結 合 8G9 革 克

11: 杖 利 要 求 64-65 ( 部 分 ) , 涉 及 具 有 如 SEQIDNO:
隆 抗 休 的短 肢 及 其 匝用

3 8 所 示 的氨 基 酸 序 列 的 能 特 昇 性 拮 合 8G9 革 克

12: 杖 利 要 求 64-65 ( 部 分 ) , 涉 及 具 有 如 SEQIDNO:
隆 抗 休 的短 肪 及 其 匝用
13 , 利 要 求 必 -65 ( 部 分 ) , 涉 及 具 有 如 SEQIDNO: 杖

39 所 示 的氨 基 酸 序 列 的 能特 昇 性 拮 合 8G9 羊 克

4 0 所 示 的氨 基 酸 序 列 的 能 特 昇 性 結 合 8G9 草 克

隆 抗 休 的短 肋及 其 匝用

迭 些 友 明不 能 相 互 夫 睽

伙 而 不 能 形 成 一介 忠 的友 明枸 思

1的 因此 不 符 合 PCT 突 施 細 則 13 . 規 定

理由

如下

友 明 1-3 之 同相 同或 相 位 的技 木特 征 是 特 昇 性 結 合 H 5 正 型 禽 流 感 病 毒 血 凝 素 蛋 白的革 克 隆 抗 休

然而

咳 技 木 特 征 已 力 文 猷 D 2 所 公 升 ( 參 見 D 2 的杖 利 要 求 1-14) ; 友 明 4-13 各 自的特 定 技 木 特 征 在 于所 迷 短
PCT/ISA/210 表 ( 附加 頁 ) (2008 年 7 月)

因阮 申清 弓

匡 阮粒 索 振 告

PCT/CN2008/001153
即

肋 的序 列 拮 枸 而 非 它們 所 拮 合 的 8G9 草 克 隆 抗 休 呈 然 友 明 4-13 所 清 求 保 押 的短 肋之 同具 有 共 同 的特 性
拮 合 8G9 革 克 隆 抗 休

但 不 具 有 咳 共 同特 性 所 必 需 的昱 著 拮 枸 羊 元

因此

友 明 4-13 之 河 沒 有 相 同或 相

匝 的技 木 特 征 。 忘 之

迭 13 組 杖 利 要 求 沒 有 通 泣 相 同或 者 相 匝 的特 定 技 木 特 征 相 互 芙 瑛

其 定 又 了 13 坦 不

同 的友 明 而迭 些 友 明沒 有 通 迂 一介 忘 的友 明枸 思 相 互 瑕 系 。因此 本 申清 不 具 各 PCT 寞 施 紐 則 13.1 和 13.2
規 定 的友 明革 一性 。

主題 的分癸
C07K 16/18 (2006.01) i C07K 16/46 (2006.01) i C12N 5/12 (2006.01) i C12N 15/13 (2006.01) i C12N 15/63 (2006.01) i GOlN 33/53 (2006.01) i GOlN 33/569 (2006.01) i A61K 39/395 (2006.01) i C07K 7/06 (2006.01) i C07K 7/08 (2006.01) i A61K 38/08 (2006.01) i A61K 38/10 (2006.01) i A61P 31/16 (2006.01) i C07K 14/11 (2006.01) n

PCT/ISA/210 表 ( 附加 頁 ) (2008 年 7 月)

回 陌叫 . 索 掘 告
夫 于 同族 寺 利 的信 息

因 阮 申清 弓

PCT/CN2008/001153
同族 寺 利
公布 日 期

栓 索 扳 告 中 引用 的

公 布 日期

古利 文 件

CN 1814623 A

09.08.2006

元 元

C N 1978634 A

13.06.2007

WO 2007089753 A2

09.08.2007

元

CN 101220097 A

16.07.2008

元

PCT/ISA/210 表 ( 同族 寺 利 附

) (2008 年 7 月 )



Download Citation


Sign in to the Lens

Feedback