{"search_session":{},"preferences":{"l":"en","queryLanguage":"en"},"patentId":"047-294-569-900-858","frontPageModel":{"patentViewModel":{"ref":{"entityRefId":"047-294-569-900-858","entityRefType":"PATENT"},"entityMetadata":{"linkedIds":{"empty":true},"tags":[],"collections":[{"id":22721,"type":"PATENT","title":"Citing CNRS publications","description":"Patent documents citing scholarly work of CNRS","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":129822,"tags":[],"user":{"id":233682368,"username":"tech","firstName":"The Lens","lastName":"Team","created":"2017-08-06T20:11:49.000Z","displayName":"The Lens Team","profilePictureKey":"lens/users/15eac2a0-031d-4923-92cb-a162e1cb2bbb/profile-picture","preferences":"{\"beta\":true}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2017-08-07T04:38:15Z","updated":"2017-08-07T04:38:15Z","lastEventDate":"2017-08-07T04:38:15Z"},{"id":22732,"type":"PATENT","title":"Citing UC Berkeley publications","description":"Patent documents citing scholarly work of UC Berkeley","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":71443,"tags":[],"user":{"id":233682368,"username":"tech","firstName":"The Lens","lastName":"Team","created":"2017-08-06T20:11:49.000Z","displayName":"The Lens Team","profilePictureKey":"lens/users/15eac2a0-031d-4923-92cb-a162e1cb2bbb/profile-picture","preferences":"{\"beta\":true}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2017-08-07T04:43:57Z","updated":"2017-08-07T04:43:57Z","lastEventDate":"2017-08-07T04:43:57Z"},{"id":22739,"type":"PATENT","title":"Citing KU Leuven publications","description":"Patent documents citing scholarly work of KU Leuven","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":30113,"tags":[],"user":{"id":233682368,"username":"tech","firstName":"The Lens","lastName":"Team","created":"2017-08-06T20:11:49.000Z","displayName":"The Lens Team","profilePictureKey":"lens/users/15eac2a0-031d-4923-92cb-a162e1cb2bbb/profile-picture","preferences":"{\"beta\":true}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2017-08-07T04:46:44Z","updated":"2017-08-07T04:46:44Z","lastEventDate":"2017-08-07T04:46:44Z"},{"id":22745,"type":"PATENT","title":"Citing Washington Univ St Louis publications","description":"Patent documents citing scholarly work of Washington Univ St Louis","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":53436,"tags":[],"user":{"id":233682368,"username":"tech","firstName":"The Lens","lastName":"Team","created":"2017-08-06T20:11:49.000Z","displayName":"The Lens Team","profilePictureKey":"lens/users/15eac2a0-031d-4923-92cb-a162e1cb2bbb/profile-picture","preferences":"{\"beta\":true}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2017-08-07T04:48:14Z","updated":"2017-08-07T04:48:14Z","lastEventDate":"2017-08-07T04:48:14Z"},{"id":22756,"type":"PATENT","title":"Citing SUNYS publications","description":"Patent documents citing scholarly work of SUNYS","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":51828,"tags":[],"user":{"id":233682368,"username":"tech","firstName":"The Lens","lastName":"Team","created":"2017-08-06T20:11:49.000Z","displayName":"The Lens Team","profilePictureKey":"lens/users/15eac2a0-031d-4923-92cb-a162e1cb2bbb/profile-picture","preferences":"{\"beta\":true}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2017-08-07T04:52:17Z","updated":"2017-08-07T04:52:17Z","lastEventDate":"2017-08-07T04:52:17Z"},{"id":22766,"type":"PATENT","title":"Citing McGill Univ publications","description":"Patent documents citing scholarly work of McGill Univ","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":33777,"tags":[],"user":{"id":233682368,"username":"tech","firstName":"The Lens","lastName":"Team","created":"2017-08-06T20:11:49.000Z","displayName":"The Lens Team","profilePictureKey":"lens/users/15eac2a0-031d-4923-92cb-a162e1cb2bbb/profile-picture","preferences":"{\"beta\":true}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2017-08-07T04:56:02Z","updated":"2017-08-07T04:56:02Z","lastEventDate":"2017-08-07T04:56:02Z"},{"id":22783,"type":"PATENT","title":"Citing UPMC publications","description":"Patent documents citing scholarly work of UPMC","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":18259,"tags":[],"user":{"id":233682368,"username":"tech","firstName":"The Lens","lastName":"Team","created":"2017-08-06T20:11:49.000Z","displayName":"The Lens Team","profilePictureKey":"lens/users/15eac2a0-031d-4923-92cb-a162e1cb2bbb/profile-picture","preferences":"{\"beta\":true}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2017-08-07T05:03:04Z","updated":"2017-08-07T05:03:04Z","lastEventDate":"2017-08-07T05:03:04Z"},{"id":22794,"type":"PATENT","title":"Citing LBNL publications","description":"Patent documents citing scholarly work of LBNL","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":22220,"tags":[],"user":{"id":233682368,"username":"tech","firstName":"The Lens","lastName":"Team","created":"2017-08-06T20:11:49.000Z","displayName":"The Lens Team","profilePictureKey":"lens/users/15eac2a0-031d-4923-92cb-a162e1cb2bbb/profile-picture","preferences":"{\"beta\":true}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2017-08-07T05:08:27Z","updated":"2017-08-07T05:08:27Z","lastEventDate":"2017-08-07T05:08:27Z"},{"id":22802,"type":"PATENT","title":"Citing UC System publications","description":"Patent documents citing scholarly work of UC System","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":266608,"tags":[],"user":{"id":233682368,"username":"tech","firstName":"The Lens","lastName":"Team","created":"2017-08-06T20:11:49.000Z","displayName":"The Lens Team","profilePictureKey":"lens/users/15eac2a0-031d-4923-92cb-a162e1cb2bbb/profile-picture","preferences":"{\"beta\":true}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2017-08-07T05:10:38Z","updated":"2017-08-07T05:10:38Z","lastEventDate":"2017-08-07T05:10:38Z"},{"id":22805,"type":"PATENT","title":"Citing UC San Francisco publications","description":"Patent documents citing scholarly work of UC San Francisco","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":73241,"tags":[],"user":{"id":233682368,"username":"tech","firstName":"The Lens","lastName":"Team","created":"2017-08-06T20:11:49.000Z","displayName":"The Lens Team","profilePictureKey":"lens/users/15eac2a0-031d-4923-92cb-a162e1cb2bbb/profile-picture","preferences":"{\"beta\":true}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2017-08-07T05:15:33Z","updated":"2017-08-07T05:15:33Z","lastEventDate":"2017-08-07T05:15:33Z"},{"id":22842,"type":"PATENT","title":"Citing Univ Toronto publications","description":"Patent documents citing scholarly work of Univ Toronto","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":65159,"tags":[],"user":{"id":233682368,"username":"tech","firstName":"The Lens","lastName":"Team","created":"2017-08-06T20:11:49.000Z","displayName":"The Lens Team","profilePictureKey":"lens/users/15eac2a0-031d-4923-92cb-a162e1cb2bbb/profile-picture","preferences":"{\"beta\":true}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2017-08-07T05:27:52Z","updated":"2017-08-07T05:27:52Z","lastEventDate":"2017-08-07T05:27:52Z"},{"id":22848,"type":"PATENT","title":"Citing Stanford Univ publications","description":"Patent documents citing scholarly work of Stanford Univ","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":108345,"tags":[],"user":{"id":233682368,"username":"tech","firstName":"The Lens","lastName":"Team","created":"2017-08-06T20:11:49.000Z","displayName":"The Lens Team","profilePictureKey":"lens/users/15eac2a0-031d-4923-92cb-a162e1cb2bbb/profile-picture","preferences":"{\"beta\":true}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2017-08-07T05:31:21Z","updated":"2017-08-07T05:31:21Z","lastEventDate":"2017-08-07T05:31:21Z"},{"id":22856,"type":"PATENT","title":"Citing NIH publications","description":"Patent documents citing scholarly work of NIH","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":151649,"tags":[],"user":{"id":233682368,"username":"tech","firstName":"The Lens","lastName":"Team","created":"2017-08-06T20:11:49.000Z","displayName":"The Lens Team","profilePictureKey":"lens/users/15eac2a0-031d-4923-92cb-a162e1cb2bbb/profile-picture","preferences":"{\"beta\":true}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2017-08-07T05:35:15Z","updated":"2017-08-07T05:35:15Z","lastEventDate":"2017-08-07T05:35:15Z"},{"id":22884,"type":"PATENT","title":"Citing Max Planck Society publications","description":"Patent documents citing scholarly work of Max Planck Society","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":71114,"tags":[],"user":{"id":233682368,"username":"tech","firstName":"The Lens","lastName":"Team","created":"2017-08-06T20:11:49.000Z","displayName":"The Lens Team","profilePictureKey":"lens/users/15eac2a0-031d-4923-92cb-a162e1cb2bbb/profile-picture","preferences":"{\"beta\":true}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2017-08-07T05:50:10Z","updated":"2017-08-07T05:50:10Z","lastEventDate":"2017-08-07T05:50:10Z"},{"id":22888,"type":"PATENT","title":"Citing Purdue Univ publications","description":"Patent documents citing scholarly work of Purdue Univ","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":31243,"tags":[],"user":{"id":233682368,"username":"tech","firstName":"The Lens","lastName":"Team","created":"2017-08-06T20:11:49.000Z","displayName":"The Lens Team","profilePictureKey":"lens/users/15eac2a0-031d-4923-92cb-a162e1cb2bbb/profile-picture","preferences":"{\"beta\":true}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2017-08-07T05:53:26Z","updated":"2017-08-07T05:53:26Z","lastEventDate":"2017-08-07T05:53:26Z"},{"id":22891,"type":"PATENT","title":"Citing Indiana Univ System publications","description":"Patent documents citing scholarly work of Indiana Univ System","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":25265,"tags":[],"user":{"id":233682368,"username":"tech","firstName":"The Lens","lastName":"Team","created":"2017-08-06T20:11:49.000Z","displayName":"The Lens Team","profilePictureKey":"lens/users/15eac2a0-031d-4923-92cb-a162e1cb2bbb/profile-picture","preferences":"{\"beta\":true}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2017-08-07T05:54:11Z","updated":"2017-08-07T05:54:11Z","lastEventDate":"2017-08-07T05:54:11Z"},{"id":22899,"type":"PATENT","title":"Citing Univ Rochester publications","description":"Patent documents citing scholarly work of Univ Rochester","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":24884,"tags":[],"user":{"id":233682368,"username":"tech","firstName":"The Lens","lastName":"Team","created":"2017-08-06T20:11:49.000Z","displayName":"The Lens Team","profilePictureKey":"lens/users/15eac2a0-031d-4923-92cb-a162e1cb2bbb/profile-picture","preferences":"{\"beta\":true}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2017-08-07T05:56:06Z","updated":"2017-08-07T05:56:06Z","lastEventDate":"2017-08-07T05:56:06Z"},{"id":22901,"type":"PATENT","title":"Citing Johns Hopkins Univ publications","description":"Patent documents citing scholarly work of Johns Hopkins Univ","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":76487,"tags":[],"user":{"id":233682368,"username":"tech","firstName":"The Lens","lastName":"Team","created":"2017-08-06T20:11:49.000Z","displayName":"The Lens Team","profilePictureKey":"lens/users/15eac2a0-031d-4923-92cb-a162e1cb2bbb/profile-picture","preferences":"{\"beta\":true}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2017-08-07T05:56:37Z","updated":"2017-08-07T05:56:37Z","lastEventDate":"2017-08-07T05:56:37Z"},{"id":22904,"type":"PATENT","title":"Citing Univ Utah publications","description":"Patent documents citing scholarly work of Univ Utah","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":31415,"tags":[],"user":{"id":233682368,"username":"tech","firstName":"The Lens","lastName":"Team","created":"2017-08-06T20:11:49.000Z","displayName":"The Lens Team","profilePictureKey":"lens/users/15eac2a0-031d-4923-92cb-a162e1cb2bbb/profile-picture","preferences":"{\"beta\":true}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2017-08-07T05:58:45Z","updated":"2017-08-07T05:58:45Z","lastEventDate":"2017-08-07T05:58:45Z"},{"id":22912,"type":"PATENT","title":"Citing Univ Basel publications","description":"Patent documents citing scholarly work of Univ Basel","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":16553,"tags":[],"user":{"id":233682368,"username":"tech","firstName":"The Lens","lastName":"Team","created":"2017-08-06T20:11:49.000Z","displayName":"The Lens Team","profilePictureKey":"lens/users/15eac2a0-031d-4923-92cb-a162e1cb2bbb/profile-picture","preferences":"{\"beta\":true}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2017-08-07T06:01:42Z","updated":"2017-08-07T06:01:42Z","lastEventDate":"2017-08-07T06:01:42Z"},{"id":22914,"type":"PATENT","title":"Citing Yale Univ publications","description":"Patent documents citing scholarly work of Yale Univ","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":53591,"tags":[],"user":{"id":233682368,"username":"tech","firstName":"The Lens","lastName":"Team","created":"2017-08-06T20:11:49.000Z","displayName":"The Lens Team","profilePictureKey":"lens/users/15eac2a0-031d-4923-92cb-a162e1cb2bbb/profile-picture","preferences":"{\"beta\":true}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2017-08-07T06:01:58Z","updated":"2017-08-07T06:01:58Z","lastEventDate":"2017-08-07T06:01:58Z"},{"id":185273,"type":"PATENT","title":"lens-seq-2006-2007-seq-pubyr-families","description":"","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":37090,"tags":[],"user":{"id":11753382,"username":"poldham","firstName":"Paul","lastName":"Oldham","created":"2013-11-12T12:46:15.000Z","displayName":"Paul Oldham","profilePictureKey":"lens/users/5c122e46-fca5-4dba-a591-52919b87fbd0/profile-picture","preferences":"{}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2020-11-10T13:04:05Z","updated":"2020-11-10T13:05:14Z","lastEventDate":"2020-11-10T13:05:14Z"},{"id":185277,"type":"PATENT","title":"lens-seq-2008-2009-seq-pubyr-families-use","description":"","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":39465,"tags":[],"user":{"id":11753382,"username":"poldham","firstName":"Paul","lastName":"Oldham","created":"2013-11-12T12:46:15.000Z","displayName":"Paul Oldham","profilePictureKey":"lens/users/5c122e46-fca5-4dba-a591-52919b87fbd0/profile-picture","preferences":"{}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2020-11-10T13:28:57Z","updated":"2020-11-10T13:29:55Z","lastEventDate":"2020-11-10T13:29:55Z"}],"notes":[],"inventorships":[],"privateCollections":[],"publicCollections":[{"id":22721,"type":"PATENT","title":"Citing CNRS publications","description":"Patent documents citing scholarly work of CNRS","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":129822,"tags":[],"user":{"id":233682368,"username":"tech","firstName":"The Lens","lastName":"Team","created":"2017-08-06T20:11:49.000Z","displayName":"The Lens Team","profilePictureKey":"lens/users/15eac2a0-031d-4923-92cb-a162e1cb2bbb/profile-picture","preferences":"{\"beta\":true}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2017-08-07T04:38:15Z","updated":"2017-08-07T04:38:15Z","lastEventDate":"2017-08-07T04:38:15Z"},{"id":22732,"type":"PATENT","title":"Citing UC Berkeley publications","description":"Patent documents citing scholarly work of UC Berkeley","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":71443,"tags":[],"user":{"id":233682368,"username":"tech","firstName":"The Lens","lastName":"Team","created":"2017-08-06T20:11:49.000Z","displayName":"The Lens Team","profilePictureKey":"lens/users/15eac2a0-031d-4923-92cb-a162e1cb2bbb/profile-picture","preferences":"{\"beta\":true}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2017-08-07T04:43:57Z","updated":"2017-08-07T04:43:57Z","lastEventDate":"2017-08-07T04:43:57Z"},{"id":22739,"type":"PATENT","title":"Citing KU Leuven publications","description":"Patent documents citing scholarly work of KU Leuven","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":30113,"tags":[],"user":{"id":233682368,"username":"tech","firstName":"The Lens","lastName":"Team","created":"2017-08-06T20:11:49.000Z","displayName":"The Lens Team","profilePictureKey":"lens/users/15eac2a0-031d-4923-92cb-a162e1cb2bbb/profile-picture","preferences":"{\"beta\":true}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2017-08-07T04:46:44Z","updated":"2017-08-07T04:46:44Z","lastEventDate":"2017-08-07T04:46:44Z"},{"id":22745,"type":"PATENT","title":"Citing Washington Univ St Louis publications","description":"Patent documents citing scholarly work of Washington Univ St Louis","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":53436,"tags":[],"user":{"id":233682368,"username":"tech","firstName":"The Lens","lastName":"Team","created":"2017-08-06T20:11:49.000Z","displayName":"The Lens Team","profilePictureKey":"lens/users/15eac2a0-031d-4923-92cb-a162e1cb2bbb/profile-picture","preferences":"{\"beta\":true}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2017-08-07T04:48:14Z","updated":"2017-08-07T04:48:14Z","lastEventDate":"2017-08-07T04:48:14Z"},{"id":22756,"type":"PATENT","title":"Citing SUNYS publications","description":"Patent documents citing scholarly work of SUNYS","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":51828,"tags":[],"user":{"id":233682368,"username":"tech","firstName":"The Lens","lastName":"Team","created":"2017-08-06T20:11:49.000Z","displayName":"The Lens Team","profilePictureKey":"lens/users/15eac2a0-031d-4923-92cb-a162e1cb2bbb/profile-picture","preferences":"{\"beta\":true}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2017-08-07T04:52:17Z","updated":"2017-08-07T04:52:17Z","lastEventDate":"2017-08-07T04:52:17Z"},{"id":22766,"type":"PATENT","title":"Citing McGill Univ publications","description":"Patent documents citing scholarly work of McGill Univ","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":33777,"tags":[],"user":{"id":233682368,"username":"tech","firstName":"The Lens","lastName":"Team","created":"2017-08-06T20:11:49.000Z","displayName":"The Lens Team","profilePictureKey":"lens/users/15eac2a0-031d-4923-92cb-a162e1cb2bbb/profile-picture","preferences":"{\"beta\":true}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2017-08-07T04:56:02Z","updated":"2017-08-07T04:56:02Z","lastEventDate":"2017-08-07T04:56:02Z"},{"id":22783,"type":"PATENT","title":"Citing UPMC publications","description":"Patent documents citing scholarly work of UPMC","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":18259,"tags":[],"user":{"id":233682368,"username":"tech","firstName":"The Lens","lastName":"Team","created":"2017-08-06T20:11:49.000Z","displayName":"The Lens Team","profilePictureKey":"lens/users/15eac2a0-031d-4923-92cb-a162e1cb2bbb/profile-picture","preferences":"{\"beta\":true}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2017-08-07T05:03:04Z","updated":"2017-08-07T05:03:04Z","lastEventDate":"2017-08-07T05:03:04Z"},{"id":22794,"type":"PATENT","title":"Citing LBNL publications","description":"Patent documents citing scholarly work of LBNL","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":22220,"tags":[],"user":{"id":233682368,"username":"tech","firstName":"The Lens","lastName":"Team","created":"2017-08-06T20:11:49.000Z","displayName":"The Lens Team","profilePictureKey":"lens/users/15eac2a0-031d-4923-92cb-a162e1cb2bbb/profile-picture","preferences":"{\"beta\":true}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2017-08-07T05:08:27Z","updated":"2017-08-07T05:08:27Z","lastEventDate":"2017-08-07T05:08:27Z"},{"id":22802,"type":"PATENT","title":"Citing UC System publications","description":"Patent documents citing scholarly work of UC System","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":266608,"tags":[],"user":{"id":233682368,"username":"tech","firstName":"The Lens","lastName":"Team","created":"2017-08-06T20:11:49.000Z","displayName":"The Lens Team","profilePictureKey":"lens/users/15eac2a0-031d-4923-92cb-a162e1cb2bbb/profile-picture","preferences":"{\"beta\":true}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2017-08-07T05:10:38Z","updated":"2017-08-07T05:10:38Z","lastEventDate":"2017-08-07T05:10:38Z"},{"id":22805,"type":"PATENT","title":"Citing UC San Francisco publications","description":"Patent documents citing scholarly work of UC San Francisco","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":73241,"tags":[],"user":{"id":233682368,"username":"tech","firstName":"The Lens","lastName":"Team","created":"2017-08-06T20:11:49.000Z","displayName":"The Lens Team","profilePictureKey":"lens/users/15eac2a0-031d-4923-92cb-a162e1cb2bbb/profile-picture","preferences":"{\"beta\":true}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2017-08-07T05:15:33Z","updated":"2017-08-07T05:15:33Z","lastEventDate":"2017-08-07T05:15:33Z"},{"id":22842,"type":"PATENT","title":"Citing Univ Toronto publications","description":"Patent documents citing scholarly work of Univ Toronto","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":65159,"tags":[],"user":{"id":233682368,"username":"tech","firstName":"The Lens","lastName":"Team","created":"2017-08-06T20:11:49.000Z","displayName":"The Lens Team","profilePictureKey":"lens/users/15eac2a0-031d-4923-92cb-a162e1cb2bbb/profile-picture","preferences":"{\"beta\":true}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2017-08-07T05:27:52Z","updated":"2017-08-07T05:27:52Z","lastEventDate":"2017-08-07T05:27:52Z"},{"id":22848,"type":"PATENT","title":"Citing Stanford Univ publications","description":"Patent documents citing scholarly work of Stanford Univ","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":108345,"tags":[],"user":{"id":233682368,"username":"tech","firstName":"The Lens","lastName":"Team","created":"2017-08-06T20:11:49.000Z","displayName":"The Lens Team","profilePictureKey":"lens/users/15eac2a0-031d-4923-92cb-a162e1cb2bbb/profile-picture","preferences":"{\"beta\":true}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2017-08-07T05:31:21Z","updated":"2017-08-07T05:31:21Z","lastEventDate":"2017-08-07T05:31:21Z"},{"id":22856,"type":"PATENT","title":"Citing NIH publications","description":"Patent documents citing scholarly work of NIH","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":151649,"tags":[],"user":{"id":233682368,"username":"tech","firstName":"The Lens","lastName":"Team","created":"2017-08-06T20:11:49.000Z","displayName":"The Lens Team","profilePictureKey":"lens/users/15eac2a0-031d-4923-92cb-a162e1cb2bbb/profile-picture","preferences":"{\"beta\":true}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2017-08-07T05:35:15Z","updated":"2017-08-07T05:35:15Z","lastEventDate":"2017-08-07T05:35:15Z"},{"id":22884,"type":"PATENT","title":"Citing Max Planck Society publications","description":"Patent documents citing scholarly work of Max Planck Society","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":71114,"tags":[],"user":{"id":233682368,"username":"tech","firstName":"The Lens","lastName":"Team","created":"2017-08-06T20:11:49.000Z","displayName":"The Lens Team","profilePictureKey":"lens/users/15eac2a0-031d-4923-92cb-a162e1cb2bbb/profile-picture","preferences":"{\"beta\":true}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2017-08-07T05:50:10Z","updated":"2017-08-07T05:50:10Z","lastEventDate":"2017-08-07T05:50:10Z"},{"id":22888,"type":"PATENT","title":"Citing Purdue Univ publications","description":"Patent documents citing scholarly work of Purdue Univ","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":31243,"tags":[],"user":{"id":233682368,"username":"tech","firstName":"The Lens","lastName":"Team","created":"2017-08-06T20:11:49.000Z","displayName":"The Lens Team","profilePictureKey":"lens/users/15eac2a0-031d-4923-92cb-a162e1cb2bbb/profile-picture","preferences":"{\"beta\":true}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2017-08-07T05:53:26Z","updated":"2017-08-07T05:53:26Z","lastEventDate":"2017-08-07T05:53:26Z"},{"id":22891,"type":"PATENT","title":"Citing Indiana Univ System publications","description":"Patent documents citing scholarly work of Indiana Univ System","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":25265,"tags":[],"user":{"id":233682368,"username":"tech","firstName":"The Lens","lastName":"Team","created":"2017-08-06T20:11:49.000Z","displayName":"The Lens Team","profilePictureKey":"lens/users/15eac2a0-031d-4923-92cb-a162e1cb2bbb/profile-picture","preferences":"{\"beta\":true}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2017-08-07T05:54:11Z","updated":"2017-08-07T05:54:11Z","lastEventDate":"2017-08-07T05:54:11Z"},{"id":22899,"type":"PATENT","title":"Citing Univ Rochester publications","description":"Patent documents citing scholarly work of Univ Rochester","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":24884,"tags":[],"user":{"id":233682368,"username":"tech","firstName":"The Lens","lastName":"Team","created":"2017-08-06T20:11:49.000Z","displayName":"The Lens Team","profilePictureKey":"lens/users/15eac2a0-031d-4923-92cb-a162e1cb2bbb/profile-picture","preferences":"{\"beta\":true}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2017-08-07T05:56:06Z","updated":"2017-08-07T05:56:06Z","lastEventDate":"2017-08-07T05:56:06Z"},{"id":22901,"type":"PATENT","title":"Citing Johns Hopkins Univ publications","description":"Patent documents citing scholarly work of Johns Hopkins Univ","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":76487,"tags":[],"user":{"id":233682368,"username":"tech","firstName":"The Lens","lastName":"Team","created":"2017-08-06T20:11:49.000Z","displayName":"The Lens Team","profilePictureKey":"lens/users/15eac2a0-031d-4923-92cb-a162e1cb2bbb/profile-picture","preferences":"{\"beta\":true}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2017-08-07T05:56:37Z","updated":"2017-08-07T05:56:37Z","lastEventDate":"2017-08-07T05:56:37Z"},{"id":22904,"type":"PATENT","title":"Citing Univ Utah publications","description":"Patent documents citing scholarly work of Univ Utah","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":31415,"tags":[],"user":{"id":233682368,"username":"tech","firstName":"The Lens","lastName":"Team","created":"2017-08-06T20:11:49.000Z","displayName":"The Lens Team","profilePictureKey":"lens/users/15eac2a0-031d-4923-92cb-a162e1cb2bbb/profile-picture","preferences":"{\"beta\":true}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2017-08-07T05:58:45Z","updated":"2017-08-07T05:58:45Z","lastEventDate":"2017-08-07T05:58:45Z"},{"id":22912,"type":"PATENT","title":"Citing Univ Basel publications","description":"Patent documents citing scholarly work of Univ Basel","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":16553,"tags":[],"user":{"id":233682368,"username":"tech","firstName":"The Lens","lastName":"Team","created":"2017-08-06T20:11:49.000Z","displayName":"The Lens Team","profilePictureKey":"lens/users/15eac2a0-031d-4923-92cb-a162e1cb2bbb/profile-picture","preferences":"{\"beta\":true}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2017-08-07T06:01:42Z","updated":"2017-08-07T06:01:42Z","lastEventDate":"2017-08-07T06:01:42Z"},{"id":22914,"type":"PATENT","title":"Citing Yale Univ publications","description":"Patent documents citing scholarly work of Yale Univ","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":53591,"tags":[],"user":{"id":233682368,"username":"tech","firstName":"The Lens","lastName":"Team","created":"2017-08-06T20:11:49.000Z","displayName":"The Lens Team","profilePictureKey":"lens/users/15eac2a0-031d-4923-92cb-a162e1cb2bbb/profile-picture","preferences":"{\"beta\":true}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2017-08-07T06:01:58Z","updated":"2017-08-07T06:01:58Z","lastEventDate":"2017-08-07T06:01:58Z"},{"id":185273,"type":"PATENT","title":"lens-seq-2006-2007-seq-pubyr-families","description":"","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":37090,"tags":[],"user":{"id":11753382,"username":"poldham","firstName":"Paul","lastName":"Oldham","created":"2013-11-12T12:46:15.000Z","displayName":"Paul Oldham","profilePictureKey":"lens/users/5c122e46-fca5-4dba-a591-52919b87fbd0/profile-picture","preferences":"{}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2020-11-10T13:04:05Z","updated":"2020-11-10T13:05:14Z","lastEventDate":"2020-11-10T13:05:14Z"},{"id":185277,"type":"PATENT","title":"lens-seq-2008-2009-seq-pubyr-families-use","description":"","access":"OPEN_ACCESS","displayAvatar":true,"attested":false,"itemCount":39465,"tags":[],"user":{"id":11753382,"username":"poldham","firstName":"Paul","lastName":"Oldham","created":"2013-11-12T12:46:15.000Z","displayName":"Paul Oldham","profilePictureKey":"lens/users/5c122e46-fca5-4dba-a591-52919b87fbd0/profile-picture","preferences":"{}","accountType":"PERSONAL","isOauthOnly":false},"notes":[],"sharedType":"PUBLISHED","hasLinkedSavedQueries":false,"savedQueries":[],"created":"2020-11-10T13:28:57Z","updated":"2020-11-10T13:29:55Z","lastEventDate":"2020-11-10T13:29:55Z"}],"privateNotes":[],"landscapeCollections":[],"landscapeNotes":[]},"document":{"record_lens_id":"047-294-569-900-858","lens_id":["047-294-569-900-858","143-398-592-640-86X"],"doc_key":"WO_2008156048_A1_20081224","created":"2016-01-15T14:40:35.248","docdb_id":275949753,"lens_internal":{"earliest_lens_id_created_time":"2016-01-15T14:40:35.248","last_modified":"2024-03-26T10:04:26.35","legacy_pub_key":"WO_2008_156048_A1","has_doc_lang":true,"has_biblio_lang":true,"has_all_title_lang":true,"has_all_abstract_lang":true,"has_all_claims_lang":false,"has_description_lang":false},"jurisdiction":"WO","doc_number":"2008156048","kind":"A1","date_published":"2008-12-24","year_published":2008,"ids":["WO_2008_156048_A1","047-294-569-900-858","143-398-592-640-86X","WO_2008156048_A1_20081224","WO","2008156048","A1","WO2008156048A1","WO2008156048","2008156048A1"],"lang":"ja","publication_type":"PATENT_APPLICATION","application_reference":{"jurisdiction":"JP","doc_number":"2008060963","kind":"W","date":"2008-06-16"},"priority_claim":[{"jurisdiction":"JP","doc_number":"2007160457","kind":"A","date":"2007-06-18"}],"priority_claim.source":"DOCDB","earliest_priority_claim_date":"2007-06-18","title":{"en":[{"text":"SET OF YEAST CELLS, METHOD OF IDENTIFYING TARGET CANDIDATE MOLECULE, METHOD OF ANALYZING ACTION MECHANISM AND SCREENING METHOD","lang":"en","source":"DOCDB","data_format":"DOCDBA"}],"fr":[{"text":"ENSEMBLE DE CELLULES DE LEVURE, PROCÉDÉ D'IDENTIFICATION D'UNE MOLÉCULE CANDIDATE CIBLE, PROCÉDÉ D'ANALYSE DU MÉCANISME D'ACTION ET PROCÉDÉ DE CRIBLAGE","lang":"fr","source":"DOCDB","data_format":"DOCDBA"}]},"title_lang":["en","fr"],"has_title":true,"applicant":[{"name":"EISAI R&D MAN CO LTD","residence":"JP","sequence":1,"app_type":"applicant"},{"name":"TSUKAHARA KAPPEI","residence":"JP","sequence":2,"app_type":"applicant"},{"name":"MITSUHASHI KAORU","residence":"JP","sequence":3,"app_type":"applicant"},{"name":"IIDA MAKIYO","residence":"JP","sequence":4,"app_type":"applicant"}],"applicant_count":4,"has_applicant":true,"inventor":[{"name":"TSUKAHARA KAPPEI","residence":"JP","sequence":1},{"name":"MITSUHASHI KAORU","residence":"JP","sequence":2},{"name":"IIDA MAKIYO","residence":"JP","sequence":3}],"inventor_count":3,"has_inventor":true,"agent":[{"name":"NAKAJIMA, Jun et al.","address":"TAIYO, NAKAJIMA & KATO, Seventh Floor, HK-Shinjuku Bldg., 3-17, Shinjuku 4-chome, Shinjuku-ku, Tokyo 1600022, 1600022","country":"JP","sequence":1}],"agent_count":1,"has_agent":true,"owner":[],"owner_count":0,"owner_all":[],"owner_all_count":0,"has_owner":false,"has_examiner":false,"class_ipcr":[{"symbol":"C12N15/09","version_indicator":"2006-01-01","class_symbol_position":"F","class_value":"I","action_date":"2008-12-24","class_status":"B","class_data_source":"H","generating_office":"JP","sequence":1},{"symbol":"C12N1/19","version_indicator":"2006-01-01","class_symbol_position":"L","class_value":"I","action_date":"2008-12-24","class_status":"B","class_data_source":"H","generating_office":"JP","sequence":2},{"symbol":"C12Q1/02","version_indicator":"2006-01-01","class_symbol_position":"L","class_value":"I","action_date":"2008-12-24","class_status":"B","class_data_source":"H","generating_office":"JP","sequence":3},{"symbol":"C12Q1/68","version_indicator":"2006-01-01","class_symbol_position":"L","class_value":"I","action_date":"2008-12-24","class_status":"B","class_data_source":"H","generating_office":"JP","sequence":4}],"class_ipcr.first_symbol":"C12N15/09","class_ipcr.later_symbol":["C12N1/19","C12Q1/02","C12Q1/68"],"class_ipcr.inv_symbol":["C12N15/09","C12N1/19","C12Q1/02","C12Q1/68"],"class_ipcr.add_symbol":[],"class_ipcr.source":"DOCDB","class_cpc":[{"symbol":"C12N1/16","version_indicator":"2013-01-01","class_symbol_position":"F","class_value":"I","action_date":"2013-01-01","class_status":"B","class_data_source":"H","generating_office":"EP","sequence":1},{"symbol":"C12Q1/025","version_indicator":"2013-01-01","class_symbol_position":"L","class_value":"I","action_date":"2013-01-01","class_status":"B","class_data_source":"H","generating_office":"EP","sequence":2},{"symbol":"G01N2500/00","version_indicator":"2013-01-01","class_symbol_position":"L","class_value":"A","action_date":"2013-01-01","class_status":"B","class_data_source":"H","generating_office":"EP","sequence":3},{"symbol":"C12N1/16","version_indicator":"2013-01-01","class_symbol_position":"F","class_value":"I","action_date":"2015-01-20","class_status":"B","class_data_source":"H","generating_office":"KR","sequence":4},{"symbol":"C12N15/09","version_indicator":"2013-01-01","class_symbol_position":"L","class_value":"I","action_date":"2015-01-20","class_status":"B","class_data_source":"H","generating_office":"KR","sequence":5},{"symbol":"C12Q1/025","version_indicator":"2013-01-01","class_symbol_position":"L","class_value":"I","action_date":"2015-01-20","class_status":"B","class_data_source":"H","generating_office":"KR","sequence":6},{"symbol":"G01N2500/00","version_indicator":"2013-01-01","class_symbol_position":"L","class_value":"A","action_date":"2015-01-20","class_status":"B","class_data_source":"H","generating_office":"KR","sequence":7},{"symbol":"C12N1/16","version_indicator":"2013-01-01","class_symbol_position":"F","class_value":"I","action_date":"2019-08-22","class_status":"B","class_data_source":"H","generating_office":"US","sequence":8},{"symbol":"C12Q1/025","version_indicator":"2013-01-01","class_symbol_position":"L","class_value":"I","action_date":"2019-10-11","class_status":"B","class_data_source":"H","generating_office":"US","sequence":9},{"symbol":"G01N2500/00","version_indicator":"2013-01-01","class_symbol_position":"L","class_value":"A","action_date":"2019-10-11","class_status":"B","class_data_source":"H","generating_office":"US","sequence":10}],"class_cpc_cset":[],"class_cpc.first_symbol":"C12N1/16","class_cpc.later_symbol":["C12Q1/025","G01N2500/00","C12N15/09","C12Q1/025","G01N2500/00","C12Q1/025","G01N2500/00"],"class_cpc.inv_symbol":["C12N1/16","C12Q1/025","C12N1/16","C12N15/09","C12Q1/025","C12N1/16","C12Q1/025"],"class_cpc.add_symbol":["G01N2500/00","G01N2500/00","G01N2500/00"],"class_cpc.source":"DOCDB","class_national":[],"class_national.later_symbol":[],"reference_cited":[{"patent":{"num":1,"document_id":{"jurisdiction":"JP","doc_number":"2006141298","kind":"A","date":"2006-06-08","name":"EISAI CO LTD, et al"},"lens_id":"002-248-095-676-080","srep_office":"JP","category":["Y"],"us_category":[],"cited_phase":"ISR","cited_date":"2009-02-20","rel_claims":[],"sequence":1}},{"npl":{"num":1,"text":"GIAEVER G. ET AL.: \"Genomic profiling of drug sensitivites via induced haploinsufficiency\", NAT. GENET., vol. 21, no. 3, March 1999 (1999-03-01), pages 278 - 283, XP001025981","npl_type":"s","xp_number":"001025981","external_id":["10080179","10.1038/6791"],"record_lens_id":"034-878-750-621-463","lens_id":["097-959-297-057-066","034-878-750-621-463","173-634-467-032-558"],"sequence":2,"category":["Y"],"us_category":[],"cited_phase":"ISR","cited_date":"2009-02-20","rel_claims":[],"srep_office":"JP"}},{"npl":{"num":2,"text":"GIAEVER G. ET AL.: \"Chemogenomic profiling: identifying the functional interactions of small molecules in yeast\", PROC. NATL. ACAD. SCI. USA, vol. 101, no. 3, 20 January 2004 (2004-01-20), pages 793 - 798, XP008127226","npl_type":"s","xp_number":"008127226","external_id":["10.1073/pnas.0307490100","pmc321760","14718668"],"record_lens_id":"042-686-425-589-301","lens_id":["048-558-994-061-269","042-686-425-589-301","085-627-653-383-815"],"sequence":3,"category":["Y"],"us_category":[],"cited_phase":"ISR","cited_date":"2009-02-20","rel_claims":[],"srep_office":"JP"}},{"npl":{"num":3,"text":"LUM P.Y. ET AL.: \"Discovering modes of action for therapeutic compounds using a genome-wide screen of yeast heterozygotes\", CELL, vol. 116, no. 1, 9 January 2004 (2004-01-09), pages 121 - 137, XP008077831","npl_type":"s","xp_number":"008077831","external_id":["14718172","10.1016/s0092-8674(03)01035-3"],"record_lens_id":"057-038-459-671-660","lens_id":["065-162-313-381-829","057-038-459-671-660","147-127-442-685-908"],"sequence":4,"category":["Y"],"us_category":[],"cited_phase":"ISR","cited_date":"2009-02-20","rel_claims":[],"srep_office":"JP"}},{"npl":{"num":4,"text":"PARSONS A.B. ET AL.: \"Integration of chemical-genetic and genetic interaction data links bioactive compounds to cellular target pathways\", NAT. BIOTECHNOL., vol. 22, no. 1, January 2004 (2004-01-01), pages 62 - 69, XP008127228","npl_type":"s","xp_number":"008127228","external_id":["14661025","10.1038/nbt919"],"record_lens_id":"015-658-365-019-368","lens_id":["102-242-099-468-850","015-658-365-019-368","047-177-707-930-869"],"sequence":5,"category":["Y"],"us_category":[],"cited_phase":"ISR","cited_date":"2009-02-20","rel_claims":[],"srep_office":"JP"}},{"npl":{"num":5,"text":"DELAVEAU T.: \"PDDR3, a new yeast regulatory gene, is homologue to PDR1 and controls the multidrug resistance phenomenon\", MOL. GEN. GENET., vol. 244, no. 5, 1 September 1994 (1994-09-01), pages 501 - 511, XP008134910","npl_type":"s","xp_number":"008134910","external_id":["10.1007/bf00583901","8078477"],"record_lens_id":"034-522-129-967-397","lens_id":["145-642-027-557-873","034-522-129-967-397","156-233-721-084-887"],"sequence":6,"category":["Y"],"us_category":[],"cited_phase":"ISR","cited_date":"2009-02-20","rel_claims":[],"srep_office":"JP"}},{"patent":{"num":2,"document_id":{"jurisdiction":"WO","doc_number":"2006046694","kind":"A1","date":"2006-05-04","name":"EISAI CO LTD [JP], et al"},"lens_id":"000-858-990-692-04X","srep_office":"JP","category":["Y"],"us_category":[],"cited_phase":"ISR","cited_date":"2009-02-20","rel_claims":[],"sequence":7}},{"npl":{"num":6,"text":"ANDERSON J.E. ET AL.: \"Antagonism between two mechanisms of antifungal drug resistance\", EUKARYOT CELL, vol. 5, no. 8, August 2006 (2006-08-01), pages 1243 - 1251, XP008134909","npl_type":"s","xp_number":"008134909","external_id":["16896209","10.1128/ec.00048-06","pmc1539145"],"record_lens_id":"038-559-235-912-247","lens_id":["102-169-123-772-361","038-559-235-912-247","118-978-437-028-43X"],"sequence":8,"category":["Y"],"us_category":[],"cited_phase":"ISR","cited_date":"2009-02-20","rel_claims":[],"srep_office":"JP"}},{"npl":{"num":7,"text":"STEPANOV A. ET AL.: \"Enhancing drug accumulation in S. cereviase by repression of pleiotropic drug resistance genes with chimeric transcription repressors\", MOL. PHARMACOL., 9 May 2008 (2008-05-09), XP008127256","npl_type":"s","xp_number":"008127256","external_id":["pmc2597350","18469141","10.1124/mol.107.044651"],"record_lens_id":"001-158-023-121-363","lens_id":["078-595-907-426-794","137-463-612-849-03X","001-158-023-121-363"],"sequence":9,"category":["X","P"],"us_category":[],"cited_phase":"ISR","cited_date":"2009-02-20","rel_claims":[],"srep_office":"JP"}},{"patent":{"num":1,"document_id":{"jurisdiction":"WO","doc_number":"2006046694","kind":"A1","date":"2006-05-04","name":"EISAI CO LTD [JP], et al"},"lens_id":"000-858-990-692-04X","category":[],"us_category":[],"cited_phase":"APP","cited_date":"2013-03-04","rel_claims":[],"sequence":1}},{"patent":{"num":2,"document_id":{"jurisdiction":"JP","doc_number":"2006141298","kind":"A","date":"2006-06-08","name":"EISAI CO LTD, et al"},"lens_id":"002-248-095-676-080","category":[],"us_category":[],"cited_phase":"APP","cited_date":"2013-03-04","rel_claims":[],"sequence":2}},{"npl":{"num":1,"text":"HUELS ET AL., DRUG DISCOVERY TODAY, vol. 7, 2002, pages 119 - 124","npl_type":"s","external_id":["10.1016/s1359-6446(02)02389-9","12546877"],"record_lens_id":"043-586-688-075-933","lens_id":["073-025-257-555-781","043-586-688-075-933","198-592-061-773-81X"],"sequence":3,"category":[],"us_category":[],"cited_phase":"APP","cited_date":"2013-03-04","rel_claims":[]}},{"npl":{"num":2,"text":"SIMON; BEDALOV, NAT REV CANCER, vol. 4, 2004, pages 481 - 487","npl_type":"s","external_id":["10.1038/nrc1372","15170450"],"record_lens_id":"077-818-234-311-544","lens_id":["137-185-301-929-043","077-818-234-311-544","178-186-123-743-087"],"sequence":4,"category":[],"us_category":[],"cited_phase":"APP","cited_date":"2013-03-04","rel_claims":[]}},{"npl":{"num":3,"text":"GIAEVER ET AL., NATURE, vol. 418, 2002, pages 387 - 91","npl_type":"s","external_id":["10.1038/nature00935","12140549"],"record_lens_id":"062-231-880-275-886","lens_id":["188-819-357-457-323","062-231-880-275-886","072-125-164-349-374"],"sequence":5,"category":[],"us_category":[],"cited_phase":"APP","cited_date":"2013-03-04","rel_claims":[]}},{"npl":{"num":4,"text":"GIAEVER ET AL., NAT GENET, vol. 21, 1999, pages 278 - 83","npl_type":"s","external_id":["10080179","10.1038/6791"],"record_lens_id":"034-878-750-621-463","lens_id":["097-959-297-057-066","034-878-750-621-463","173-634-467-032-558"],"sequence":6,"category":[],"us_category":[],"cited_phase":"APP","cited_date":"2013-03-04","rel_claims":[]}},{"npl":{"num":5,"text":"GIAEVER ET AL., PROC NATL ACAD SCI USA, vol. 101, 2004, pages 793 - 798","npl_type":"s","external_id":["10.1073/pnas.0307490100","pmc321760","14718668"],"record_lens_id":"042-686-425-589-301","lens_id":["048-558-994-061-269","042-686-425-589-301","085-627-653-383-815"],"sequence":7,"category":[],"us_category":[],"cited_phase":"APP","cited_date":"2013-03-04","rel_claims":[]}},{"npl":{"num":6,"text":"LUM ET AL., CELL, vol. 116, 2004, pages 121 - 37","npl_type":"s","external_id":["14718172","10.1016/s0092-8674(03)01035-3"],"record_lens_id":"057-038-459-671-660","lens_id":["065-162-313-381-829","057-038-459-671-660","147-127-442-685-908"],"sequence":8,"category":[],"us_category":[],"cited_phase":"APP","cited_date":"2013-03-04","rel_claims":[]}},{"npl":{"num":7,"text":"PARSONS ET AL., NAT BIOTECHNOL, vol. 22, 2004, pages 62 - 9","npl_type":"s","external_id":[],"lens_id":[],"sequence":9,"category":[],"us_category":[],"cited_phase":"APP","cited_date":"2013-03-04","rel_claims":[]}},{"npl":{"num":8,"text":"DE- LAVEAU ET AL., MOL GEN GENET., vol. 244, no. 5, 1994, pages 501 - 11","npl_type":"s","external_id":["10.1007/bf00583901","8078477"],"record_lens_id":"034-522-129-967-397","lens_id":["145-642-027-557-873","034-522-129-967-397","156-233-721-084-887"],"sequence":10,"category":[],"us_category":[],"cited_phase":"APP","cited_date":"2013-03-04","rel_claims":[]}},{"npl":{"num":9,"text":"SCIENCE, vol. 294, 2001, pages 2364 - 2368","npl_type":"s","external_id":["10.1126/science.1065810","11743205"],"record_lens_id":"026-120-471-612-581","lens_id":["075-290-748-776-554","026-120-471-612-581","107-553-940-063-686"],"sequence":11,"category":[],"us_category":[],"cited_phase":"APP","cited_date":"2013-03-04","rel_claims":[]}},{"npl":{"num":10,"text":"BAUDIN A ET AL., NUCL.ACID RES., vol. 21, 1993, pages 3329 - 3330","npl_type":"s","external_id":["10.1093/nar/21.14.3329","pmc309783","8341614"],"record_lens_id":"093-025-757-055-295","lens_id":["163-276-881-318-64X","093-025-757-055-295","195-305-723-426-689"],"sequence":12,"category":[],"us_category":[],"cited_phase":"APP","cited_date":"2013-03-04","rel_claims":[]}},{"npl":{"num":11,"text":"SCIENCE, vol. 294, no. 5550, 14 December 2001 (2001-12-14), pages 2364 - 2368","npl_type":"s","external_id":["10.1126/science.1065810","11743205"],"record_lens_id":"026-120-471-612-581","lens_id":["075-290-748-776-554","026-120-471-612-581","107-553-940-063-686"],"sequence":13,"category":[],"us_category":[],"cited_phase":"APP","cited_date":"2013-03-04","rel_claims":[]}},{"npl":{"num":12,"text":"\"Methods in Yeast Genetics: A Cold Spring Harber Laboratory Course Manual\", 2000","npl_type":"b","external_id":[],"lens_id":[],"sequence":14,"category":[],"us_category":[],"cited_phase":"APP","cited_date":"2013-03-04","rel_claims":[]}},{"npl":{"num":13,"text":"HARTWELL ET AL., SCIENCE, vol. 278, 1997, pages 1064 - 8","npl_type":"s","external_id":["10.1126/science.278.5340.1064","9353181"],"record_lens_id":"125-358-210-735-873","lens_id":["185-838-659-284-004","125-358-210-735-873","178-466-852-689-072"],"sequence":15,"category":[],"us_category":[],"cited_phase":"APP","cited_date":"2013-03-04","rel_claims":[]}},{"npl":{"num":14,"text":"PARSONS ET AL., NAT BIOTECHNOL, vol. 22, 2004, pages 62 - 9","npl_type":"s","external_id":[],"lens_id":[],"sequence":16,"category":[],"us_category":[],"cited_phase":"APP","cited_date":"2013-03-04","rel_claims":[]}},{"npl":{"num":15,"text":"GIAEVER ET AL., NATURE GENETICS, vol. 21, 1999, pages 278 - 283","npl_type":"s","external_id":["10080179","10.1038/6791"],"record_lens_id":"034-878-750-621-463","lens_id":["097-959-297-057-066","034-878-750-621-463","173-634-467-032-558"],"sequence":17,"category":[],"us_category":[],"cited_phase":"APP","cited_date":"2013-03-04","rel_claims":[]}},{"npl":{"num":16,"text":"HEITMAN J ET AL.: \"FK 506-binding protein proline rotamase is a target for the immunosuppressive agent FK 506 in Saccharomyces cerevisiae\", PROC NATL ACAD SCI USA, vol. 88, no. 5, 1991, pages 1948 - 52","npl_type":"s","external_id":["10.1073/pnas.88.5.1948","pmc51143","1705713"],"record_lens_id":"007-716-328-960-08X","lens_id":["070-714-570-100-761","007-716-328-960-08X","074-819-234-723-691"],"sequence":18,"category":[],"us_category":[],"cited_phase":"APP","cited_date":"2013-03-04","rel_claims":[]}},{"npl":{"num":17,"text":"HEITMAN ET AL., PROC NATL ACAD SCI U S A., vol. 88, 1991, pages 1948 - 52","npl_type":"s","external_id":["10.1073/pnas.88.5.1948","pmc51143","1705713"],"record_lens_id":"007-716-328-960-08X","lens_id":["070-714-570-100-761","007-716-328-960-08X","074-819-234-723-691"],"sequence":19,"category":[],"us_category":[],"cited_phase":"APP","cited_date":"2013-03-04","rel_claims":[]}},{"npl":{"num":18,"text":"BAUDIN A, NUCL.ACID RES., vol. 21, 1993, pages 3329 - 3330","npl_type":"s","external_id":["10.1093/nar/21.14.3329","pmc309783","8341614"],"record_lens_id":"093-025-757-055-295","lens_id":["163-276-881-318-64X","093-025-757-055-295","195-305-723-426-689"],"sequence":20,"category":[],"us_category":[],"cited_phase":"APP","cited_date":"2013-03-04","rel_claims":[]}},{"npl":{"num":19,"text":"See also references of EP 2169056A4","npl_type":"a","external_id":[],"lens_id":[],"sequence":21,"category":[],"us_category":[],"cited_phase":"APP","cited_date":"2013-03-04","rel_claims":[]}}],"reference_cited.source":"DOCDB","reference_cited.patent_count":4,"cites_patent":true,"reference_cited.npl_count":26,"reference_cited.npl_resolved_count":22,"cites_npl":true,"cites_resolved_npl":true,"cited_by":{"patent_count":2,"patent":[{"lens_id":"020-623-479-325-428","document_id":{"jurisdiction":"JP","doc_number":"2016505270","kind":"A"}},{"lens_id":"062-649-593-034-324","document_id":{"jurisdiction":"JP","doc_number":"2019068843","kind":"A"}}]},"cited_by_patent":true,"family":{"simple":{"size":9,"id":194501980,"member":[{"lens_id":"045-036-514-625-436","document_id":{"jurisdiction":"EP","doc_number":"2169056","kind":"A4","date":"2011-07-06"}},{"lens_id":"032-258-762-351-616","document_id":{"jurisdiction":"AU","doc_number":"2008264625","kind":"A1","date":"2008-12-24"}},{"lens_id":"142-029-714-511-127","document_id":{"jurisdiction":"KR","doc_number":"20100044175","kind":"A","date":"2010-04-29"}},{"lens_id":"011-009-820-301-889","document_id":{"jurisdiction":"CN","doc_number":"101688199","kind":"A","date":"2010-03-31"}},{"lens_id":"096-240-357-431-651","document_id":{"jurisdiction":"US","doc_number":"20100240074","kind":"A1","date":"2010-09-23"}},{"lens_id":"071-188-041-984-302","document_id":{"jurisdiction":"CA","doc_number":"2691651","kind":"A1","date":"2008-12-24"}},{"lens_id":"068-784-780-582-457","document_id":{"jurisdiction":"EP","doc_number":"2169056","kind":"A1","date":"2010-03-31"}},{"lens_id":"117-217-875-234-986","document_id":{"jurisdiction":"JP","doc_number":"WO2008156048","kind":"A1","date":"2010-08-26"}},{"lens_id":"047-294-569-900-858","document_id":{"jurisdiction":"WO","doc_number":"2008156048","kind":"A1","date":"2008-12-24"}}]},"extended":{"size":9,"id":194296506,"member":[{"lens_id":"045-036-514-625-436","document_id":{"jurisdiction":"EP","doc_number":"2169056","kind":"A4","date":"2011-07-06"}},{"lens_id":"032-258-762-351-616","document_id":{"jurisdiction":"AU","doc_number":"2008264625","kind":"A1","date":"2008-12-24"}},{"lens_id":"142-029-714-511-127","document_id":{"jurisdiction":"KR","doc_number":"20100044175","kind":"A","date":"2010-04-29"}},{"lens_id":"011-009-820-301-889","document_id":{"jurisdiction":"CN","doc_number":"101688199","kind":"A","date":"2010-03-31"}},{"lens_id":"096-240-357-431-651","document_id":{"jurisdiction":"US","doc_number":"20100240074","kind":"A1","date":"2010-09-23"}},{"lens_id":"071-188-041-984-302","document_id":{"jurisdiction":"CA","doc_number":"2691651","kind":"A1","date":"2008-12-24"}},{"lens_id":"068-784-780-582-457","document_id":{"jurisdiction":"EP","doc_number":"2169056","kind":"A1","date":"2010-03-31"}},{"lens_id":"117-217-875-234-986","document_id":{"jurisdiction":"JP","doc_number":"WO2008156048","kind":"A1","date":"2010-08-26"}},{"lens_id":"047-294-569-900-858","document_id":{"jurisdiction":"WO","doc_number":"2008156048","kind":"A1","date":"2008-12-24"}}]}},"sequence":{"seq_list_key":"WO_2008156048","type":["N","DNA"],"length_bucket":["NT_1_100"],"length":[33,21,23,39,24,25,45,29,46,30],"organism":[{"name":"Unknown/Artificial","tax_id":-1}],"document_location":[],"count":14,"data_source":["WIPO_SEQL","GBPAT_DDBJ","EMBLPAT_EBI","DDBJPAT"]},"has_sequence":true,"legal_status":{"ipr_type":"patent for invention","granted":false,"earliest_filing_date":"2007-06-18","has_disclaimer":false,"patent_status":"PENDING","publication_count":1,"has_spc":false,"has_grant_event":false,"has_entry_into_national_phase":true},"abstract":{"en":[{"text":"It is intended to provide a set of yeast gene knockout strains whose drug sensitivity has been significantly improved. A set of yeast cells of the invention is a set of yeast cells comprising two or more species of yeast cells, wherein at least one mutually different gene has been deleted or mutated in each of the two or more species of yeast cells, and all the two or more species of yeast cells are drug hypersensitive yeast cells in which the expression of at least one drug sensitivity-related gene has been regulated.","lang":"en","source":"WIPO_FULLTEXT","data_format":"ORIGINAL"}],"fr":[{"text":"La présente invention concerne un ensemble de souches génétiques de levure inactivées dont la sensibilité aux médicaments a été significativement améliorée. Un ensemble de cellules de levure de l'invention est un ensemble de cellules de levure comprenant deux espèces ou plus de cellules de levure, dans lesquelles au moins un gène mutuellement différent a été supprimé ou muté dans chacune de ces deux espèces ou plus de cellules de levure, et la totalité de ces deux espèces ou plus de cellules de levure sont des cellules de levure hypersensibles aux médicaments dans lesquelles au moins un gène associé à la sensibilité aux médicaments a été régulé.","lang":"fr","source":"WIPO_FULLTEXT","data_format":"ORIGINAL"}],"ja":[{"text":"薬物感受性が著しく向上した酵母遺伝子破壊株セットを提供する。 本発明の酵母細胞セットは、2種以上の酵母細胞からなる酵母細胞セットであって、前記2種以上の酵母細胞の各々が相互に異なる遺伝子の少なくとも1種を欠損又は変異し、かつ、前記2種以上の酵母細胞のすべてが薬物感受性関連遺伝子の少なくとも1種を発現制御された薬物高感受性酵母細胞からなる酵母細胞セットである。","lang":"ja","source":"WIPO_FULLTEXT","data_format":"ORIGINAL"}]},"abstract_lang":["en","fr","ja"],"has_abstract":true,"claim":{"ja":[{"text":"2種以上の酵母細胞からなる酵母細胞セットであって、前記2種以上の酵母細胞の各々が相互に異なる遺伝子の少なくとも1つの遺伝子を欠損又は変異し、かつ、前記2種以上の酵母細胞のすべてが薬物感受性関連遺伝子の少なくとも1種を発現制御された薬物高感受性酵母細胞である酵母細胞セット。","source":"WIPO_FULLTEXT","data_format":"ORIGINAL"},{"text":"前記薬物感受性関連遺伝子が、トランスポーター関連遺伝子及びエルゴステロール合成関連遺伝子から選ばれる少なくとも1種であることを特徴とする請求項1に記載の酵母細胞セット。","source":"WIPO_FULLTEXT","data_format":"ORIGINAL"},{"text":"前記トランスポーター関連遺伝子が、PDR1及びPDR3であることを特徴とする請求項2に記載の酵母細胞セット。","source":"WIPO_FULLTEXT","data_format":"ORIGINAL"},{"text":"前記エルゴステロール合成関連遺伝子が、ERG6又はERG3であることを特徴とする請求項2に記載の酵母細胞セット。","source":"WIPO_FULLTEXT","data_format":"ORIGINAL"},{"text":"前記トランスポーター関連遺伝子は、前記トランスポーター関連遺伝子の欠損によって発現制御され、かつ、前記エルゴステロール合成関連遺伝子は、前記エルゴステロール合成関連遺伝子の転写調節によって発現制御されることを特徴とする請求項2に記載の酵母細胞セット。","source":"WIPO_FULLTEXT","data_format":"ORIGINAL"},{"text":"前記酵母細胞は、二倍体であることを特徴とする請求項1に記載の酵母細胞セット。","source":"WIPO_FULLTEXT","data_format":"ORIGINAL"},{"text":"被検物質の標的候補分子を同定する方法であって、 請求項1に記載の酵母細胞セットに含まれる酵母細胞と、前記被検物質とを接触させる工程と、 前記被検物質との接触により表現型が変化した酵母細胞を選択する工程と、 前記選択された酵母細胞において変異している遺伝子を、第1の遺伝子と同定する工程と、 前記第1の遺伝子の転写産物及び翻訳産物の少なくとも一方を、前記被検物質の標的候補分子と同定する工程と、 を含む標的候補分子同定方法。","source":"WIPO_FULLTEXT","data_format":"ORIGINAL"},{"text":"被検物質の標的候補分子を同定する方法であって、 請求項1に記載の酵母細胞セットに含まれる酵母細胞と、前記被検物質とを接触させる工程と、 前記被検物質との接触により表現型が変化した酵母細胞を選択する工程と、 前記選択された酵母細胞において欠損又は変異している遺伝子を、第1の遺伝子と同定する工程と、 前記第1の遺伝子と対立遺伝子の関係にある遺伝子を、第2の遺伝子として同定する工程と、 前記第2の遺伝子の転写産物及び翻訳産物の少なくとも一方を、前記被検物質の標的候補分子と同定する工程と、 を含む標的候補分子同定方法。","source":"WIPO_FULLTEXT","data_format":"ORIGINAL"},{"text":"被検物質の標的候補分子を同定する方法であって、 請求項1に記載の酵母細胞セットに含まれる酵母細胞と、前記被検物質とを接触させる工程と、 前記被検物質との接触により表現型が変化した酵母細胞を選択する工程と、 前記選択された酵母細胞において欠損又は変異している遺伝子を、第1の遺伝子と同定する工程と、 前記第1の遺伝子と合成致死の関係にある遺伝子を、第2の遺伝子として同定する工程と、 前記第2の遺伝子の転写産物及び翻訳産物の少なくとも一方を、前記被検物質の標的候補分子と同定する工程と、 を含む標的候補分子同定方法。","source":"WIPO_FULLTEXT","data_format":"ORIGINAL"},{"text":"前記表現型の変化は、致死又は増殖抑制であることを特徴とする請求項7~請求項9のいずれか1項に記載の標的候補分子同定方法。","source":"WIPO_FULLTEXT","data_format":"ORIGINAL"},{"text":"前記酵母細胞を選択する工程が、 (1)前記被検物質非存在下における細胞数に関する指標の時間に対するコントロール曲線の関数F(t)と、前記被検物質存在下における細胞数に関する指標の時間に対するテスト曲線の関数G(t)と、を入手する工程と、 (2)式(F(t)-G(t))の積分値を算出して、エリア値を得る工程と、 (3)前記エリア値をもとに、表現型が変化した酵母細胞を選択する工程と、 を含むことを特徴とする請求項10に記載の標的候補分子同定方法。","source":"WIPO_FULLTEXT","data_format":"ORIGINAL"},{"text":"被検物質の酵母細胞に対する作用機序を解析する方法であって、 請求項7~請求項9のいずれか1項に記載の標的候補分子同定方法により、被検物質の標的候補分子を同定する工程と、 前記標的候補分子の機能を同定する工程と、 前記標的候補分子の機能に基づいて、被検物質の酵母細胞に対する作用機序を解析する工程と、 を含む被検物質の作用機序解析方法。","source":"WIPO_FULLTEXT","data_format":"ORIGINAL"},{"text":"目的とする分子の機能に影響を与える物質のスクリーニング方法であって、 請求項1に記載の酵母細胞セットに含まれる酵母細胞と、被検物質とを接触させる工程と、 前記被検物質との接触により表現型が変化した酵母細胞を選択する工程と、 前記選択された酵母細胞において変異している遺伝子を、第1の遺伝子と同定する工程と、 前記第1の遺伝子と、前記目的とする分子を転写産物あるいは翻訳産物とする遺伝子とが一致する被検物質を選択する工程と、 を含むスクリーニング方法。","source":"WIPO_FULLTEXT","data_format":"ORIGINAL"},{"text":"目的とする分子の機能に影響を与える物質のスクリーニング方法であって、 請求項1に記載の酵母細胞セットに含まれる酵母細胞と、被検物質とを接触させる工程と、 前記被検物質との接触により表現型が変化した酵母細胞を選択する工程と、 前記選択された酵母細胞において欠損又は変異している遺伝子を、第1の遺伝子と同定する工程と、 前記第1の遺伝子と対立遺伝子の関係にある遺伝子を第2の遺伝子として同定する工程と、 前記第2の遺伝子と、前記目的とする分子を転写産物あるいは翻訳産物とする遺伝子とが一致する被検物質を選択する工程と、 を含むスクリーニング方法。","source":"WIPO_FULLTEXT","data_format":"ORIGINAL"},{"text":"目的とする分子の機能に影響を与える物質のスクリーニング方法であって、 請求項1に記載の酵母細胞セットに含まれる酵母細胞と、被検物質とを接触させる工程と、 前記被検物質との接触により表現型が変化した酵母細胞を選択する工程と、 前記選択された酵母細胞において欠損又は変異している遺伝子を、第1の遺伝子と同定する工程と、 前記第1の遺伝子と合成致死の関係にある遺伝子を第2の遺伝子として同定する工程と、 前記第2の遺伝子と、前記目的とする分子を転写産物あるいは翻訳産物とする遺伝子とが一致する被検物質を選択する工程と、 を含むスクリーニング方法。","source":"WIPO_FULLTEXT","data_format":"ORIGINAL"},{"text":"前記表現型の変化は、致死又は増殖抑制である請求項13~請求項15のいずれか1項に記載のスクリーニング方法。","source":"WIPO_FULLTEXT","data_format":"ORIGINAL"},{"text":"前記酵母細胞を選択する工程が、 (1)前記被検物質非存在下における細胞数に関する指標の時間に対するコントロール曲線の関数F(t)と、前記被検物質存在下における細胞数に関する指標の時間に対するテスト曲線の関数G(t)と、を入手する工程と、 (2)式(F(t)-G(t))の積分値を算出して、エリア値を得る工程と、 (3)前記エリア値をもとに、表現型が変化した酵母細胞を選択する工程と、 を含むことを特徴とする請求項16に記載のスクリーニング方法。","source":"WIPO_FULLTEXT","data_format":"ORIGINAL"}]},"claim_lang":["ja"],"has_claim":true,"description":{"ja":{"text":"Technical Field 本発明は、酵母細胞セット、並びに、標的候補分子同定方法、作用機序解析方法及びスクリーニング方法に関する。 Background Art 被検物質が細胞に作用するメカニズムおよびその標的分子の同定は、ゲノム構造が明らかになった現在でも困難な課題の一つである。最近、DNAマイクロアレイ等のポストゲノム技術の進展により、被検物質の作用をゲノムワイドに解析する試みがなされてきている(例えば、非特許文献1参照)。この中で、多くのヒト相同遺伝子を持ち遺伝学的手法が使える出芽酵母サッカロミセス・セレビジエ(S.cerevisiae、以下、「酵母」と称する場合がある)は、被検物質の作用メカニズム解明に有用な道具と考えられてきた(例えば、非特許文献2参照)。 最近、酵母の全遺伝子約6000種を一種ずつ破壊するプロジェクトが完了し(例えば、非特許文献3参照)、これらの酵母を用いたシステムが注目されている。前記プロジェクトの結果、酵母ゲノム上に存在する約6000種の遺伝子のうち、約1200遺伝子は、生存に必須の遺伝子、即ち、これらの遺伝子を一つでも破壊すると、当該酵母が致死となる遺伝子(必須遺伝子)であることが明らかになった。一方、残りの約4800遺伝子は、その遺伝子の一つを破壊しても、当該酵母が通常の培地中での増殖が可能であり、当該酵母が致死とならない遺伝子(非必須遺伝子)であることが明らかになった。 例えば、ある被検物質を、約4800種の非必須遺伝子を破壊した株それぞれに作用させたとき、特異的にその被検物質の影響を受ける非必須遺伝子破壊株があれば、その遺伝子がその被検物質の作用に関連していることがわかる。ここで、非必須遺伝子とは、遺伝子を破壊(二倍体細胞の場合には2本の対立遺伝子の双方を破壊、一倍体細胞の場合には1本の遺伝子を破壊)しても細胞が増殖できる遺伝子をいう。実際に、この原理を用いた被検物質の作用機序解析法が次々と報告されてきている(例えば、非特許文献4~7参照)。また、様々な被検物質について被検物質の感受性株プロファイリングを行い、これらを比較することで、ターゲット未知の被検物質の作用点が見えてくる可能性が報告されている(例えば、非特許文献7参照)。 上記のような目的に用いられる酵母株は一般にノックアウト酵母(Yeast knockout strain;YKO)と呼ばれ、YKOコレクションとして市販されている。 酵母細胞は自然界で様々な低分子化合物に晒されながら生存するために、酵母細胞にとっての毒物となる低分子化合物から身を守る仕組みを備えている。例えば細胞内に低分子化合物が進入してきた場合、これを細胞外へ排出するポンプ(以下、「トランスポーター」ということがある)を機能させて、低分子化合物から身を守っている。また酵母細胞においては、細胞膜の組成が哺乳類細胞と異なっている。具体的にはコレステロールの代わりにエルゴステロールが含まれているため、酵母細胞における低分子化合物の細胞膜透過性は、哺乳類細胞に比べて著しく低下している。これらの発達した仕組みにより、酵母細胞は哺乳類細胞に比べて一般に薬物(低分子化合物)の影響を受け難いことが知られている。例えば、薬物によってはその作用濃度の差が100倍程度の場合もある。 このような酵母細胞における薬物感受性の低さは、YKOを用いた評価方法を多くの薬物に適用する際に大きな壁となっていた。 酵母細胞の薬物感受性を向上させる方法として、ABC(ATP Binding Cassette)トランスポーターであるPdr5pの発現を誘導する転写因子Pdr1p及びPdr3pの発現を抑制する方法が報告されている(例えば、非特許文献8参照)。また、酵母細胞膜の構成成分であるエルゴステロールを合成する経路の酵素Erg6pの発現を抑制することで薬物透過性が上がり、酵母の薬物感受性が高くなることが知られている(例えば、特許文献1参照)。 Disclosure of Invention 本発明の課題は、薬物感受性が著しく向上した酵母遺伝子破壊株セットを提供することである。また、本発明の別の課題は、薬物感受性が著しく向上した酵母遺伝子破壊株セットを用いた高感度な被検物質の標的候補分子同定方法、作用機序解析方法及び目的とする分子の機能に影響を与える物質のスクリーニング方法を提供することである。 本発明者らは、従来の酵母遺伝子破壊株セットに含まれる各々の酵母細胞に対して、薬物感受性関連遺伝子の少なくとも1種を更に発現制御することで、本発明の課題が解決できることを見出し、本発明を完成させた。 すなわち、本発明の具体的手段は以下の通りである。 本発明の第1の態様は、2種以上の酵母細胞からなる酵母細胞セットであって、前記2種以上の酵母細胞の各々が相互に異なる遺伝子の少なくとも1つの遺伝子を欠損又は変異し、かつ、前記2種以上の酵母細胞のすべてが薬物感受性関連遺伝子の少なくとも1種を発現制御された薬物高感受性酵母細胞である酵母細胞セットである。 前記薬物感受性関連遺伝子は、トランスポーター関連遺伝子及びエルゴステロール合成関連遺伝子から選ばれる少なくとも1種であることが好ましい また、前記トランスポーター関連遺伝子が、PDR1及びPDR3であることが好ましく、前記エルゴステロール合成関連遺伝子が、ERG6又はERG3であることもまた好ましい。 また、前記トランスポーター関連遺伝子は、前記トランスポーター関連遺伝子の欠損によって発現制御され、かつ、前記エルゴステロール合成関連遺伝子は、前記エルゴステロール合成関連遺伝子の転写調節によって発現制御されることが好ましい。 更に前記酵母細胞は、二倍体であってもよい。 本発明の第2の態様は、被検物質の標的候補分子を同定する方法であって、前記酵母細胞セットに含まれる少なくとも1種の酵母細胞と、前記被検物質とを接触させる工程と、前記被検物質との接触により表現型が変化した酵母細胞を選択する工程と、前記選択された酵母細胞において変異している遺伝子を、第1の遺伝子と同定する工程と、前記第1の遺伝子の転写産物及び翻訳産物の少なくとも一方を、前記被検物質の標的候補分子と同定する工程と、を含む被検物質の標的候補分子同定方法である。 本発明の第3の態様は、被検物質の標的候補分子を同定する方法であって、前記酵母細胞セットに含まれる少なくとも1種の酵母細胞と、前記被検物質とを接触させる工程と、前記被検物質との接触により表現型が変化した酵母細胞を選択する工程と、前記選択された酵母細胞において欠損又は変異している遺伝子を、第1の遺伝子と同定する工程と、前記第1の遺伝子と対立遺伝子の関係にある遺伝子を、第2の遺伝子として同定する工程と、前記第2の遺伝子の転写産物及び翻訳産物の少なくとも一方を、前記被検物質の標的候補分子と同定する工程と、を含む被検物質の標的候補分子同定方法である。 本発明の第4の態様は、被検物質の標的候補分子を同定する方法であって、前記酵母細胞セットに含まれる少なくとも1種の酵母細胞と、前記被検物質とを接触させる工程と、前記被検物質との接触により表現型が変化した酵母細胞を選択する工程と、前記選択された酵母細胞において欠損又は変異している遺伝子を、第1の遺伝子と同定する工程と、前記第1の遺伝子と合成致死の関係にある遺伝子を、第2の遺伝子として同定する工程と、前記第2の遺伝子の転写産物及び翻訳産物の少なくとも一方を、前記被検物質の標的候補分子と同定する工程と、を含む被検物質の標的候補分子同定方法である。 本発明の第5の態様は、被検物質の酵母細胞に対する作用機序を解析する方法であって、前記標的候補分子同定方法により、被検物質の標的候補分子を同定する工程と、前記標的候補分子の機能を同定する工程と、前記標的候補分子の機能に基づいて、被検物質の酵母細胞に対する作用機序を解析する工程と、を含む被検物質の作用機序解析方法である。 本発明の第6の態様は、目的とする分子の機能に影響を与える物質のスクリーニング方法であって、前記酵母細胞セットに含まれる酵母細胞と、被検物質とを接触させる工程と、前記被検物質との接触により表現型が変化した酵母細胞を選択する工程と、前記選択された酵母細胞において変異している遺伝子を、第1の遺伝子と同定する工程と、前記第1の遺伝子と、前記目的とする分子を転写産物あるいは翻訳産物とする遺伝子とが一致する被検物質を選択する工程と、を含むスクリーニング方法である。 本発明の第7の態様は、目的とする分子の機能に影響を与える物質のスクリーニング方法であって、前記酵母細胞セットに含まれる酵母細胞と、被検物質とを接触させる工程と、前記被検物質との接触により表現型が変化した酵母細胞を選択する工程と、前記選択された酵母細胞において欠損又は変異している遺伝子を、第1の遺伝子と同定する工程と、前記第1の遺伝子と対立遺伝子の関係にある遺伝子を第2の遺伝子として同定する工程と、前記第2の遺伝子と、前記目的とする分子を転写産物あるいは翻訳産物とする遺伝子とが一致する被検物質を選択する工程と、を含むスクリーニング方法である。 本発明の第8の態様は、目的とする分子の機能に影響を与える物質のスクリーニング方法であって、前記酵母細胞セットに含まれる酵母細胞と、被検物質とを接触させる工程と、前記被検物質との接触により表現型が変化した酵母細胞を選択する工程と、前記選択された酵母細胞において欠損又は変異している遺伝子を、第1の遺伝子と同定する工程と、前記第1の遺伝子と合成致死の関係にある遺伝子を第2の遺伝子として同定する工程と、前記第2の遺伝子と、前記目的とする分子を転写産物あるいは翻訳産物とする遺伝子とが一致する被検物質を選択する工程と、を含むスクリーニング方法である。 また、本発明の第2~第8の態様における前記表現型の変化は、致死又は増殖抑制であることが好ましい。 更に、前記酵母細胞を選択する工程が、(1)前記被検物質非存在下における細胞数に関する指標の時間に対するコントロール曲線の関数F(t)と、前記被検物質存在下における細胞数に関する指標の時間に対するテスト曲線の関数G(t)と、を入手する工程と、(2)式(F(t)-G(t))の積分値を算出して、エリア値を得る工程と、(3)前記エリア値をもとに、表現型が変化した酵母細胞を選択する工程と、を含むことが好ましい。 本発明によれば、薬物感受性が著しく向上した酵母遺伝子破壊株セットを提供することができる。また、本発明によれば、薬物感受性が著しく向上した酵母遺伝子破壊株セットを用いた高感度な被検物質の標的候補分子同定方法、作用機序解析方法及び目的とする分子の機能に影響を与える物質のスクリーニング方法を提供することができる。 Brief Description of Drawings MATa型バリアフリーYDSの作製手順を示す概略図である。 MATα型バリアフリーYDSの作製手順を示す概略図である。 MATa型スーパーバリアフリーYDSの作製手順を示す概略図である。 薬物感受性関連遺伝子破壊株のロバスタチンに対する感受性を示すグラフである。 薬物感受性関連遺伝子破壊株のラパマイシンに対する感受性を示すグラフである。 Best Mode of Carrying Out the Invention 本発明の酵母細胞セットは、2種以上の酵母細胞からなり、前記2種以上の酵母細胞の各々が相互に異なる遺伝子の少なくとも1種を欠損又は変異し、かつ、前記2種以上の酵母細胞のすべてが薬物感受性関連遺伝子の少なくとも1種を発現制御された薬物高感受性酵母細胞であることを特徴とする。 かかる構成の酵母細胞セットは、薬物感受性が著しく向上した酵母遺伝子破壊株セットである。 本発明の酵母細胞セットは2種以上の酵母細胞からなるが、後述する被検物質の標的候補分子同定方法において、より効率的、より高精度に標的候補分子が同定可能であるという点から、1000種以上の酵母細胞からなることが好ましく、2000種以上の酵母細胞からなることがより好ましく、3000種以上の酵母細胞からなることが更に好ましい。 本発明における2種以上の酵母細胞においては、各々の酵母細胞が相互に異なる遺伝子の少なくとも1種を欠損又は変異している。このような酵母細胞からなる酵母細胞セットを用いることで、後述のようにして被検物質の標的候補分子を同定することができる。 本発明における酵母細胞は一倍体であっても二倍体であってもよく、二倍体である場合、必須遺伝子においては対立遺伝子の片方を欠損又は変異していることが好ましい。この場合には、必須遺伝子についても転写産物あるいは翻訳産物を標的候補分子として同定することができる。また、非必須遺伝子においては対立遺伝子の両方を欠損又は変異していることもまた好ましい。 本発明における、2種以上の酵母細胞からなり、前記2種以上の酵母細胞の各々の酵母細胞が相互に異なる遺伝子の少なくとも1種を欠損又は変異している酵母細胞セットは、例えば、Science 2001, 294, 2364-2368に記載方法で作製することができる。また、インビトロジェン社製#95401.H2およびオープンバイオシステム社製#YSC1066として入手することができる。 本発明の酵母細胞セットに含まれるすべての酵母細胞は、薬物感受性関連遺伝子の少なくとも1種が発現制御された高薬物感受性酵母細胞となっている。 本発明における薬物感受性関連遺伝子とは、酵母細胞の薬物感受性を直接的又は間接的に制御可能な遺伝子であって、発現抑制又は発現過剰によって致死とならない限りいかなる遺伝子であってもよい。例えば、細胞内からの薬物排出に関与する遺伝子、細胞膜の薬物透過性に関与する遺伝子、ストレス応答に関与する遺伝子等を挙げることができる。より具体的には、トランスポーター関連遺伝子、エルゴステロール合成関連遺伝子、ストレス応答関連遺伝子等を挙げることができる。 本発明における薬物感受性関連遺伝子としては、薬物感受性のより効果的な向上の点から、トランスポーター関連遺伝子及びエルゴステロール合成関連遺伝子から選ばれる少なくとも1種であることが好ましく、トランスポーター関連遺伝子及びエルゴステロール合成関連遺伝子の両方であることがより好ましい。 また、本発明における薬物感受性関連遺伝子としては、同種の遺伝子を2種以上用いることもできる。 本発明におけるトランスポーターとは、細胞膜に存在する膜タンパク質であって輸送基質の細胞膜通過に関与するタンパク質をいう。トランスポーターには、ATPの加水分解エネルギーを利用して輸送を行うABCトランスポーターと、ATPの加水分解エネルギーを利用しないで輸送を行うSLCトランスポーターがあるが、本発明においては、ABCトランスポーターであることが好ましい。 本発明におけるトランスポーター関連遺伝子としては、例えば、トランスポーターを構成するタンパク質をコードする遺伝子、トランスポーター遺伝子の転写因子をコードする遺伝子、トランスポーターの活性を制御するタンパク質をコードする遺伝子、トランスポーターの細胞膜表面への発現を制御する遺伝子等を挙げることができる。 本発明においては、トランスポーター関連遺伝子がABCトランスポーターの1種であるpdr5pをコードするPDR5遺伝子に関連する遺伝子であることが好ましい。PDR5関連遺伝子の中でも、PDR1及びPDR3であることがより好ましい。 ここでPDR1及びPDR3は、PDR5遺伝子のマスター転写因子であるpdr1pとprd3pとをそれぞれコードする遺伝子を意味する。 酵母細胞におけるpdr1p及びprd3pとしては、例えば、酵母がサッカロミセス・セレビジエの場合、GenBank Accession No.CAA96713及びGenBank Accession No. CAA84822として公知のアミノ酸配列を有するものを挙げることができる。 またエルゴステロール合成関連遺伝子としては、例えば、エルゴステロール合成酵素タンパク質をコードする遺伝子、エルゴステロール合成酵素の転写因子をコードする遺伝子、エルゴステロール合成酵素の活性を制御する遺伝子等を挙げることができる 本発明においては、エルゴステロール合成関連遺伝子がエルゴステロール合成酵素タンパク質をコードする遺伝子であることが好ましい。エルゴステロール合成酵素タンパク質をコードする遺伝子としては、酵母がサッカロミセス・セレビジエの場合、ERG6又はERG3であることが好ましく、ERG6であることがより好ましい。ここでERG6及びERG3は、それぞれエルゴステロール合成酵素の一つであるerg6p及びerg3pをコードする遺伝子である。本発明におけるerg6p及びerg3pとしては、例えば、GenBank Accession No.CAA89944、CAA97586として公知のアミノ酸配列を有するものが挙げられる。 また、ストレス応答関連遺伝子としては、例えば、YAP1(GenBank Accession No.CAA89945)等を挙げることができる。 本発明において前記薬物感受性関連遺伝子が発現制御されているとは、前記薬物感受性関連遺伝子の一部もしくはすべてが欠損していること、又は、前記薬物感受性関連遺伝子が転写調節によって発現制御されていることを意味する。 薬物感受性関連遺伝子の一部が欠損しているとは、薬物感受性関連遺伝子がコードするタンパク質がその機能を発揮できない状態となる程度に、その遺伝子配列の一部を欠損していることを意味する。また、機能を発揮できない状態とは、薬物に対する感受性が上昇する程度に機能が抑制された状態にあればよい。 また本発明において、前記薬物感受性関連遺伝子の転写制御による発現制御は、薬物感受性関連遺伝子が誘導可能に発現抑制されていることが好ましい。薬物感受性関連遺伝子が誘導可能に発現抑制されているとは、発現が抑制された状態と、発現が誘導された状態とが、外部因子により調節可能であることをいう。「発現が抑制された状態」とは、薬物感受性が上昇する程度に薬物感受性関連遺伝子の発現が抑制されていればよく、例えば、薬物感受性関連遺伝子の発現量が、野生株または非改変株の10%以下に低下した状態が好ましい。また、「発現が誘導された状態」とは、例えば、薬物感受性関連遺伝子の発現量が、野生株または非改変株と同程度まで誘導された状態が好ましく、野生株または非改変株における発現量の80%以上に誘導された状態がより好ましい。薬物感受性関連遺伝子の発現量は、例えば、ノーザンブロット、RT-PCR等公知の技術を用いて確認することができる。 薬物感受性関連遺伝子の発現量を調節する方法としては、薬物感受性関連遺伝子の転写を調節する方法が挙げられる。薬物感受性関連遺伝子の転写を調節する方法としては、公知の方法を特に制限なく用いることができる。具体的には例えば、テトラサイクリン遺伝子発現誘導系を用いる方法及び誘導可能なプロモーターを用いる方法等を挙げることができる。 本発明において用いることができる、誘導可能なプロモーターを用いた薬物感受性関連遺伝子の転写調節方法としては、例えば、国際公開第2006/046694号に記載の方法を挙げることができる。 本発明においては、薬物感受性と作製可能な薬物高感受性酵母株の種類の点とから、前記薬物感受性関連遺伝子の発現制御が、前記トランスポーター関連遺伝子の欠損による発現制御であって、かつ、前記エルゴステロール合成関連遺伝子の転写調節によって発現制御であることが好ましい。 本発明において、薬物感受性関連遺伝子が誘導可能なプロモーターによって転写調節される場合、薬物感受性関連遺伝子に加えて、形質転換された酵母細胞株を選択するためのマーカー遺伝子も前記プロモーターによって転写調節されることが好ましい。これにより、本発明の酵母細胞セットを用いたバイオアッセイにおいて、マーカー遺伝子の影響を効果的に排除することができる。 前記マーカー遺伝子としては、KanMX6、MPR1、PPR1+等公知のマーカー遺伝子を特に制限なく用いることができる。本発明においては、選択効率の点から、PPR1+であることが好ましい。 特に、本発明における薬物高感受性酵母細胞としては、前記PDR1遺伝子及びPDR3遺伝子の両方が欠損している状態にあり、かつ前記ERG6遺伝子が誘導可能に発現抑制されている状態にある酵母細胞であることがより好ましい。これにより、より高い薬物感受性を有する酵母細胞とすることができる。また、良好な接合効率によって、より多くの薬物高感受性酵母細胞株が作製可能になる。 本発明の酵母細胞セットが一倍体酵母細胞からなる場合、酵母細胞の性(接合型)はa型又はα型となる。性がa型の酵母細胞からなる酵母細胞セットは、例えば、Science, 2001, 294, 2364-2368.に記載の方法によって作製することができる。一方、性がα型の酵母細胞からなる酵母細胞セットは、例えば、前記MATa遺伝子を有する酵母細胞からなる酵母細胞セットの作製において、マーカー遺伝子としてURA3遺伝子を用い、5-FOA(5-Fluoroorotic acid)を用いた対抗選択を行うことによって作製することができる。すなわち5-FOAはURA3遺伝子の遺伝子産物により毒性化合物に変換されるため、培地に5-FOAを添加することで、URA3遺伝子を発現する細胞のみを選択的に除外することができる。 本発明における一倍体の酵母細胞の選択においては、選択培地による選択を少なくとも2回行うことが好ましく、中でも、シングルコロニーを選択する操作を少なくとも1回行うことがより好ましい。これにより、野生型遺伝子を有する二倍体酵母細胞の混入をより効果的に防ぐことができる。 本発明においては、二倍体酵母細胞の作製効率の観点から、マーカー遺伝子としてURA3遺伝子を用いることが好ましい。例えば、MFA1プロモーターによって転写制御されるURA3遺伝子を導入することにより、a型の酵母細胞特異的にURA3遺伝子が発現し、ウラシルを含まない(Ura - )の培地によりa型の酵母細胞が、また、5-FOAを含む培地によりα型の酵母細胞を選択できる。すなわち、a型の酵母細胞セットを作製する工程において、α型の酵母細胞セットを同時に作製することができる。 また、プロモーターとしてMFA1の代わりにMFα1プロモーターを使用することで、同様にしてα型の酵母細胞セットを作る過程においてa型の酵母細胞セットを作ることができる。 本発明の酵母細胞セットは、例えば、薬物感受性関連遺伝子の少なくとも1種が発現制御されたパートナー株を作製し、これを既存の酵母遺伝子破壊株(YKO)セットに含まれる各々の酵母細胞株と掛け合わせることで作製することができる。本発明においては、前記ERG6が誘導可能に発現制御されていることにより、より効率的に薬剤高感受性酵母細胞を作製することができる。 上記薬物感受性関連遺伝子の少なくとも1種が、発現制御されたパートナー株は、例えば、PCRによる効率的遺伝子破壊アレルの作製法(Baudin A et.al., Nucl.Acid Res., 1993, 21, 3329-3330.)に記載の方法を用いることで、薬物感受性関連遺伝子の少なくとも1種が破壊されたパートナー株として作製することができる。 また、薬物感受性関連遺伝子の少なくとも1種が誘導可能に発現抑制されたパートナー株は、例えば、国際公開第2006/046694号に記載の方法で作製することができる。 また、薬物感受性関連遺伝子の少なくとも1種が発現制御され、更に別の遺伝子変異を有する酵母細胞株は、例えば、Science. 2001 Dec 14;294(5550):2364-2368(トロント大学のBooneらによるSynthetic Genetic Array (SGA)法の論文)に記載された方法に準じて行うことができる。 二倍体の酵母細胞は、一倍体の酵母細胞を掛け合わせる(接合する)ことにより作製できる。例えば、非必須遺伝子の対立遺伝子の両方を欠損又は変異しているホモ欠損二倍体からなる薬物高感受性酵母細胞は、マーカー遺伝子としてURA3遺伝子を用いて非必須遺伝子を欠失したa型の酵母細胞とα型の酵母細胞を上記のようにして同時に作製し、これらを接合することにより作製できる。 また、必須遺伝子における対立遺伝子の片方を欠損又は変異しているヘテロ欠損二倍体からなる薬物高感受性酵母細胞は、例えば以下のようにして作製することができる。欠損又は変異している前記必須遺伝子をプラスミドとして薬物高感受性ではないヘテロ欠損二倍体酵母細胞株に導入した後、胞子形成させる。形成された胞子から、前記必須遺伝子を欠損し且つ前記プラスミドを有する一倍体酵母細胞株を選択する。選択した一倍体酵母細胞株を上記薬物感受性関連遺伝子の少なくとも1種が破壊されたパートナー株と接合、胞子形成した後、例えばa型酵母細胞株を選択する。選択した酵母細胞株を再び上記パートナー株と接合して二倍体細胞株とした後、導入したプラスミドを除去することで作製することができる。 上記の作製方法における具体的な操作方法は、例えば、Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, NY、Methods in Yeast Genetics: A Cold Spring Harber Laboratory Course Manual, 2000 Edition等に記載の方法に従って行うことができる。 本発明の第1の被検物質の標的候補分子同定方法は、上記酵母細胞セットに含まれる酵母細胞と被検物質とを接触させる工程と、被検物質との接触により表現型が変化した酵母細胞を選択する工程と、前記選択された酵母細胞において変異している遺伝子を、第1の遺伝子と同定する工程と、前記第1の遺伝子の転写産物及び翻訳産物の少なくとも一方を被検物質の標的候補分子として同定する工程とを含むことを特徴とする。 本発明の第1の標的候補分子同定方法が上記構成であることにより、従来は同定不可能であった低濃度の薬物を用いた場合であっても、より高い精度で被検物質の標的候補分子を同定することができる。 本発明においては、上述の酵母細胞セットから選ばれる少なくとも1種の酵母細胞と被検物質と接触させる。前記酵母細胞の種類数に特に制限はないが、被検物質の標的候補分子を同定する精度と効率の点から、可能な限り多いほうが好ましい。例えば、好ましくは1000種以上、より好ましくは3000種以上とすることで、より高精度かつより効率的に被検物質の標的候補分子を同定することができる。 前記被検物質としては酵母細胞と接触させることができる限り、いかなる物質を用いることもできる。被検物質としては、例えば、天然由来の低分子化合物、天然由来の高分子化合物、合成低分子化合物、合成高分子化合物、ペプチド、タンパク質、多糖類、核酸等を挙げることができる。 前記酵母細胞と被検物質とを接触させる方法には、特に制限はなく、例えば、酵母細胞の培養液に被検物質の溶液を添加することで行うことができる。 前記表現型の変化としては、細胞数、コロニーの大きさ、形、色等、識別可能であればいかなる表現型の変化であってもよいが、検出効率の点から、致死又は増殖抑制であることが好ましい。 表現型が致死又は増殖抑制に変化した酵母細胞を選択する方法としては、例えば、酵母細胞の培養液中における、被検物質非存在下の細胞数に対する被検物質存在下の細胞数の割合を評価することで選択する方法を挙げることができる。このような評価は、培養液中の細胞数を実測することによって行ってもよく、細胞数を代替する指標を設定し、これを定量化することで行ってもよい。細胞数を代替する指標としては、例えば、グルコース消費量、培養液の濁度、細胞面積、蛍光強度等を挙げることができる。本発明においては、精度と簡便性の点から、培養液の濁度であることが好ましい。培養液の濁度は、例えば、600nm~660nmの吸光度を測定することで求めることができる。 細胞数を代替する指標を定量化する方法としては、例えば、所定の培養時間経過後の前記指標を測定する方法や、前記指標を経時的に測定して指標の変化速度を評価する方法等を挙げることができる。 本発明においては、前記酵母細胞を選択する工程が、(1)被検物質非存在下における細胞数に関する指標の時間に対するコントロール曲線の関数F(t)と、被検物質存在下における細胞数に関する指標の時間に対するテスト曲線の関数G(t)と、を入手する工程と、(2)式(F(t)-G(t))の積分値を算出して、エリア値を得る工程と、(3)前記エリア値をもとに、表現型が変化した酵母細胞を選択する工程と、を含むことが好ましい。これにより、より高い精度とより良好な再現性とで、表現型の変化した酵母細胞を選択することができる。 また本発明においては、精度と再現性の点から、前記(2)のエリア値を得る工程が、所定の時間内における式(F(t)-G(t))の積分値を算出してエリア値を得る工程であることが好ましく、所定の時間内における式(F(t)-G(t))の積分値をさらに所定の時間により除算してエリア値を得る工程であることがより好ましい。 本発明において、前記関数F(t)は、例えば、細胞数の指標を経時的に測定し、細胞数の指標の経時的変化を直線で近似することで求めることができる。また、同様にして前記関数G(t)を求めることができる。 前記エリア値を得る工程については、例えば、特開2006-141298号公報に記載の事項を、本発明においても好適に適用することができる。 前記選択された酵母細胞が欠損又は変異している遺伝子を、第1の遺伝子と同定する工程においては、選択された酵母細胞が有する遺伝子を、PCR等を用いた公知の方法で、欠損又は変異している遺伝子を同定することができる。また、本発明における酵母細胞として、欠損又は変異している遺伝子があらかじめ同定されている酵母細胞株を用いることで、選択された酵母細胞から該遺伝子を容易に同定することができる。 前記第1の遺伝子の転写産物及び翻訳産物の少なくとも一方を、前記被検物質の標的候補分子と同定する工程においては、例えば、第1の遺伝子の変異が、転写産物又は翻訳産物の機能を減弱するような変異である場合に、第1の遺伝子の転写産物及び翻訳産物の少なくとも一方を、前記被検物質の標的候補分子と同定することができる。 第1の遺伝子の変異として転写産物又は翻訳産物の機能を減弱するような変異を有する酵母細胞株としては、例えば、第1の遺伝子の変異によって温度感受性となった酵母細胞株や、第1の遺伝子の発現が不完全に抑制された酵母細胞株を挙げることができる。 また、本発明の第2及び第3の被検物質の標的候補分子同定方法は、上記酵母細胞セットに含まれる酵母細胞と被検物質とを接触させる工程と、被検物質との接触により表現型が変化した酵母細胞を選択する工程と、前記選択された酵母細胞において欠損又は変異している遺伝子を、第1の遺伝子と同定する工程と、前記第1の遺伝子と対立遺伝子の関係にある遺伝子、又は、前記第1の遺伝子と合成致死の関係にある遺伝子を第2の遺伝子として同定する工程と、前記第2の遺伝子の転写産物及び翻訳産物の少なくとも一方を被検物質の標的候補分子として同定する工程と、を含むことを特徴とする。 本発明の第2及び第3の標的候補分子同定方法が上記構成であることにより、従来は同定不可能であった低濃度の薬物を用いた場合であっても、より高い精度で被検物質の標的候補分子を同定することができる。 本発明の、第2及び第3の標的候補分子同定方法において、前記第1の標的分子同定方法と共通する工程については、第1の標的分子同定方法において説明した事項をそのまま適用することができる。 前記第1の遺伝子と対立関係にある遺伝子を第2の遺伝子として同定する工程においては、例えば、前記第1の遺伝子が必須遺伝子であって、酵母細胞株が二倍体の場合、前記第1の遺伝子と対立関係にある遺伝子を第2の遺伝子として同定することができる。 また、前記第1の遺伝子と合成致死の関係にある遺伝子を第2の遺伝子として同定する工程においては、例えば、前記第1の遺伝子が非必須遺伝子であって、酵母細胞株が一倍体又は二倍体の場合、前記第1の遺伝子と合成致死の関係にある遺伝子を第2の遺伝子として同定することができる。 ここで、合成致死とは、細胞中の複数種の遺伝子を同時に破壊すると致死に至る性質をいう。また、合成致死に至る遺伝子の組合せを合成致死の関係にあるという。また、対立関係にある遺伝子とは、二倍体細胞において、それぞれの遺伝子が相同の遺伝子座に属する遺伝子であって異なる遺伝子変異を有する関係にあることをいう。 また、前記第2の遺伝子の転写産物及び翻訳産物の少なくとも一方を、前記被検物質の標的候補分子と同定する工程においては、例えば、前記第1の遺伝子が欠損している場合には、前記第2の遺伝子の、転写産物及び翻訳産物の少なくとも一方を前記被検物質の標的候補分子と同定することができる。 本発明においては、例えば、非必須遺伝子破壊株を用い、合成致死(synthetic lethal)を利用して、被検物質に影響を受ける遺伝子及びタンパク質の少なくとも一方を同定することができる。 例えば、それぞれ非必須遺伝子である遺伝子Aまたは遺伝子Bの破壊株は、生育可能であるが、遺伝子Aおよび遺伝子Bを同時に破壊された株は、致死となる場合がある。このとき、遺伝子Aと遺伝子Bは、合成致死の関係にあるということができる。そして、例えば、遺伝子Bの破壊株に対して、遺伝子Aの転写産物および翻訳産物の少なくとも一方を阻害する被検物質を作用させると、その被検物質の濃度が、遺伝子Bを破壊していない株の生育を完全には阻害しない濃度であっても、遺伝子Bの破壊株においては生育阻害又は致死となる濃度であることが期待される。この原理を応用して、被検物質を非必須遺伝子破壊株に作用させたときに生育阻害又は致死となる株を同定すると、その株で破壊されている遺伝子と合成致死の関係にある遺伝子が明らかになる。すなわち被検物質の標的遺伝子が同定される。そして、当該合成致死の関係にある遺伝子の転写産物及び翻訳産物のすくなくとも一方が、その被検物質の標的候補分子となると考えられる(Hartwell et al, Science, 1997, 278:1064-8, Parsons et al, Nat Biotechnol, 2004,22:62-9)。 また、ある遺伝子と合成致死の関係にある遺伝子が知られていない場合であっても、公知である多数の非必須遺伝子破壊株に対する作用を網羅的に解析することによって、被検物質の標的遺伝子及び標的分子の少なくとも一方を推定することも可能である。例えば、すでに標的分子が明らかになっている物質を多数の非必須遺伝子破壊株に作用させ、網羅的に感受性パターンを取得しておく。この作業を標的分子が明らかになっている複数の物質について行い感受性パターンのセットを取得する。次に、標的候補分子の知られていない被検物質を多数の非必須遺伝子破壊株に作用させて網羅的に感受性パターンを取得し、先に取得した複数の物質の感受性パターンと比較する。その結果、被検物質により得られた感受性パターンと一致または類似した感受性パターンを示す物質が存在すれば、被検物質の標的候補分子が、当該物質の標的候補分子と同一であると考えられる。 さらには、例えば、ある特定の代謝経路に存在する遺伝子群の破壊株が特異的に感受性を示した場合、その代謝経路そのものか、もしくは代謝的に密接な関係のある経路に存在する遺伝子の転写産物及び翻訳産物の少なくとも一方が標的候補分子となる。 また、必須遺伝子について、2本ある対立遺伝子のうちの1本が破壊された株(以下、「ヘテロ欠損株」と称する場合がある)を用いて、被検物質に影響を受ける遺伝子及びタンパク質の少なくとも一方を検出することができる。ここで、必須遺伝子とは、2本の対立遺伝子の双方を破壊すると細胞が増殖できず死んでしまう遺伝子をいう。また、酵母の全遺伝子約6000種のうち約1200種の遺伝子は、必須遺伝子である。 例えば、必須遺伝子である遺伝子Cのヘテロ欠損株に対して、遺伝子Cの転写産物および翻訳産物の少なくとも一方を阻害する被検物質を作用させると、遺伝子Cの転写産物および翻訳産物の少なくとも一方の機能が低下する結果、被検物質に対して特異的な感受性を示す(Drug-induced haploinsufficiency;Giaever et al, Nature genetics, 1999,21:278-283)。この原理を応用して、被検物質をヘテロ欠損株に作用させたときに致死となる株を同定すると、その株で破壊されている遺伝子が明らかになる。そして、当該へテロ欠損株において破壊されている遺伝子の転写産物および翻訳産物の少なくとも一方が、その被検物質の標的候補分子となると考えられる。 さらに、非必須遺伝子破壊株を用いて、被検物質による増殖抑制に対する特異的な耐性化を利用して、被検物質に影響を受ける遺伝子およびタンパク質の少なくとも一方を検出することができる。例えば、被検物質が、あるタンパク質により修飾を受けた時のみ毒性を発揮するような場合、その修飾を行うタンパク質をコードする遺伝子を欠損した株では毒性は発揮されない。この場合、この遺伝子破壊株は被検物質に対して特異的な耐性を示すことになる。 ここで修飾とは、例えば、被検物質の酵素的な化学修飾、被検物質とタンパク質との結合による毒性複合体の生成などが挙げられる。前者の例としては、URA3遺伝子産物による5-FOAの5-FUへの変換を挙げることができ、URA3遺伝子欠損により5-FOA耐性が付与される。また、後者の例としてはラパマイシンのFPR1タンパク質への結合などが挙げられ、FPR1遺伝子欠損によりラパマイシン耐性が付与される(Heitman J, et al. (1991) FK 506-binding protein proline rotamase is a target for the immunosuppressive agent FK 506 in Saccharomyces cerevisiae. Proc Natl Acad Sci U S A 88(5):1948-52)。 例えば、非必須遺伝子である遺伝子Dの破壊株に対して、遺伝子Dの転写産物および翻訳産物の少なくとも一方を阻害する被検物質を作用させると、その被検物質の濃度が野生株の生育が阻害される濃度であっても、当該破壊株の生育が阻害されないことがある。この原理を応用して、被検物質を非必須遺伝子破壊株に作用させたときに生育が阻害されない株を同定すると、その株で破壊されている遺伝子が明らかになる。そして、当該非必須遺伝子破壊株において破壊されている遺伝子の転写産物および翻訳産物の少なくとも一方が、その被検物質の標的候補分子または標的候補分子と同一の情報伝達経路に存在する分子となると考えられる(Heitman et al, Proc Natl Acad Sci U S A. 1991, 88:1948-52)。 本発明の被検物質の酵母細胞に対する作用機序を解析する方法は、上記標的候補分子同定方法により被検物質の標的候補分子を同定する工程と、前記標的候補分子の機能を同定する工程と、前記標的候補分子の機能から被検物質の酵母細胞に対する作用機序を解析する工程と、を含んで構成される。これにより、被検物質の酵母細胞に対する作用機序の解析を、効率的かつ高精度に行うことができる。 前記被検物質の標的候補分子を同定する工程については、上記被検物質の標的候補分子同定方法において説明した事項をそのまま適用することができる。 また、前記標的候補分子の機能を同定する方法は、例えば、標的候補分子をコードする遺伝子の遺伝子配列を、その機能が既知の遺伝子配列とその相同性を比較することで行うことができる。 更に、同定された標的分子の機能に基づいて、被検物質の酵母細胞に対する作用機序を解析することができる。例えば、標的分子の機能が特定の酵素の阻害作用である場合には、被検物質の酵母細胞に対する作用機序は、該酵素の阻害であることが推定できる。 本発明の第1のスクリーニング方法は、目的とする分子の機能に影響を与える物質をスクリーニングする方法であって、上記酵母細胞セットに含まれる少なくとも1種の酵母細胞と、被検物質とを接触させる工程と、前記被検物質との接触により表現型が変化した酵母細胞を選択する工程と、前記選択された酵母細胞において変異している遺伝子を、第1の遺伝子と同定する工程と、前記第1の遺伝子と前記標的候補分子の遺伝子とが一致する被検物質を選択する工程と、を含むことを特徴とする。これにより、より効率的に、より高精度で遺伝子産物である標的候補分子と特異的に作用する物質をスクリーニングすることができる。 また本発明の第2及び第3のスクリーニング方法は、目的とする分子の機能に影響を与える物質をスクリーニングする方法であって、上記酵母細胞セットに含まれる少なくとも1種の酵母細胞と、被検物質とを接触させる工程と、前記被検物質との接触により表現型が変化した酵母細胞を選択する工程と、前記選択された酵母細胞において欠損又は変異している遺伝子を、第1の遺伝子と同定する工程と、第1の遺伝子と対立遺伝子の関係にある遺伝子、又は、前記第1の遺伝子と合成致死の関係にある遺伝子を第2の遺伝子として同定する工程と、前記第2の遺伝子と前記標的候補分子の遺伝子とが一致する被検物質を選択する工程と、を含むことを特徴とする。これにより、より効率的に、より高精度で遺伝子産物である標的候補分子と特異的に作用する物質をスクリーニングすることができる ここで、目的とする分子の機能に影響を与える物質としては、天然由来の低分子化合物、天然由来の高分子化合物、合成低分子化合物、合成高分子化合物、ペプチド、タンパク質、多糖類、核酸等を挙げることができる。 本発明のスクリーニング方法においては、既述の標的候補分子同定方法と同様にして被検物質がその機能に影響を与える分子の遺伝子を同定することができる。また、同定された遺伝子とスクリーニングの標的候補分子の遺伝子とが一致する被検物質を選択することで、目的とする分子の機能に影響を与える物質を、被検物質の中からスクリーニングすることができる。 以下、本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。 (実施例1) <パートナー株の作製> (1)PDR1遺伝子とPDR3遺伝子とが破壊されたパートナー株の作製 PCRによる効率的遺伝子破壊アレルの作製法(Baudin A. et al. (1993) Nucl. Acid Res. 21:3329-3330)に記載の方法を用いて、以下のようにしてPDR1遺伝子とPDR3遺伝子とが破壊されたパートナー株を作製した。 BY4741株(MATa)のPDR3遺伝子座位をLEU2遺伝子にて置換することによりPDR3遺伝子を破壊した(以下、KE383という)。またBY4742株(MATα)のPDR1遺伝子座位をHIS3遺伝子にて置換することによりPDR1遺伝子を破壊した(以下、KE384という)。KE383株とKE384株を掛け合わせ胞子形成させてPDR1とPDR3とがともに破壊され、かつ、Δmet15であり、MATa型である株を作製した(以下、KE445という)。 (2)MFA1プロモーターにより発現誘導されるURA3遺伝子のCAN1領域への導入 まず、出芽酵母S. cerevisiae S288C(野生株)のゲノムDNAをテンプレートとし、(A)CAN1遺伝子に隣接した5'非翻訳領域約450塩基対を含む遺伝子断片、(B)MFA1遺伝子のプロモーター領域約400塩基対を含む遺伝子断片、(C)URA3遺伝子の翻訳領域全長を含む約800塩基対の遺伝子断片、(D)CAN1遺伝子に隣接した3'非翻訳領域約300塩基対を含む遺伝子断片をそれぞれPCR法にて増幅した。次に(A)断片と(B)断片、および(C)断片と(D)断片をそれぞれPCR法にて連結増幅し、(E)断片および(F)断片を得た。最後に(E)断片と(F)断片をPCR法にて連結増幅し、MFA1-URA3マーカーを含む約2000塩基対の(G)断片を得た。この(G)断片を用いてプラスミドを構築した。このプラスミドを上記KE445株に導入し、CAN1遺伝子が上記(G)断片により置換された酵母細胞株を作製した。 上記断片のPCR法による増幅に用いたプライマー配列を下記表1に示した。 上記により構築した酵母細胞株において、MFA1-URA3マーカーが働くことを確認したところ、接合型がMATαの場合はウラシル要求性であり、MATaの場合にはウラシル要求性が消失することを確認することができた。このMATα株をバリアフリーYKO作製のためのパートナー株(以下、KE458という)とした。 <MATa型バリアフリーYKO> 10倍希釈したパートナー株(50mlチューブ中のKE458に10mlのYPADを入れて3~7日間静置培養したもの)の各60μlをMultiMek(384ウェル対応分注機:Beckman Coulter社製)を用いて384ウェルプレートに植えた。ここに、384ウェルプレート中に1ウェル当たり1株として培養しているYKO株(インビトロジェン社製、95401.H2)5μlを、MultiMekを用いて添加し、25℃で2日間培養した。このプレートを3000rpm、2分間遠心し、MultiMekを用いて上清を捨てて、滅菌水20μlを加え懸濁した。この懸濁液から5μlを取り、滅菌水60μlと混和することにより希釈した。その希釈液の5μlを60μlの二倍体選択培地(SD-(Ura+,Met+)/G418)に添加し、30℃で1~3日間培養することにより二倍体細胞のみを生育させた。プレートを遠心し(3000rpm、2分間)、MultiMekを用いて上清を捨てて、滅菌水20μl加えて懸濁した。この懸濁液の10μlを分注ロボットShotMaster3000(武蔵エンジニアリング製、96spots/plate)を用いて寒天Spo培地上にスポットし、25℃で約1週間培養することにより胞子形成させた。 寒天Spo培地上にスポットされた胞子を、ディスポーザブル96ピンレプリケーター(Cat#473245、Nunc製)にて絡めとり、96ウェル丸底プレートに入った20μlの滅菌水中に懸濁した。この懸濁液の10μlをMATa選択寒天培地(SD-(Met+)/G418/canavanine)上にスポットし、30℃で7~10日間培養することにより、MATa遺伝子の接合型を持つ一倍体細胞コロニーを生育させた。生育してきた株をディスポーザブル96ピンレプリケーターにて絡めとり、100μlのMATa選択液体培地中に懸濁し、25℃で2~7日間培養した。その後、分注ロボットShotMaster3000にて384ウェルプレートに植え替えた。 上記で得られた株についてシクロヘキシミド感受性を調べたところ、バリアフリー化されていれば生育できないはずの50ng/mlで生育可能な株が存在することが判明した。これらの株についてPCRによるゲノムDNAチェックを行ったところ、MATa/MATaの二倍体細胞であって、PDR1もしくはPDR3の野生型遺伝子が、少なくとも一つ含まれていることが判明した。これら二倍体細胞を除去するために、全ての株についてシクロヘキシミド感受性を調べて50ng/mlで生育できない株を選択した。 これにより、PDR1遺伝子とPDR3遺伝子が破壊され、MATa遺伝子を有する酵母細胞3111株からなる酵母遺伝子破壊株セット(MATa型バリアフリーYKO)の作製に成功した(図1)。 (実施例2) <MATα型バリアフリーYKOの作製> 実施例1において、MATa遺伝子を有する酵母細胞を選択する代わりに、5-FOA(5-fluoroorotic acid)を用いたカウンターセレクションを行った以外は実施例2と同様にして、MATα遺伝子を有する酵母遺伝子破壊株セットを作製した。具体的には、MATa選択寒天培地(SD-(Met+)/G418/canavanine)の代わりにMATα選択寒天培地(SD-(Met+, Ura+)/G418/canavanine/5FOA)を用いることにより、PDR1遺伝子とPDR3遺伝子が破壊され、MATα遺伝子を有する酵母細胞1374株からなる酵母遺伝子破壊株セット(MATα型バリアフリーYKO)の作製に成功した(図2)。 (実施例3) <パートナー株の作製> (1)GAL10プロモーターにより制御されるERG6遺伝子の導入 ERG6遺伝子の調節領域にGAL10プロモーターが挿入されたパートナー株を作製するために、以下の遺伝子断片を作製した。 まずGAL10プロモーターは酵母ゲノムDNAを鋳型として、GAL10遺伝子と隣接するGAL1遺伝子の間の領域にプライマー(配列番号9、配列番号10)を設計し、PCRにより増幅した。また、遺伝子導入の際のマーカー遺伝子として、分裂酵母のL-アゼチジン-2-カルボン酸耐性遺伝子PPR1+を、GAL10プロモーターの後ろに連結した。さらに、ERG6のORFの5’側の領域にプライマー(配列番号11、配列番号12)を設計し、酵母ゲノムDNAを鋳型としてPCRで増幅したフラグメントをGAL10プロモーターの前に逆向きに連結した。また、YML007C-Aを含むERG6プロモーター領域にもプライマー(配列番号13、配列番号14)を設計し、PCRで増幅したフラグメントをppr1+遺伝子の後ろに逆向きに連結した。このフラグメントを上述のバリアフリーパートナー株KE458に導入し、染色体上のERG6遺伝子の5'非翻訳領域に正しく挿入された株を作製した。これにより、GAL1プロモーターによりERG6遺伝子が制御される株が作製された。これを親株(BY4741)に対してバッククロスを行い、スーパーバリアフリーYKO作製用パートナー株(以下、KE513という)とした。 KE513株の構築に用いたPCRプライマーの配列を下記表2に示した。 <MATa型スーパーバリアフリーYKOの作製> 10倍希釈したパートナー株(50mlチューブ中のKE513に10mlのYPADを入れて3~7日間静置培養したもの)の各60μlを、MultiMekを用いて384ウェルプレートに植えた。ここに、384ウェルプレート中に1ウェル当たり1株として培養しているYKO株(インビトロジェン社製、95401.H2)5μlを、MultiMekを用いて添加し、25℃で2日間培養した。このプレートを3000rpm、2分間遠心し、MultiMekを用いて上清を捨てて、滅菌水20μlを加え懸濁した。この懸濁液から5μlを取り、滅菌水60μlと混和することにより希釈した。その希釈液の5μlを60μlの二倍体選択培地(SD-(Ura+,Met+)/G418)に添加し、30℃で1~3日間培養することにより二倍体細胞のみを生育させた。プレートを遠心し(3000rpm、2分間)、MultiMekを用いて上清を捨てて、滅菌水20μl加えて懸濁した。この懸濁液の10μlを分注ロボットShotMaster3000(武蔵エンジニアリング製、96spots/plate)を用いて寒天Spo培地(胞子形成用寒天培地)上にスポットし、25℃で約1週間培養することにより胞子形成させた。 寒天Spo培地上にスポットされた胞子を、ディスポーザブル96ピンレプリケーター(Cat#473245、Nunc製)にて絡めとり、96ウェル丸底プレートに入った20μlの滅菌水中に懸濁した。この懸濁液の10μlをMATa選択寒天培地(SG-(Met+)/G418/canavanine/AZC)上にスポットし、30℃で7~10日間培養することにより、MATa遺伝子の接合型を持つ一倍体細胞コロニーを生育させた。 出現したコロニー群全体を96ピンレプリケーターで絡め取る代わりに、出現したコロニーを1株につき1つずつ爪楊枝でひろって新しいMATa選択寒天培地に植え継ぎ、30℃で7日間培養した。生育してきた株をディスポーザブル96ピンレプリケーターにて絡めとり、100μlのMATa選択液体培地中に懸濁し、25℃で2~7日間培養した。その後分注ロボットShotMaster3000にて384ウェルプレートに植え替えた。これらの株は全て25ng/mlのシクロヘキシミド存在下で生育できなかった。 以上により、PDR1遺伝子とPDR3遺伝子とが破壊され、ERG6遺伝子の発現がGAL10プロモーターによって制御され、MATa遺伝子を有する酵母細胞4044株からなる酵母遺伝子破壊株セット(MATa型スーパーバリアフリーYKO)の作製に成功した(図3)。 また、シングルコロニーを選択する操作を行うことにより、もともと存在比率が低いにも関わらず増殖スピードが早い二倍体酵母細胞の混入を効果的に防止することができることがわかる。 (実施例4) <二倍体バリアフリーYKOの作製> 上記実施例1で作製したMATa型バリアフリーYKOの酵母と、上記実施例2で作製した対応する非必須遺伝子を破壊したMATα型バリアフリーYKOの酵母とを掛け合わせることにより、非必須遺伝子を破壊した二倍体酵母遺伝子破壊株セット(二倍体バリアフリーYKO)を作製した。 (実施例5) <ロバスタチンに対する感受性の評価> 上記で作製したバリアフリーYKO(BF-YKO)およびスーパーバリアフリーYKO(SBF-YKO)の薬物感受性を確認するため、親株およびパートナー株を用いてロバスタチンによる増殖抑制効果に対する酵母の感受性変化を調べた。 96ウェルプレートに、ロバスタチン(Sigma-aldrich社、#M2147)の濃度が0.39μM~100μMの濃度範囲になるようにロバスタチン溶液を加えた。そこへYPAD中で室温にて2日間静置培養した親株(WT:BY4742、Open biosystems社、#YSC1049)、バリアフリー用パートナー株(BF:KE458)、およびスーパーバリアフリー用パートナー株(SBF:KE513)を、最終細胞数が2000倍希釈となるように添加し、30℃で静置培養した。 その後、620nmにおける吸光度をプレートリーダー(SUNRISE、テカン社製)にて経時的に48時間目まで測定した。細胞増殖抑制活性の算出には、特開2006-141298号公報に記載のエリアスコア法(ARS)を用いた。ARSにおいては、数値の大きいほうが、細胞増殖抑制活性が高いことを意味する。結果を図4に示した。 図4から、親株(WT)ではロバスタチン濃度が100μMであっても、わずかな細胞増殖抑制効果しか示さないのに対し、BF株では50μMで最大の抑制活性を示し、またSBF株では25μMで最大の抑制活性を示したことが分かる。 また、エリアスコアが約10となるロバスタチン濃度で比較すると、WT株に対しBF株で8倍、SBF株で16倍の高感受性化が達成されたことが分かる。 (実施例6) <スーパーバリアフリーYKOを用いたロバスタチン標的分子の同定及び作用機序解析> 上記で作製された4044株からなるスーパーバリアフリーYKO(SBF-YKO)を用いて、ロバスタチンの標的分子の同定を行った。SBF-YKOの各株を384ウェルプレート12枚に1ウェル当たり1株として順序良く並べて植えた。3~7日間静置培養することにより全ての株の細胞数を揃えた。これを196倍希釈して細胞希釈液とした。 一方、3.9μMのロバスタチンを含むYPAD培地20μlをそれぞれのウェルに添加した384ウェルプレートと、ロバスタチンを含まないYPAD培地20μlをそれぞれのウェルに添加した384ウェルプレートとを準備した。それぞれのウェルに作製した細胞希釈液の各5μlを添加した。この操作により、細胞濃度は1000倍希釈、また化合物濃度は3.125μMとなった。 これを25℃で培養し、培養開始後約22時間から48時間までの間、プレートリーダー(SpectraMax340PC384、モレキュラーデバイス社)を用いて、650nmにおける吸光度を経時的に測定した。得られたデータからエリアスコア(ARS)を算出し、感受性の順位づけをした。 その結果、ロバスタチンの標的分子であるHMG-CoA還元酵素をコードする遺伝子HMG1の破壊株が高い感受性を示す株として見出された。S. cerevisiaeにはHMG1以外に同じ酵素をコードするHMG2遺伝子が存在するため、HMG1を破壊しても酵母は致死とならないが、HMG2によって産生される同酵素量はHMG1のそれと比較して5分の1程度であり、HMG1破壊株中に残存した同酵素を阻害するロバスタチン濃度はHMG1遺伝子を持つ株と比較して低下することは容易に理解できる。 さらに、最も感受性の高い遺伝子破壊株としてBTS1破壊株が見出された。BTS1はファルネシル基転移酵素をコードしており、ステロール生合成経路上でHMG1の下流に存在する。BTS1破壊株では下流のイベントが滞っており、その結果HMG-CoA還元酵素の阻害効果が他の株に比べて強く現れたことが考えられる。 (実施例7) バリアフリーYKOを用いたロバスタチン標的分子の同定および作用機序解析 上記で作製された3011株からなるバリアフリーYKO(BF-YKO)を用いて、ロバスタチンの標的分子の同定を行った。BF-YKOの各株を384ウェルプレート12枚に1ウェル当たり1株として順序良く並べて植えた。3~7日間静置培養することにより全ての株の細胞数を揃えた。これを196倍希釈して細胞希釈液とした。 一方、3.9μM、7.8μM又は15.6μMのロバスタチンを含むYPAD培地20μlをそれぞれのウェルに添加した384ウェルプレートと、ロバスタチンを含まないYPAD培地20μlをそれぞれのウェルに添加した384ウェルプレートとを準備した。それぞれのウェルに作製した細胞希釈液の各5μlを添加した。この操作により、細胞濃度は1000倍希釈、また化合物濃度はそれぞれ3.125μM、6.25μM及び12.5μMとなった。 これを25℃で培養し、培養開始後約22時間から48時間までの間、プレートリーダー(SpectraMax340PC384、モレキュラーデバイス社)を用いて、650nmにおける吸光度を経時的に測定した。得られたデータからエリアスコア(ARS)を算出し、感受性の順位づけをした。 その結果、ロバスタチンの標的分子であるHMG-CoA還元酵素をコードする遺伝子HMG1の破壊株は、化合物濃度が6.25μM及び12.5μMの場合において、感受性を示す株として見出すことができた。このことからバリアフリーYKOを用いることにより、化合物濃度が低い場合であっても、ロバスタチンの標的分子探索が可能であることが分かる。 (比較例1) <YKOコレクションを用いたロバスタチン標的分子の同定及び作用機序解析> 実施例7において、BF-YKOの代わりに、市販の4847株からなるYKO(インビトロジェン社、#95401.H2)を用いた以外は、実施例7と同様にして、ロバスタチンの標的分子の同定を行った。 その結果、ロバスタチンの標的分子であるHMG-CoA還元酵素をコードする遺伝子HMG1の破壊株を、化合物濃度が3.125μM及び12.5μMのすべての場合において、感受性を示す株として見出すことはできなかった。また、BTS1破壊株についても同様に感受性を示す株として見出すことはできなかった。 (実施例8) <ラパマイシンに対する感受性の評価> 実施例5と同様にして、バリアフリーYKO(BF-YKO)およびスーパーバリアフリーYKO(SBF-YKO)の薬物感受性を確認するため、親株およびパートナー株を用いてラパマイシンによる増殖抑制効果に対する酵母の感受性変化を調べた。 96ウェルプレートに、ラパマイシン(Sigma-aldrich社、#R0395)の濃度が0.2nM~50nMの濃度範囲になるようにラパマイシン溶液を加えた。そこへYPAD中で室温にて2日間静置培養した親株(WT:BY4741、Open biosystems社、#YSC1048)、バリアフリー株(BF:KE457)、およびスーパーバリアフリー株(SBF:KE477)を、最終細胞数が1000倍希釈となるように添加し、30℃で静置培養した。 その後、620nmにおける吸光度をプレートリーダー(SUNRISE、テカン社製)にて経時的に48時間目まで測定した。細胞増殖抑制活性の算出には、特開2006-141298号公報に記載のエリアスコア法(ARS)を用いた。ARSにおいては、数値の大きいほうが、細胞増殖抑制活性が高いことを意味する。結果を図5に示した。 図5から、親株(WT)とBF株ではラパマイシン濃度が50nMで最大の細胞増殖抑制効果を示すのに対し、SBF株では6.25nMで最大の活性を示したことが分かる。 また、エリアスコアが約10となるラパマイシン濃度で比較すると、WT株に対しSBF株で8倍の高感受性化が達成されたことが分かる。 (実施例9) <スーパーバリアフリーYKOを用いたラパマイシン標的分子の同定及び作用機序解析> 実施例6と同様にして、スーパーバリアフリーYKO(SBF-YKO)を用いて、ラパマイシンの標的分子の同定を行った。SBF-YKOの各株を3~7日間静置培養することにより全ての株の細胞数を揃えた。これを196倍希釈して細胞希釈液とした。 一方、1.25nMのラパマイシンを含むYPAD培地20μlをそれぞれのウェルに添加した384ウェルプレートと、ラパマイシンを含まないYPAD培地20μlをそれぞれのウェルに添加した384ウェルプレートとを準備した。それぞれのウェルに作製した細胞希釈液の各5μlを添加した。この操作により、細胞濃度は1000倍希釈、また化合物濃度は1nMとなった。 その結果、ラパマイシンの濃度が1nMの場合において、ラパマイシンの標的分子であるTORキナーゼをコードする遺伝子TOR1の破壊株が、高い感受性を示す株として見出された。 S. cerevisiaeにはTOR1以外に同じ酵素をコードするTOR2遺伝子が存在するため、TOR1を破壊しても酵母は致死とならないが、TOR1破壊株中に残存した同酵素を阻害するラパマイシン濃度はTOR1遺伝子を持つ株と比較して低下することは容易に理解できる。 また、TOR2は生存に必須であるため、非必須遺伝子の破壊株のセットであるSBF-YKO中にはTOR2破壊株は存在せず、SBF-YKOを用いた検討ではTOR2破壊株は感受性株として見出されなかった。 (比較例2) <YKOコレクションを用いたラパマイシン標的分子の同定及び作用機序解析> 実施例9において、SBF-YKOの代わりに、市販の4847株からなるYKO(インビトロジェン社、#95401.H2)を用い、化合物濃度を10nM、12.5nM及び15nMとした以外は、実施例9と同様にして、ラパマイシンの標的分子の同定を行った。 その結果、ラパマイシンの標的分子であるTORキナーゼをコードする遺伝子TOR1の破壊株が、10nM、12.5nM及び15nMの化合物濃度で、感受性を示す株として見出された。 以上の結果より、BF-YKO、SBF-YKOを用いることで、低濃度のロバスタチンを用いた場合でも、標的分子が見出されること、および作用機序予測が可能であることが示された。特に、SBF-YKOを用いることで、化合物濃度が3.125μMという低濃度であっても、標的分子が見出されること、および作用機序予測が可能なことが示された。また、SBF-YKOを用いることで、YKOと比較して1/10の低濃度のラパマイシンを用いた場合でも、標的分子が見出されること、および作用機序予測が可能であることが示された。 Industrial Applicability 本発明の酵母細胞セットは、高感度な、標的候補分子の同定、作用機序の解析、スクリーニングに好適に適用することができ、産業上の極めて有用である。","source":"WIPO_FULLTEXT","data_format":"ORIGINAL"}},"description_lang":["ja"],"has_description":true,"has_docdb":true,"has_inpadoc":true,"has_full_text":true,"biblio_lang":"ja"},"jurisdiction":"WO","collections":[],"usersTags":[],"lensId":"047-294-569-900-858","publicationKey":"WO_2008_156048_A1","displayKey":"WO 2008/156048 A1","docAssets":{"lensId":"047-294-569-900-858","pdfUrl":"https://www.lens.org/images/patent/WO/2008156048/A1/WO_2008_156048_A1.pdf","images":[{"thumb":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/10pc/00000001.png","full":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/full/00000001.png"},{"thumb":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/10pc/00000002.png","full":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/full/00000002.png"},{"thumb":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/10pc/00000003.png","full":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/full/00000003.png"},{"thumb":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/10pc/00000004.png","full":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/full/00000004.png"},{"thumb":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/10pc/00000005.png","full":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/full/00000005.png"},{"thumb":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/10pc/00000006.png","full":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/full/00000006.png"},{"thumb":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/10pc/00000007.png","full":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/full/00000007.png"},{"thumb":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/10pc/00000008.png","full":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/full/00000008.png"},{"thumb":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/10pc/00000009.png","full":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/full/00000009.png"},{"thumb":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/10pc/00000010.png","full":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/full/00000010.png"},{"thumb":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/10pc/00000011.png","full":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/full/00000011.png"},{"thumb":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/10pc/00000012.png","full":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/full/00000012.png"},{"thumb":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/10pc/00000013.png","full":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/full/00000013.png"},{"thumb":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/10pc/00000014.png","full":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/full/00000014.png"},{"thumb":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/10pc/00000015.png","full":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/full/00000015.png"},{"thumb":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/10pc/00000016.png","full":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/full/00000016.png"},{"thumb":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/10pc/00000017.png","full":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/full/00000017.png"},{"thumb":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/10pc/00000018.png","full":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/full/00000018.png"},{"thumb":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/10pc/00000019.png","full":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/full/00000019.png"},{"thumb":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/10pc/00000020.png","full":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/full/00000020.png"},{"thumb":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/10pc/00000021.png","full":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/full/00000021.png"},{"thumb":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/10pc/00000022.png","full":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/full/00000022.png"},{"thumb":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/10pc/00000023.png","full":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/full/00000023.png"},{"thumb":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/10pc/00000024.png","full":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/full/00000024.png"},{"thumb":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/10pc/00000025.png","full":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/full/00000025.png"},{"thumb":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/10pc/00000026.png","full":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/full/00000026.png"},{"thumb":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/10pc/00000027.png","full":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/full/00000027.png"},{"thumb":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/10pc/00000028.png","full":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/full/00000028.png"},{"thumb":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/10pc/00000029.png","full":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/full/00000029.png"},{"thumb":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/10pc/00000030.png","full":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/full/00000030.png"},{"thumb":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/10pc/00000031.png","full":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/full/00000031.png"},{"thumb":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/10pc/00000032.png","full":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/full/00000032.png"},{"thumb":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/10pc/00000033.png","full":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/full/00000033.png"},{"thumb":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/10pc/00000034.png","full":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/full/00000034.png"},{"thumb":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/10pc/00000035.png","full":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/full/00000035.png"},{"thumb":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/10pc/00000036.png","full":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/full/00000036.png"},{"thumb":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/10pc/00000037.png","full":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/full/00000037.png"},{"thumb":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/10pc/00000038.png","full":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/full/00000038.png"},{"thumb":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/10pc/00000039.png","full":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/full/00000039.png"},{"thumb":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/10pc/00000040.png","full":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/full/00000040.png"},{"thumb":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/10pc/00000041.png","full":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/full/00000041.png"},{"thumb":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/10pc/00000042.png","full":"https://s3-us-west-2.amazonaws.com/lens-resource/patent/WO/A1/2008156/2008156048/image/page/full/00000042.png"}],"fallover":false},"countryName":"WIPO (P.C.T.)","inventorModel":{"inventors":[{"name":{"value":"TSUKAHARA KAPPEI","valueNormalised":"Tsukahara Kappei"},"inventorship":null},{"name":{"value":"MITSUHASHI KAORU","valueNormalised":"Mitsuhashi Kaoru"},"inventorship":null},{"name":{"value":"IIDA MAKIYO","valueNormalised":"Iida Makiyo"},"inventorship":null}],"inventorships":[],"unmatchedInventorships":[],"activeUserHasInventorship":false},"simpleFamilyId":194501980,"citesPatentCount":4,"countrySpec":{"countryName":"WIPO (P.C.T.)","description":"INTERNATIONAL APPLICATION PUBLISHED WITH INTERNATIONAL Search Report","rule":"","docType":"PATENT_APPLICATION"},"pageTitle":"WO 2008/156048 A1 - Set Of Yeast Cells, Method Of Identifying Target Candidate Molecule, Method Of Analyzing Action Mechanism And Screening Method","documentTitle":"Set Of Yeast Cells, Method Of Identifying Target Candidate Molecule, Method Of Analyzing Action Mechanism And Screening Method"},"claims":{"source":"xml_claims","claims":[{"lines":[" 2種以上の酵母細胞からなる酵母細胞セットであって、前記2種以上の酵母細胞の各々が相互に異なる遺伝子の少なくとも1つの遺伝子を欠損又は変異し、かつ、前記2種以上の酵母細胞のすべてが薬物感受性関連遺伝子の少なくとも1種を発現制御された薬物高感受性酵母細胞である酵母細胞セット。"],"number":1,"annotation":false,"claim":true,"title":false},{"lines":[" 前記薬物感受性関連遺伝子が、トランスポーター関連遺伝子及びエルゴステロール合成関連遺伝子から選ばれる少なくとも1種であることを特徴とする請求項1に記載の酵母細胞セット。"],"number":2,"annotation":false,"claim":true,"title":false},{"lines":[" 前記トランスポーター関連遺伝子が、PDR1及びPDR3であることを特徴とする請求項2に記載の酵母細胞セット。"],"number":3,"annotation":false,"claim":true,"title":false},{"lines":[" 前記エルゴステロール合成関連遺伝子が、ERG6又はERG3であることを特徴とする請求項2に記載の酵母細胞セット。"],"number":4,"annotation":false,"claim":true,"title":false},{"lines":[" 前記トランスポーター関連遺伝子は、前記トランスポーター関連遺伝子の欠損によって発現制御され、かつ、前記エルゴステロール合成関連遺伝子は、前記エルゴステロール合成関連遺伝子の転写調節によって発現制御されることを特徴とする請求項2に記載の酵母細胞セット。"],"number":5,"annotation":false,"claim":true,"title":false},{"lines":[" 前記酵母細胞は、二倍体であることを特徴とする請求項1に記載の酵母細胞セット。"],"number":6,"annotation":false,"claim":true,"title":false},{"lines":[" 被検物質の標的候補分子を同定する方法であって、
\n 請求項1に記載の酵母細胞セットに含まれる酵母細胞と、前記被検物質とを接触させる工程と、
\n 前記被検物質との接触により表現型が変化した酵母細胞を選択する工程と、
\n 前記選択された酵母細胞において変異している遺伝子を、第1の遺伝子と同定する工程と、
\n 前記第1の遺伝子の転写産物及び翻訳産物の少なくとも一方を、前記被検物質の標的候補分子と同定する工程と、
\nを含む標的候補分子同定方法。"],"number":7,"annotation":false,"claim":true,"title":false},{"lines":[" 被検物質の標的候補分子を同定する方法であって、
\n 請求項1に記載の酵母細胞セットに含まれる酵母細胞と、前記被検物質とを接触させる工程と、
\n 前記被検物質との接触により表現型が変化した酵母細胞を選択する工程と、
\n 前記選択された酵母細胞において欠損又は変異している遺伝子を、第1の遺伝子と同定する工程と、
\n 前記第1の遺伝子と対立遺伝子の関係にある遺伝子を、第2の遺伝子として同定する工程と、
\n 前記第2の遺伝子の転写産物及び翻訳産物の少なくとも一方を、前記被検物質の標的候補分子と同定する工程と、
\nを含む標的候補分子同定方法。"],"number":8,"annotation":false,"claim":true,"title":false},{"lines":[" 被検物質の標的候補分子を同定する方法であって、
\n 請求項1に記載の酵母細胞セットに含まれる酵母細胞と、前記被検物質とを接触させる工程と、
\n 前記被検物質との接触により表現型が変化した酵母細胞を選択する工程と、
\n 前記選択された酵母細胞において欠損又は変異している遺伝子を、第1の遺伝子と同定する工程と、
\n 前記第1の遺伝子と合成致死の関係にある遺伝子を、第2の遺伝子として同定する工程と、
\n 前記第2の遺伝子の転写産物及び翻訳産物の少なくとも一方を、前記被検物質の標的候補分子と同定する工程と、
\nを含む標的候補分子同定方法。"],"number":9,"annotation":false,"claim":true,"title":false},{"lines":[" 前記表現型の変化は、致死又は増殖抑制であることを特徴とする請求項7~請求項9のいずれか1項に記載の標的候補分子同定方法。"],"number":10,"annotation":false,"claim":true,"title":false},{"lines":[" 前記酵母細胞を選択する工程が、
\n(1)前記被検物質非存在下における細胞数に関する指標の時間に対するコントロール曲線の関数F(t)と、前記被検物質存在下における細胞数に関する指標の時間に対するテスト曲線の関数G(t)と、を入手する工程と、
\n(2)式(F(t)-G(t))の積分値を算出して、エリア値を得る工程と、
\n(3)前記エリア値をもとに、表現型が変化した酵母細胞を選択する工程と、
\nを含むことを特徴とする請求項10に記載の標的候補分子同定方法。"],"number":11,"annotation":false,"claim":true,"title":false},{"lines":[" 被検物質の酵母細胞に対する作用機序を解析する方法であって、
\n 請求項7~請求項9のいずれか1項に記載の標的候補分子同定方法により、被検物質の標的候補分子を同定する工程と、
\n 前記標的候補分子の機能を同定する工程と、
\n 前記標的候補分子の機能に基づいて、被検物質の酵母細胞に対する作用機序を解析する工程と、
\nを含む被検物質の作用機序解析方法。"],"number":12,"annotation":false,"claim":true,"title":false},{"lines":[" 目的とする分子の機能に影響を与える物質のスクリーニング方法であって、
\n 請求項1に記載の酵母細胞セットに含まれる酵母細胞と、被検物質とを接触させる工程と、
\n 前記被検物質との接触により表現型が変化した酵母細胞を選択する工程と、
\n 前記選択された酵母細胞において変異している遺伝子を、第1の遺伝子と同定する工程と、
\n 前記第1の遺伝子と、前記目的とする分子を転写産物あるいは翻訳産物とする遺伝子とが一致する被検物質を選択する工程と、
\nを含むスクリーニング方法。"],"number":13,"annotation":false,"claim":true,"title":false},{"lines":[" 目的とする分子の機能に影響を与える物質のスクリーニング方法であって、
\n 請求項1に記載の酵母細胞セットに含まれる酵母細胞と、被検物質とを接触させる工程と、
\n 前記被検物質との接触により表現型が変化した酵母細胞を選択する工程と、
\n 前記選択された酵母細胞において欠損又は変異している遺伝子を、第1の遺伝子と同定する工程と、
\n 前記第1の遺伝子と対立遺伝子の関係にある遺伝子を第2の遺伝子として同定する工程と、
\n 前記第2の遺伝子と、前記目的とする分子を転写産物あるいは翻訳産物とする遺伝子とが一致する被検物質を選択する工程と、
\nを含むスクリーニング方法。"],"number":14,"annotation":false,"claim":true,"title":false},{"lines":[" 目的とする分子の機能に影響を与える物質のスクリーニング方法であって、
\n 請求項1に記載の酵母細胞セットに含まれる酵母細胞と、被検物質とを接触させる工程と、
\n 前記被検物質との接触により表現型が変化した酵母細胞を選択する工程と、
\n 前記選択された酵母細胞において欠損又は変異している遺伝子を、第1の遺伝子と同定する工程と、
\n 前記第1の遺伝子と合成致死の関係にある遺伝子を第2の遺伝子として同定する工程と、
\n 前記第2の遺伝子と、前記目的とする分子を転写産物あるいは翻訳産物とする遺伝子とが一致する被検物質を選択する工程と、
\nを含むスクリーニング方法。"],"number":15,"annotation":false,"claim":true,"title":false},{"lines":[" 前記表現型の変化は、致死又は増殖抑制である請求項13~請求項15のいずれか1項に記載のスクリーニング方法。"],"number":16,"annotation":false,"claim":true,"title":false},{"lines":[" 前記酵母細胞を選択する工程が、
\n(1)前記被検物質非存在下における細胞数に関する指標の時間に対するコントロール曲線の関数F(t)と、前記被検物質存在下における細胞数に関する指標の時間に対するテスト曲線の関数G(t)と、を入手する工程と、
\n(2)式(F(t)-G(t))の積分値を算出して、エリア値を得る工程と、
\n(3)前記エリア値をもとに、表現型が変化した酵母細胞を選択する工程と、
\nを含むことを特徴とする請求項16に記載のスクリーニング方法。
\n "],"number":17,"annotation":false,"claim":true,"title":false}]}},"filters":{"npl":[],"notNpl":[],"applicant":[],"notApplicant":[],"inventor":[],"notInventor":[],"owner":[],"notOwner":[],"tags":[],"dates":[],"types":[],"notTypes":[],"j":[],"notJ":[],"fj":[],"notFj":[],"classIpcr":[],"notClassIpcr":[],"classNat":[],"notClassNat":[],"classCpc":[],"notClassCpc":[],"so":[],"notSo":[],"sat":[]},"sequenceFilters":{"s":"SEQIDNO","d":"ASCENDING","p":0,"n":10,"sp":[],"si":[],"len":[],"t":[],"loc":[]}}